國產高聚物型色譜填料在高效液相色譜分離領域的應用研究.pdf

1、聚苯乙烯型微米級微球不僅具有優(yōu)良的化學和機械穩(wěn)定性、易功能化、耐清洗和使用壽命長的優(yōu)點，而且具有較高的分離效率，適宜作為高效液相色譜(HPLC)的分離材料，應用于藥物和生化產品等物質的分離分析。國外已有學者對此開展了研究，國內研究尚屬空白。
　　 本文用國產高聚物型色譜柱取代進口色譜柱，研究其在有機酸發(fā)酵液、抗生素藥物和多肽分離分析中的應用，為高聚物型填料在我國醫(yī)藥行業(yè)和生化領域下游分離純化過程中的發(fā)展積累經驗，具有重要的理論意

2、義和實際的應用價值。
　　 國產粒徑單分散的聚苯乙烯－二乙烯基苯(PS-DVB)微球裝填的麥科菲反相高效液相色譜柱(MKF-RP)，克服了早期高聚物基質在有機相中溶脹，柱壓陡增的缺點，而與硅膠基質的性能相似，在有機相中柱壓呈有限的、規(guī)律性的變化。通過高效液相色譜分離5種芳香衍生物(苯酚、4－硝基苯甲醛、硝基苯、苯甲酸乙酯和甲苯)，評價了該MKF-RP色譜柱的分離性能。通過優(yōu)化得到最優(yōu)的色譜分離條件：MKF-RP柱(250mm×4

3、.6mmid.)；流動相A液：水(20％)，流動相B液：乙腈(80％)；流速：0.6mL·min-1；溫度：45℃；檢測波長：254nmUV。在MKF-RP色譜柱上，苯酚進樣量在0.2μg～40μg的范圍內有著良好的線性關系(r=0.9999)，重現(xiàn)性好，分析速度快且準確。
　　 考查了以PS-DVB為基質的麥科菲有機酸柱(MKF-YJS)在流速為0～3mL·min-1之間時，柱壓在0～250bar之間變化，柱壓與流速呈現(xiàn)很好的

4、線性關系，表明填料呈剛性且性狀穩(wěn)定。在MKF-YJS柱上，選擇了5種常見的有機酸標準品(甲酸、L-乳酸、乙酸、琥珀酸和丙酸)進行色譜條件優(yōu)化，得到最優(yōu)分離條件：色譜柱：MKF-YJS(250mm×4.6mmi.d.，5μm)；流動相：A：0.02mol·L-1NH4H2PO4(磷酸溶液調pH至2.5)，B=乙腈，B=3％；流速：1.0 mL·min-1；溫度：25℃；檢測波長：210nm。5種有機酸譜峰都可達到基線分離，對稱性在1.06

5、-1.28之間，分離柱效均大于32000 Plates·m-1。在上述優(yōu)化色譜條件下，MKF-YJS柱能夠實現(xiàn)對琥珀酸發(fā)酵液中9種成分的快速檢測。結果表明，在分離分析有機酸的應用中，MKF-YJS柱相比較于鍵合硅膠柱及進口有機酸柱，具有更優(yōu)良的性能及性價比。在MKF-YJS柱上，琥珀酸進樣量在1μg～240μg之間，線性良好(r=0.9999)。琥珀酸的RSD為0.628％。最低檢測限和最大上樣量分別為0.7μg和240μg。發(fā)酵液中琥

6、珀酸平均回收率為91.76％。
　　 參照國外藥典，將MKF-RP色譜柱應用于土霉素藥物的分離，克服了中國藥典采用的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱所引起的色譜峰拖尾，柱效下降的缺點。通過優(yōu)化得到最優(yōu)色譜條件：色譜柱：MKF-RP(250mm×4.6mmi.d.)；流動相：用200mL水，將45g2-甲基-2-丙醇移入1000mL的容量瓶中，再加入60mL、0.33mol-L-1的磷酸鹽緩沖液(pH7.5)，50mL、10g·L-1的

7、四丁基硫酸氫銨(預先用稀NaOH溶液調節(jié)pH至7.5)和10mL、0.4g·L-1的乙二胺四乙酸鈉(預先用稀NaOH溶液調節(jié)pH至7.5)，并用水稀釋至1000mL，過濾，脫氣；流速：1.0mL·min-1；溫度：60℃；檢測波長：254nm。在優(yōu)化的色譜條件下，土霉素供試品和土霉素標準品HPLC分離的各項參數(shù)均符合國外藥典的要求，分離柱效大于3000。土霉素進樣量在0.1μg～2μg之間，線性良好(r=0.9996)，柱性能穩(wěn)定。土霉

8、素峰面積的RSD為0.13％。
　　 采用高聚物型PS-DVB麥科菲反相高效液相色譜柱(MKF-RP-MH)分離胸腺素α1，這類疏水性基質表面不含鍵合的烷基官能團和殘留的硅羥基，不易產生不可逆的非特性吸附作用，克服了常用C18鍵合硅膠柱分離多肽的負面影響。優(yōu)化色譜條件為：流動相A：0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH7.0或8.0)，流動相B：乙腈，梯度洗脫條件0～20min，0％～10％B，20～40min，10％～30％