利用細胞信號轉(zhuǎn)導和通訊機制檢測胰高血糖素和皮質(zhì)醇.pdf

1、本論文共分為三部分： 第一章我們通過雙酶催化熒光分光光度計的方法實現(xiàn)了對葡萄糖的定量測定。我們運用了酶對底物的高選擇性，GOD-HRP-ADHP反應體系催化無熒光的底物ADHP生成有熒光產(chǎn)物試鹵靈的原理，葡萄糖被葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase,GOD)催化生成過氧化氫(H<,2>O<,2>)，過氧化氫和10-乙?；?3，7，二羥基吩嗪(10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine,ADHP)在

2、過氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)催化下產(chǎn)生熒光產(chǎn)物試鹵靈。在此基礎(chǔ)上，對激發(fā)波長、GOD的比活力、HRP的比活力、孵育時間等方面進行了最佳實驗條件的討論：最后在最佳實驗條件下確定了雙酶催化熒光底物檢測葡萄糖的標準曲線、線性范圍和檢測限。 第二章中，我們研究了利用細胞信號轉(zhuǎn)導機制實驗了對胰高血糖素的定量檢測。方法原理是：當胰高血糖素與細胞膜上專一性的蛋白質(zhì)受體結(jié)合后，細胞膜上與受體偶聯(lián)的腺苷酸環(huán)化酶

3、催化ATP分解為cAMP和焦磷酸。由于細胞內(nèi)cAMP濃度增高，最終引起糖原分解，使磷酸葡萄糖的含量急劇增加，以葡萄糖的形式釋放到細胞外。再通過雙酶(GOD-HRP-ADHP)催化反應測定肝細胞釋放的葡萄糖測定溶液中的胰高血糖素的濃度。較高的細胞密度可以獲得較高的信號放大倍數(shù)。以細胞密度為1.0×10<'6>個/mL的細胞的反應體系作為細胞傳感器時，胰高血糖素的濃度信號被放大了約50倍。 第三章中，我們利用細胞信號轉(zhuǎn)導和通訊機制實