狗肝菜多糖分離純化及保肝作用研究.pdf

1、狗肝菜為爵床科植物狗肝菜屬狗肝菜Dicliptera chinensis(L.)Nees的全草,具有清熱解毒、涼血、生津、利尿等功效,用于治療肺熱咳嗽、咳血、急性肝炎等癥。狗肝菜主要成分為多糖,本文就以狗肝菜多糖為研究對(duì)象,分離純化多糖并探討其保肝作用。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1.狗肝菜多糖保肝有效部位篩選。提取狗肝菜總多糖,運(yùn)用不同截留分子量透析帶,采用透析的方法將總多糖分為分子量小于2000Da(小于2kDa)、分子量小于60

2、00Da多糖組(小于6kDa組),分子量大于6000Da小于10000Da多糖組(6k-10kDa組)和分子量大于10000Da多糖組(大于10kDa組),建立撲熱息痛、酒精致小鼠急性肝損傷和D-半乳糖胺致大鼠急性肝損傷模型,測(cè)定動(dòng)物血清ALT、AST,肝組織GSH、GST、SOD、GSH-Px,結(jié)合肝組織病理學(xué)檢查,確定其有效部位。結(jié)果顯示:
　　(1)撲熱息痛致小鼠急性肝損傷模型中,與模型組對(duì)比,狗肝菜多糖各給藥組能降低血清中

3、ALT、AST含量(p<0.01或p<0.05),各給藥組均能明顯降低肝勻漿中的MDA,升高肝勻漿中的GSH和SOD活力(p<0.01或p<0.05)。
　　(2)酒精致小鼠急性肝損傷模型中,與模型組對(duì)比,狗肝菜多糖各給藥組能降低血清中ALT、AST含量(p<0.01或p<0.05),能顯著降低MDA含量(p<0.01),提高GST活力(p<0.05)。
　　(3)D-半乳糖胺致大鼠急性肝損傷模型中,與模型組相比,狗肝菜多糖

4、各給藥組能降低血清中ALT、AST含量(p<0.01或p<0.05),能顯著降低MDA含量(p<0.01),提高GSH-Px活力(p<0.05)。
　　病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)狗肝菜多糖各給藥組能不同程度改善肝細(xì)胞腫脹,脂肪變性和肝細(xì)胞壞死,其中以小于6kDa組作用最明顯。
　　2.狗肝菜多糖分子量小于6kDa部位抗肝纖維化研究。采用四氯化碳腹腔注射方法,每隔3天一次,共8周制作大鼠肝纖維化模型,設(shè)立正常組、模型組、甘草甜素組(3

5、0mg/kg)、復(fù)方鱉甲軟肝片組(600mg/kg)、狗肝菜多糖分子量小于6kDa組(小于6kDa組,120mg/kg)、甘草甜素與多糖聯(lián)用組((30+120)mg/kg),每天給藥,8周后處死大鼠,留取大鼠肝臟和血清測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示:與模型組相比,各給藥組均能顯著降低血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ含量(p<0.01),降低肝組織勻漿中Hyp、TGF-β1含量(p<0.01或p<0.05)。病理組織學(xué)檢查采用HE染色和Ma

6、sson染色,結(jié)果顯示各給藥組肝纖維化均有不同程度的改善,纖維間隔變窄,結(jié)締組織增生減少,炎性浸潤(rùn)程度減輕,其中以聯(lián)用組最為明顯,脂肪變性基本消失,肝組織結(jié)構(gòu)趨向正常。
　　3.狗肝菜多糖分子量小于6kDa部位的分離純化。分子量小于6kDa多糖經(jīng)DEAE-52陰離子交換柱梯度洗脫,分離得到四個(gè)組分:P1、P2、P3、P4。四個(gè)組分分別經(jīng)SephadexG-50凝膠柱層析進(jìn)一步純化,分別得到四個(gè)亞組分:P1A、P2A、P3A、P4A

7、。凝膠滲透色譜測(cè)定分子量得出四個(gè)亞組分分子量分別是:2339Da、1674Da、2374Da、4999Da。單糖組成結(jié)果顯示:P1A和P3A均含有6種單糖,分別是rha,ara,xyl,man,glu,gal;P2A含有5種單糖,分別是rha,ara,man,glu,gal;P4A含有4種單糖,分別是rha,man,glu,gal。
　　4.P1A組分的結(jié)構(gòu)分析。通過部分酸水解、高碘酸氧化和Smith降解、IR、1H-NMR及13

8、C-NMR分析結(jié)果推斷:P1A的主鏈單糖殘基為鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,末端殘基和分支單糖殘基為阿拉伯糖和木糖;P1A中含有能產(chǎn)生甲酸的1-、1,6-鍵型和非還原末端,也含有可消耗NaIO4不產(chǎn)生甲酸的l,2-和1,4-鍵型,此兩種鍵型比例大約為1:2?？裳趸I型占45％,不可氧化鍵型主要是1,3-鍵,占55%。由Smith降解分析得P1A中甘露糖、葡萄糖、半乳糖,主要以1→3糖苷鍵相連;鼠李糖、阿拉伯糖、木糖主要以l,2→和1,