基于酶循環(huán)放大的表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在腫瘤標(biāo)志物檢測中的應(yīng)用研究.pdf

1、本論文主要采用表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測技術(shù)，基于核酸適體與目標(biāo)分子的特異性結(jié)合作用，結(jié)合鏈置換循環(huán)放大反應(yīng)技術(shù)及DNA酶切循環(huán)放大技術(shù)，利用納米金生物條碼技術(shù)，建立了DNA、溶菌酶和腫瘤細(xì)胞等多種生物活性分子的高靈敏度、高選擇性的傳感分析檢測的新方法，并為對其它生物分子的檢測提供基礎(chǔ)性研究資料。本論文的研究內(nèi)容主要包括以下幾個(gè)方面:
　　1.本實(shí)驗(yàn)將內(nèi)切酶循環(huán)放大與鏈置換循環(huán)放大反應(yīng)相結(jié)合構(gòu)建了一種表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測DNA的新方法。

2、以金片為檢測基底，拉曼信號標(biāo)記的金納米顆粒為檢測探針，實(shí)現(xiàn)了DNA的高靈敏、高選擇性檢測。該方法通過靶DNA引發(fā)內(nèi)切酶循環(huán)放大及鏈替換循環(huán)放大反應(yīng)，在金基底上產(chǎn)生大量的拉曼探針，使拉曼信號顯著增強(qiáng)，而且實(shí)驗(yàn)中使用磁性納米微球，進(jìn)行磁性分離，有效降低了背景信號值，在定量檢測目標(biāo)DNA時(shí)，檢測限達(dá)2.7×10-14M，該方法操作簡便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、適用范圍廣，通過簡單的改變DNA序列可用于其他代謝物、蛋白質(zhì)，以及生物輔助因子的檢測。<

3、br>　　2.本實(shí)驗(yàn)基于適體與靶蛋白質(zhì)的特異性識別作用，結(jié)合酶循環(huán)放大技術(shù)，提出了靶向激活源頭放大SERS檢測溶菌酶的新方法。該方法通過溶菌酶對適體的靶向識別，引發(fā)了溶菌酶的聚合替換循環(huán)放大和DNA鏈聚合剪切循環(huán)放大，從而得到大量的與溶菌酶含量相關(guān)的帶有拉曼信號標(biāo)記的磁珠-納米金生物條碼探針復(fù)合物，采用表面增強(qiáng)拉曼光譜(SERS)實(shí)現(xiàn)對較低濃度溶菌酶的高靈敏度檢測，檢測限可達(dá)8.3×10-15M，為溶菌酶提供了一個(gè)更加簡便、快速、高靈敏

4、度檢測的途徑，該方法還具有廣泛的適用性，在其它蛋白質(zhì)及腫瘤標(biāo)志物的檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　3.本體系構(gòu)建了一種新型的基于工具酶循環(huán)放大SERS檢測Romas細(xì)胞的方法。通過適體DNA對配體細(xì)胞表面蛋白質(zhì)的高強(qiáng)度特異性結(jié)合，引入酶切循環(huán)放大的方法放大待測拉曼分子信號，并通過金基底，納米金生物條碼等將信號進(jìn)一步加強(qiáng)。最終實(shí)現(xiàn)具有高靈敏度和高選擇性的對靶DNA和淋巴瘤Ramos細(xì)胞的檢測。該方法對靶DNA和淋巴瘤Ramos細(xì)胞