油茶炭疽拮抗內(nèi)生細(xì)菌的篩選、發(fā)酵及抑菌機(jī)理研究.pdf

1、油茶炭疽病(Camellia oleifera anthracnose)是我國油茶產(chǎn)區(qū)的主要病害之一,由膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起。該病常引起落果、落蕾,落果率一般在20％～40％,嚴(yán)重時(shí)達(dá)60％以上,降低了油茶產(chǎn)量。當(dāng)前對(duì)油茶炭疽病的防治主要通過種植抗性品種和化學(xué)防治來控制,但易引發(fā)病原菌抗藥性、環(huán)境污染等,效果不理想。安全、高效的無公害生物防治受到人們的廣泛關(guān)注。本研究從油茶健康葉

2、子中分離篩選出對(duì)油茶炭疽病病菌有抑制作刖的拮抗菌,然后對(duì)防治效果好的生防菌株進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化及抑菌機(jī)理研究,研究結(jié)果如下:
　　 (1)油茶炭疽病拮抗內(nèi)生細(xì)菌的篩選與鑒定。從油茶健康植株分離到內(nèi)生細(xì)菌156株。通過平板對(duì)峙和液體發(fā)酵離體初篩試驗(yàn),得到對(duì)油茶炭疽病菌有抑制作用的菌株9株,抑制率均達(dá)到75％以上。進(jìn)一步通過盆栽活體復(fù)篩,篩到一株強(qiáng)烈抑制油茶炭疽病的拮抗菌株Y13,中南林業(yè)科技大學(xué)菌種保藏號(hào)為CSUFT B0013。結(jié)

3、合菌落形態(tài)、生理生化特征及16S rDNA序列分析,內(nèi)生拮抗菌Y13鑒定是枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis。
　　 (2)油茶炭疽病拮抗內(nèi)生細(xì)菌 Y13的發(fā)酵條件優(yōu)化。單因子試驗(yàn)表明:拮抗菌Y13最佳培養(yǎng)基為NYBD培養(yǎng)基,最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是牛肉膏和酵母膏；在溫度30℃,初始 pH7.0,搖瓶裝液量為50mL,接種量7％,搖床轉(zhuǎn)速140 r/min,發(fā)酵周期72h的條件下可獲得最大抑菌活性。正交試驗(yàn)表明:

4、Y13菌株獲得最大抑菌活性的培養(yǎng)基為葡萄糖25g,酵母膏10g,牛肉膏5g,NaCl濃度為1.2％。菌株獲得最大生長量的培養(yǎng)基為葡萄糖15g,酵母膏10g,牛肉膏3g,NaCl濃度為1.5％。
　　 (3)油茶炭疽病拮抗內(nèi)生細(xì)菌Y13的抑菌機(jī)理研究。拮抗菌Y13連續(xù)轉(zhuǎn)接10次,均具有明顯的抗菌作用,拮抗作用比較穩(wěn)定。Y13能夠抑制油茶炭疽病菌菌絲體的生長和分生孢子的萌發(fā)。同時(shí),Y13對(duì)植物病原真菌有較廣的抑菌譜,對(duì)油茶葉枯病菌、