不同抗菌藥聯(lián)用對雞大腸桿菌生物被膜的清除作用.pdf

1、為探討雞大腸桿菌生物被膜的多重耐藥機制并為其相關(guān)感染的防治提供理論依據(jù)，用雙紙片協(xié)同法對從河南省各地分離出的27株雞大腸桿菌分離株進(jìn)行ESBLs的檢測，用標(biāo)準(zhǔn)微量稀釋法測定13種抗菌藥對臨床分離菌的抗菌活性，并用棋盤法檢測克拉霉素+環(huán)丙沙星、克拉霉素+加替沙星、磷霉素+環(huán)丙沙星、磷霉素+加替沙星對浮游菌的抗菌作用；用改良的平板培養(yǎng)法制備生物被膜，用銀染法鑒定，并用雙紙片協(xié)同法檢測其產(chǎn)ESBLs的倩況，用紫外分光光度計測定ESBLs的活性

2、，并和相應(yīng)的浮游菌進(jìn)行比較；用改良的CBD裝置培養(yǎng)細(xì)菌生物被膜，用試管二倍稀釋法檢測抗菌藥對生物被膜菌的抗菌活性，并用棋盤法檢測克拉霉素+環(huán)丙沙星、克拉霉素+加替沙星、磷霉素+環(huán)丙沙星、磷霉素+加替沙星對被膜菌的作用效果，并和浮游菌作比較；通過觀察克拉霉素和磷霉素對生物被膜形成的影響及對環(huán)丙沙星和加替沙星的增效作用并測定不同藥物濃度組合對生物被膜最小生物被膜抑菌濃度(MBIC)來篩選藥物組合；用篩選出的藥物組合去清除制各好的成熟的細(xì)菌生

3、物被膜，并觀察作用效果。 ESBLs檢測結(jié)果表明，27株雞大腸桿菌臨床菌產(chǎn)ESBLs的有15株，不產(chǎn)ESBLs的有12株，ESBLs檢出率為55.6％，相應(yīng)的浮游菌制備成生物被膜菌后產(chǎn)ESBLs的有19株，不產(chǎn)ESBLs的有8株，ESBLs檢出率為70.4％，其中有四株不產(chǎn)ESBLs的浮游菌在形成生物被膜菌后產(chǎn)生了ESBLs.ESBLs酶活性檢測發(fā)現(xiàn)，浮游菌中ESBLs酶活性是(0.424±0.12)U/mg，而相應(yīng)的生物被膜菌

4、的酶活性是(0.71±0.23)U/mg，生物被膜菌ESBLs活性明顯高于相應(yīng)浮游菌ESBLs活性，是浮游菌的1.73倍。 13種抗菌藥對浮游菌抗菌活性測定結(jié)果表明，產(chǎn)ESBLs的菌株比不產(chǎn)ESBLs的菌株的耐藥性明顯提高，其中在大環(huán)內(nèi)酯類藥物中除了阿奇霉素外，產(chǎn)ESBLs和不產(chǎn)ESBLs菌株的耐藥率均達(dá)100％，在喹諾酮類抗菌藥中，加替沙星抗菌效果最好，產(chǎn)ESBLs茵的耐藥率為8.3％，不產(chǎn)ESBLs菌的耐藥率為0％。棋盤試驗

5、中，克拉霉素+環(huán)丙沙星、克拉霉素+加替沙星呈現(xiàn)無關(guān)和拮抗作用，沒有相加和協(xié)同作用，磷霉素+環(huán)丙沙星、磷霉素+加替沙星呈相加或者協(xié)同作用：13種抗菌藥對被膜菌抗菌活性測定結(jié)果表明，無論菌株是否產(chǎn)ESBLs酶，形成生物被膜菌后的耐藥性均比相應(yīng)的浮游菌增強了4～1024倍，且產(chǎn)酶菌相對于不產(chǎn)酶菌其耐藥性增大的幅度要大。棋盤試驗結(jié)果是克拉霉素+環(huán)丙沙星、克拉霉素+加替沙星呈現(xiàn)相加或協(xié)同作用，且以相加作用為主，磷霉素+環(huán)丙沙星、磷霉素+加替沙星呈

6、相加或者協(xié)同作用。 克拉霉素和磷霉素對BBF形成的影響試驗中，用含0 MIC、1/4 MIC、1/16 MIC克拉霉素和磷霉素藥液TSB培養(yǎng)7d后的生物被膜菌經(jīng)銀染法染色后，在顯微照相系統(tǒng)下發(fā)現(xiàn)：經(jīng)1/4、1/16 MIC藥物處理后的生物被膜結(jié)構(gòu)與OMIC處理組在結(jié)構(gòu)上有明顯不同，經(jīng)藥物處理的細(xì)菌7d后形成的生物被膜菌已經(jīng)不再完整，而是細(xì)碎散在的、沒有規(guī)則的結(jié)構(gòu)，且這種差異表現(xiàn)為濃度相關(guān)性；克拉霉素和磷霉素對環(huán)丙沙星和加替沙星的

7、增效試驗中，經(jīng)克拉霉素或磷霉素處理后，環(huán)丙沙星和加替沙星對大腸桿菌生物被膜的最低生物被膜清除濃度(MBEC)與空白對照相比均顯著降低，表明克拉霉素和磷霉素對環(huán)丙沙星和加替沙星具有增效作用，但未表現(xiàn)出濃度依賴性。比較不同藥物組合對生物被膜的MBEC得出加替沙星+克拉霉素、加替沙星+磷霉素的效果相對來說較環(huán)丙沙星+克拉霉素、環(huán)丙沙星+磷霉素好的結(jié)論。在藥物組合的篩選試驗中，分別測定了加：克(2:1～16:1)、加：磷(2:1～16：1)共8