五環(huán)三萜類衍生物合成及抑制PL活性研究.pdf

1、當(dāng)前，肥胖在全球迅速增多，引起了人們極大的關(guān)注，它容易導(dǎo)致許多代謝疾病，嚴(yán)重地危害著人類的公共健康水平。近幾十年來，研究人員對(duì)肥胖產(chǎn)生機(jī)制和治療方法進(jìn)行了大量研究，結(jié)果表明抑制胰脂肪酶（Pancreatic Lipase, PL）活性是治療肥胖最廣泛使用的方法之一。目前，PL抑制劑代表藥物只有奧利司他（Orlistat）一種，且具有一定毒副作用，尤其是可造成肝損傷，因此，開發(fā)安全、有效、無毒副作用并能長(zhǎng)期服用的PL抑制劑成為肥胖研究領(lǐng)域

2、的一個(gè)熱點(diǎn)。盡管目前科研人員已從豐富的天然產(chǎn)物資源中獲得大量的PL抑制劑，如萜類、皂苷類、多酚類、黃酮類等，但大部分抑制劑或活性不高，或生物利用度不高，因此發(fā)現(xiàn)或?qū)ΜF(xiàn)有PL抑制劑進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，從而獲得高效、低毒且具有靶向性抑酶活性的化合物成為新型抑制PL藥物研究與開發(fā)的首要任務(wù)。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期建立了PL酶活測(cè)定方法并進(jìn)行了驗(yàn)證，并對(duì)一些中藥材提取物進(jìn)行了篩選，但篩選出的抑制劑要么活性不高，要么可修飾基團(tuán)較多，不易做為目標(biāo)化合物

3、進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾。本論文在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，首先通過調(diào)研大量文獻(xiàn)，篩選出具有良好抑酶活性、來源廣泛，且易于結(jié)構(gòu)修飾的熊果酸（Ursolic acid, UA）、齊墩果酸（Oleanolic acid, OA）和山楂酸（Maslinic acid, MA）3種三萜類化合物作為研究對(duì)象，并對(duì)其進(jìn)行抑酶活性確認(rèn)，以及通過分子模擬選擇出C-28位作為結(jié)構(gòu)改造對(duì)象。然后，結(jié)合Orlistat及抗生素作用特點(diǎn)，在該3種化合物C-28位加入?-內(nèi)酯或?,?

4、-不飽和酯結(jié)構(gòu)，使其親電碳原子與PL活性中心的絲氨酸上的羥基氧原子共價(jià)結(jié)合，以期由可逆抑制轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢赡嬉种?，大大提高抑酶活性，結(jié)果活性大大提高，但并未形成共價(jià)鍵。最后，選擇抑酶活性最高衍生物進(jìn)一步進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以期達(dá)到形成共價(jià)鍵目的。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：
　　1．在前期實(shí)驗(yàn)及大量文獻(xiàn)調(diào)研基礎(chǔ)上，對(duì)篩選出的具有較好抑酶活性的目標(biāo)化合物UA、OA、MA進(jìn)行抑酶活性驗(yàn)證。第一，進(jìn)行體外酶活測(cè)定實(shí)驗(yàn)，得到3種化合物的IC50值分別為3

5、2?g/mL、44?g/mL和54?g/mL；第二，測(cè)定3種化合物抑制類型，結(jié)果分別為競(jìng)爭(zhēng)型抑制、混合型抑制和混合型抑制；第三，通過分子對(duì)接選擇C-28位的羧基基團(tuán)作為改造對(duì)象。
　　2．3種化合物?,?-不飽和酯的合成及活性研究。第一，以UA、OA、MA為原料，與溴代α,β-不飽和酯化合，合成了3種三萜類?,?-不飽和酯衍生物，通過1H NMR、13C NMR、MS表征，確認(rèn)三者均為新化合物。第二，通過體外酶活測(cè)定，三種化合物I

6、C50值分別為9.1?g/mL、10.8?g/mL和25.0?g/mL，其抑酶活性比原化合物分別提高了4.4、5.1、2.7倍，且都為可逆抑制，并未與PL形成共價(jià)結(jié)合，其抑制類型分別為競(jìng)爭(zhēng)型抑制、混合型抑制和反競(jìng)爭(zhēng)型抑制。
　　3．3種化合物?-內(nèi)酯衍生物的合成及活性研究。第一，以乙烯基乙酸為原料，通過與溴素進(jìn)行溴代內(nèi)酯化反應(yīng)合成了所需的中間體γ-溴代-β-內(nèi)酯化合物，然后再分別與UA、OA、MA化合物反應(yīng)，合成了3種三萜類?-內(nèi)

7、酯衍生物，通過1H NMR、13C NMR、MS表征，確認(rèn)三者均為新化合物。第二，通過體外酶活測(cè)定，三種化合物IC50值分別為7.2?g/mL、31.2?g/mL和70.0?g/mL，其中UA和OA對(duì)應(yīng)衍生物抑酶活性比原化合物分別提高了5.4、1.7倍，MA衍生物的抑制PL活性降低了，且三者都為可逆作用，并未與PL形成共價(jià)結(jié)合，其抑制類型分別為混合型、競(jìng)爭(zhēng)型和混合型。
　　4．結(jié)合第2、3部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，六種衍生物都未與PL形成共價(jià)

8、結(jié)合，本部分選擇具有最高抑酶活性的UA?-內(nèi)酯衍生物進(jìn)一步進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以期達(dá)到與PL形成共價(jià)結(jié)合的目的。第一，通過分子對(duì)接，發(fā)現(xiàn)最高活性衍生物UA-?-內(nèi)酯離PL活性中心基團(tuán)較遠(yuǎn)。第二，以UA為原料，對(duì)其C-28位羧基進(jìn)行延長(zhǎng)改造，并與前所合成的中間體γ-溴代-β-內(nèi)酯化合物反應(yīng)，最終合成了5種三萜類衍生物，并經(jīng)1H NMR譜確認(rèn)，且確定最終產(chǎn)物為一新化合物。第三，通過體外酶活測(cè)定，五種化合物IC50值分別為36?g/mL、35.2?