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文檔簡介
1、希瓦氏菌(Shewanella)是革蘭氏陰性菌,運動桿菌,廣泛分布于環(huán)境中,特別是水產(chǎn)動物及富含蛋白的食品中。波羅的海希瓦氏菌(S.baltica)和腐敗希瓦氏菌(S.putrefaciens)在水產(chǎn)品腐敗中占有主導作用[1,2]。為了研究殼聚糖對希瓦氏菌生物被膜的影響,研究采用微孔板定量檢測法、胞外多糖測定、細菌計數(shù)法和掃描電鏡觀測等方法,分析了體外培養(yǎng)希瓦氏菌生物被膜形成特性和殼聚糖抗生物被膜的作用。研究主要結果如下:
以
2、波羅的海希瓦氏菌S.baltica和腐敗希瓦氏菌S.putrefaciens為研究對象,分析兩株細菌體外培養(yǎng)條件下生物被膜形成的特性。結果發(fā)現(xiàn),菌株種類、培養(yǎng)基的選擇、外源葡萄糖、氯化鈉、pH值、黏附材料等因素都會影響生物被膜的形成。相對于S.putrefaciens,S.baltica生物被膜形成能力更高,在TSB、LB、TYE三種培養(yǎng)基中TSB肉湯中更利于生物被膜形成;0.5~0.75%濃度的葡萄糖促進生物被膜的形成,而對細菌生長無
3、顯著影響;低濃度的NaCl有利于希瓦氏菌生物被膜產(chǎn)生,其中2.0% NaCl添加時希瓦氏菌形成生物被膜最高;相對于玻璃片,希瓦氏菌中更容易在不銹鋼片上形成生物被膜。希瓦氏菌在25℃ TSB中培養(yǎng)2d可形成成熟生物被膜。選擇S.baltica作為研究對象,探討殼聚糖對希瓦氏菌生物被摸形成的影響。
研究可溶性殼聚糖對S.baltica的生物被膜抑制作用,結果發(fā)現(xiàn)殼聚糖對S.baltica的MIC和MIBC分別為0.25 mg/mL
4、和0.02mg/mL,經(jīng)1/2MIC、1/4MIC
和1/8 MIC的殼聚糖溶液處理后,細菌黏附的抑制率分別達到73.69%、46.29%和12.44%;在S.baltica培養(yǎng)的第2d,生物被膜含量減少56.12%、18.7%和9.37%,菌體的代謝活性抑制率為25.95%、20.2%和9.08%,胞外多糖(EPS)抑制率為57.77%、48.36%和22.05%。亞抑菌濃度的殼聚糖能夠明顯抑制生物被膜形成,降低被膜菌的代謝
5、活性。經(jīng)1/2MIC,1/4MIC和1/8 MIC的殼聚糖結合茶多酚溶液處理后,玻璃片上細菌黏附的抑制率90.25%、61.97和26.73%,在培養(yǎng)第2d生物被膜含量減少63.94%、34.95%和19.31%,菌體的代謝活性抑制率為36.49%、30.73%和15.76%,殼聚糖復合亞抑菌濃度茶多酚能顯著增強殼聚糖單獨使用時對S.baltica形成生物被膜的抑制作用。電子掃描顯微鏡(SEM)觀察進一步證實了上訴實驗結果。
6、分析了殼聚糖對S.baltica成熟生物被膜的清除作用。隨著殼聚糖處理濃度的增加和處理時間的延長,殼聚糖對其成熟生物被膜的清除顯著增強。經(jīng)1/2MIC、MIC、2MIC和4MIC殼聚糖中孵育2h時,菌體的代謝活性減少率分別是24.74%、55.16%、68.09%和85.83%。4MIC殼聚糖中孵育2h時,細菌抑制率高達79.47%,EPS減少率超過90%。高濃度殼聚糖能夠有效清除成熟生物被膜,電子掃描顯微鏡(SEM)下觀察到成熟生物被
7、膜受到了嚴重的破壞,胞外分泌物大量減少,被膜菌菌體的形態(tài)出現(xiàn)凹陷、扭曲和變形,抑菌效果明顯。同時殼聚糖結合茶多酚使用增強了對成熟被膜的清除作用,殼聚糖和茶多酚在1/2MIC、MIC、2MIC和4MIC(Ch+TP)對希瓦氏菌在TSB溶液中成熟生物被膜被膜菌的殺菌率分別是23.47%、31.84%、71.25%、84.72%,EPS減少率分別是23.71%、62.18%、73.95%、81.36%。表明兩者存在協(xié)同作用,效果比單獨使用殼聚
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