定位硫酸酯化殼聚糖與蛋白質(zhì)相互作用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)的分離純化不僅是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)、組成、物理化學(xué)性質(zhì)和生物活性研究中一項(xiàng)基礎(chǔ)性工作，在實(shí)際應(yīng)用中也有重要的意義。為了實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的高效分離純化，提高分離純化過程中所用分離介質(zhì)針對目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合活性至關(guān)重要。為了實(shí)現(xiàn)這一目的，研究蛋白質(zhì)及其配體的分子識別機(jī)制至關(guān)重要。糖胺聚糖與蛋白質(zhì)間的相互作用在生命活動(dòng)中有著極為重要的意義。一般認(rèn)為糖胺聚糖和糖胺聚糖結(jié)合蛋白依靠靜電相互作用進(jìn)行選擇性識別與結(jié)合，但也有研究表明靜電相互作用可能不

2、是介導(dǎo)兩者特異性識別的唯一因素，兩者的相互作用可能會(huì)受到糖胺聚糖分子鏈上某些特殊基團(tuán)的調(diào)控。
　　 本研究以官能化位點(diǎn)為切入點(diǎn)，選用一種跟糖胺聚糖結(jié)構(gòu)相似性程度最高的天然多糖--殼聚糖為研究對象，對其進(jìn)行選擇性硫酸酯化，合成各種具有不同硫酸酯化位點(diǎn)的殼聚糖硫酸酯作為糖胺聚糖類似物，通過研究由改變官能化位點(diǎn)所帶來的結(jié)構(gòu)差異對糖胺聚糖/蛋白質(zhì)體系相互作用的影響來考察特殊基團(tuán)在兩者特異性識別中的作用。成功合成了7種定位硫酸酯化殼聚糖并

3、通過紅外光譜、元素分析和13C核磁共振譜表征確認(rèn)了其結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明不同定位硫酸酯化殼聚糖以及肝素的溶菌酶結(jié)合活性存在較大差異。當(dāng)溶菌酶過量時(shí)，硫酸酯化多糖的酯化度越高，其溶菌酶結(jié)合活性反而越低，說明靜電相互作用并不是影響殼聚糖硫酸酯和溶菌酶結(jié)合的唯一因素。雖然多糖/蛋白投料比會(huì)影響兩者的結(jié)合，但6-O-硫酸酯化殼聚糖(6S)在較寬的投料比范圍內(nèi)表現(xiàn)出最高的溶菌酶結(jié)合活性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)硫酸酯化多糖與溶菌酶的初始結(jié)合以及結(jié)合效率

4、與表面凈電荷的多少密切相關(guān)，但結(jié)構(gòu)性差異對兩者之間的后續(xù)結(jié)合有更大的影響。C6-SO3在兩者的相互作用中發(fā)揮了重要作用，可能是溶菌酶結(jié)合的活性位點(diǎn)，因而6S表現(xiàn)出較高的溶菌酶特異性結(jié)合活性。C3-SO3的引入能促進(jìn)殼聚糖硫酸酯與牛血清白蛋白的結(jié)合，但會(huì)干擾殼聚糖硫酸酯與溶菌酶的結(jié)合。此外，總體負(fù)電荷負(fù)載量較高的殼聚糖硫酸酯可以結(jié)合更多的γ-球蛋白。通過N-甲基丙烯酰氧基琥珀酰亞胺在甲基丙烯?；惲蚯杷狨ジ男跃郯滨ケ砻娴慕又酆显诰郯滨ケ?/p>