基于酶循環(huán)放大技術(shù)檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物的研究.pdf

1、近年來(lái)，癌癥發(fā)病率不斷增長(zhǎng)，造成的死亡人數(shù)逐年增加，已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類生命健康的一類重大疾病。由于對(duì)腫瘤等的早期病變?nèi)狈?zhǔn)確靈敏的檢測(cè)方法，而且現(xiàn)有的檢測(cè)手段價(jià)格昂貴、操作較為復(fù)雜，所以尋找更高效、簡(jiǎn)捷的檢測(cè)方法對(duì)腫瘤的預(yù)防、診斷、治療和療效觀察等具有重要的研究?jī)r(jià)值。本論文主要采用了具有SERS活性的核-殼結(jié)構(gòu)生物條碼探針、納米技術(shù)、滾環(huán)復(fù)制的酶循環(huán)放大等技術(shù)，使得檢測(cè)信號(hào)得到放大，通過(guò)表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)、電化學(xué)檢測(cè)等方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤

2、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因和生物活性小分子等腫瘤標(biāo)記物的高特異性和高靈敏度檢測(cè)。以下是論文包含的主要內(nèi)容:
　　1.設(shè)計(jì)了一種以CdS修飾的生物條形碼-AuNP作為探針，基于雙鏈特異性核酸酶具有極高的選擇性，能識(shí)別并剪切完全匹配的DNA雙鏈、雜交的RNA/DNA雙鏈中的DNA，所以DSN特異性選擇和切割使CdS修飾的生物條形碼-AuNP釋放到溶液中。通過(guò)生物條碼放大技術(shù)固定CdS納米粒子，結(jié)合陽(yáng)離子陽(yáng)極溶出伏安(ASV)預(yù)富集技術(shù)顯著提高

3、檢測(cè)的靈敏度。該傳感器還可以應(yīng)用于含有mRNA的樣品檢測(cè)中。應(yīng)用此檢測(cè)方法，可以實(shí)現(xiàn)mRNA的高靈敏度和高選擇性的測(cè)定，得到檢測(cè)mRNA的線性范圍是5.0×10-16～1.0×10-10M。線性相關(guān)系數(shù)R2=0.997，檢測(cè)限是1.0×10-16M(3σ)使用本傳感器獲得的檢出限低于文獻(xiàn)很多倍。同時(shí)對(duì)傳感器的選擇性和重復(fù)性進(jìn)行了研究，通過(guò)此傳感器，可以實(shí)現(xiàn)mRNA的分析和檢測(cè)。
　　2.基于生物條碼技術(shù)和酶循環(huán)放大技術(shù)，采用表面拉

4、曼增強(qiáng)技術(shù)，設(shè)計(jì)了一種高靈敏檢測(cè)凝血酶的檢測(cè)技術(shù)方法，構(gòu)建了一種新型的DNA循環(huán)信號(hào)放大分子生物傳感器，把表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)應(yīng)用到DNA循環(huán)放大的檢測(cè)方法中。把核-殼結(jié)構(gòu)作為拉曼信號(hào)分子和增強(qiáng)信號(hào)的底物，制備了一種攜帶有大量拉曼信號(hào)分子的核-殼結(jié)構(gòu)的生物條碼作為拉曼信號(hào)探針。在靶DNA的存在下，引發(fā)了DNA的循環(huán)放大和滾環(huán)復(fù)制，產(chǎn)生了大量的含有重復(fù)序列的DNA長(zhǎng)鏈，可與拉曼探針雜交，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA的循環(huán)放大檢測(cè)，并進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)凝