云芝多糖分離、純化、藥理活性及其作用機(jī)制研究.pdf

1、該課題針對(duì)目前云芝及云芝多糖的研究中存在的問題進(jìn)行了深入的研究.通過查閱二百多篇的相關(guān)文獻(xiàn)了解了云芝的研究與應(yīng)用概況及存在的相關(guān)問題.通過對(duì)云芝中主要活性成分云芝多糖的工藝提提取研究,建立了苯酚硫酸法的多糖含量檢測(cè)指標(biāo).利用二種提取方法,通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了三因素、四水平的工藝選擇條件,確定云芝多糖合理的提取工藝,通過DEAE-Sepharose CL-6B等技術(shù)純化了云芝多糖.以HPLC、電泳、Sepharose CL-6B等多種技術(shù)方

2、法確定了均一多糖P-I,以不同規(guī)格Dextram為標(biāo)準(zhǔn)物,通過HPLC等檢測(cè)技術(shù),測(cè)得P-I的分子量39kD.并對(duì)P-I多糖組成進(jìn)行了分析研究.通過不同給藥途徑研究了云芝多糖有效的給藥途徑;通過蛋白酶水解法研究了與云芝多糖結(jié)合的蛋白質(zhì)對(duì)其相關(guān)活性的影響;通過高碘酸鹽氧化的方法研究了云芝多糖環(huán)型結(jié)構(gòu)與活性的相關(guān)性;通過對(duì)其變態(tài)反應(yīng)性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究了其免疫調(diào)節(jié)作用;通過細(xì)胞因子TNF、IL-1;IL-2;以及IFN-r、Mφ、NK自然殺傷

3、活性細(xì)胞等研究,探討了云芝多糖的多種藥理活性的初步作用機(jī)理,并且進(jìn)一步確定影響云芝多糖活性的相關(guān)因素及作用靶點(diǎn).該項(xiàng)研究證明:1.目前應(yīng)用的云芝多糖主要有三種來源.a.云芝子實(shí)體中提取的多糖,簡(jiǎn)稱CVPS:b.以菌株-CM101(由日本Kureha公司)經(jīng)深層發(fā)酵培養(yǎng)菌絲體中提取分離得到的結(jié)合有蛋白質(zhì)的多糖,簡(jiǎn)稱PSK(商品名krestin);C.由上海師范大學(xué)生物系以菌株-COV-1經(jīng)深層發(fā)酵培養(yǎng)而獲得的菌絲體糖蛋白的混合物,簡(jiǎn)稱為P

4、SP.2.從長(zhǎng)白山區(qū)產(chǎn)的云芝子實(shí)體中分離、純化得到又一種新的均一多糖P-I,確定了其分子量及糖的組成.3=活性實(shí)驗(yàn)證明云芝多糖經(jīng)注射給藥可產(chǎn)生更為明顯的藥理作用;其作用與所含的蛋白質(zhì)相關(guān)性不明顯;經(jīng)高碘酸鹽氧化開環(huán)后,其活性明顯降低.4.云芝多糖具有較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)作用,而未發(fā)現(xiàn)有所謂的免疫調(diào)節(jié)作用;5.云芝多糖的藥理活性的作用基礎(chǔ)應(yīng)歸類于免疫激活或免疫增強(qiáng)的范疇.6.云芝多糖的免疫增強(qiáng)作用是其最主要的藥理作用,主要通過促進(jìn)細(xì)胞因子的生成