拮抗根癌土壤桿菌的桃內(nèi)生細(xì)菌的篩選鑒定.pdf

1、桃樹根癌病是由根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens)引起的、嚴(yán)重為害桃生產(chǎn)的一種細(xì)菌性病害。生物防治是目前防控根癌病最有效的方法。植物體內(nèi)存在大量的具有防病、促生、固氮和生物修復(fù)等作用的內(nèi)生細(xì)菌，他們可占據(jù)有利生態(tài)位、誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性、拮抗植物病原菌。本研究的目的是從對(duì)根癌病具有不同抗性的桃樹中分離鑒定內(nèi)生細(xì)菌，并從中篩選拮抗根癌土壤桿菌的高效菌株，從而為桃根癌病的生物防治提供新的生防菌資源。
　　

2、首先，將根癌土壤桿菌接種到4種對(duì)根癌病具有不同抗性的桃樹的枝條上;然后，于接種后不同時(shí)間點(diǎn)收集枝條，并采集根。對(duì)采集的桃枝條和根進(jìn)行表面消毒、研磨后，通過涂布平板分離內(nèi)生細(xì)菌。從抗病種質(zhì)資源“紅根甘肅桃”、根癌病獲得抗性桃單株“西北13-1”、抗病潛力桃單株“中桃抗砧1號(hào)”、感病品種“阿克拉娃”中共分離到635株內(nèi)生細(xì)菌，說明桃樹中存在著豐富的內(nèi)生細(xì)菌資源。分析這4種桃樹的枝條和根內(nèi)生細(xì)菌的菌落豐富度和種群數(shù)量，發(fā)現(xiàn)抗病性不同的桃樹，其

3、內(nèi)生細(xì)菌的菌落豐富度和種群數(shù)量都存在明顯差異。此外，還發(fā)現(xiàn)枝條內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量在接種病原菌A.tumefaciens后顯著上升。這表明桃對(duì)根癌病的不同抗性或許與其內(nèi)生細(xì)菌的菌群組成有關(guān)。
　　采用平板拮抗法、生物測定從分離到的內(nèi)生細(xì)菌中篩選拮抗根癌土壤桿菌的菌株。結(jié)果篩選出兩株抑菌活性較高、具有生防潛力的拮抗菌株10DM4-1和10DI2-2。他們可顯著抑制向日葵根癌瘤的形成，防效分別為86.08％和89.89％。生理生化測定和16S

4、 rDNA測序表明其分別為泛菌（Pantoea deleyi）和腸桿菌(Enterobacter cowanii)。由這兩株拮抗菌可產(chǎn)生明顯的抑菌圈可知，產(chǎn)生抗菌物質(zhì)是其發(fā)揮拮抗作用的機(jī)制之一。
　　為揭示他們具有的其他拮抗作用機(jī)制，對(duì)獲得的兩株拮抗菌進(jìn)行了GFP標(biāo)記，將標(biāo)記菌株10DM4-1-gfp和10DI2-2-gfp灌根番茄后，應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡和平板稀釋法分析其在番茄根部的定殖情況。結(jié)果表明這兩株拮抗菌可在根部細(xì)胞

5、間隙定殖，并且其數(shù)量最后趨于穩(wěn)定。這說明他們?cè)诜迅M織內(nèi)具有良好的生存和定殖能力，可能通過占據(jù)根部有利生態(tài)位拮抗根癌土壤桿菌。
　　總之，本研究從桃樹內(nèi)生細(xì)菌中分離得到兩株能夠拮抗根癌土壤桿菌的拮抗菌10DM4-1和10DI2-2，他們或許可以被開發(fā)成用于防控根癌病的新的生防菌。因此，可以說本研究為利用內(nèi)生細(xì)菌資源進(jìn)行根癌病的生物防治提供了新的思路。此外，迄今為止未見泛菌屬和腸桿菌屬的生防菌防控根癌病的相關(guān)報(bào)道，本研究分離的泛菌