豆渣DNA酶解物的制備及其免疫活性研究.pdf

1、核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)是細胞內(nèi)的重要成分，研究表明核糖核酸及其酶解物對免疫系統(tǒng)正常功能、腸道生長發(fā)育、肝組織功能及脂代謝都有重要影響。我國可提供的核酸資源較單一，工業(yè)上主要以廢啤酒酵母作為原料提取RNA，但獲取原料困難，提取率較低，不能滿足市場需要。豆渣中的核酸以核蛋白的形式存在，其含量也不亞于酵母核酸，且豆渣價格低廉，來源豐富，是天然優(yōu)質(zhì)的核酸資源。但目前尚未見有關豆渣RNA提取及功能的相關研究。故本論文

2、以豆渣為原料，對RNA的提取、純化及酶解工藝進行了優(yōu)化，進—步以不同劑量豆渣RNA及酶解物為對象，研究二者對小鼠的細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫功能的影響，比較二者免疫調(diào)節(jié)作用的差異，具體結果如下:
　　 (1)通過單因素試驗和響應面分析試驗對豆渣RNA提取工藝進行優(yōu)化，結果表明:提取溫度為92℃，提取時間為70min，液料比為10∶1，提取液pH5.4為最適提取條件，在此條件下，RNA提取率為0.215％。
　　 (

3、2)比較了無水乙-NaCl，異丙醇-NaCl和LiCl3種不同RNA沉淀劑的純化效果，結果表明異丙醇-NaCl沉淀劑的純化效果最好，最終RNA得率為0.48％且OD260/OD280為1.83。
　　 (3)以酶解物的核苷酸含量和轉(zhuǎn)化率為檢測指標，通過單因素試驗和正交試驗對牛胰RNA酶酶解豆渣RNA的工藝進行優(yōu)化，得到最佳酶解條件為:酶濃度10％，溫度65℃，pH值4.5，時間1h，底物濃度為2％，在此條件下得到的核苷酸含量為2

4、.2mg/mL，轉(zhuǎn)化率達到62.52％。
　　 (4)研究了豆渣RNA和酶解物對小鼠的細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫功能的影響，并比較了兩者的差異。結果表明，與對照組相比，RNA組和酶解物組均顯著增加脾臟指數(shù)，其中酶解物高劑量組脾臟指數(shù)極顯著高于其他各劑量組;同時RNA組和酶解物組的胸腺指數(shù)也有所增加，但與對照組相比，無顯著性差異(P＞0.05）。在細胞免疫方面，與對照組相比，RNA組和酶解物組均能顯著提高小鼠脾淋巴細胞增殖能

5、力。其中，酶解物高劑量組與對照組相比，差異極顯著(P＜0.01)，與RNA組相比，差異顯著(P＜0.05);在遲發(fā)性變態(tài)反應試驗中，RNA和酶解物各劑量組DT反應與對照組比較未見顯著性差異P＞0.05）。在體液免疫方面，與對照組相比，RNA和酶解物各劑量組均能提高小鼠抗體生成細胞數(shù)。其中，RNA組與對照組相比無顯著性差異，酶解物組與對照組相比差異顯著(P＜0.05)，且酶解物高劑量組與對照組相比差異極顯著(P＜0.01);在血清溶血試驗