高海拔土壤中稻瘟病拮抗細菌的篩選及其抗菌機理研究.pdf

1、為了獲得對水稻稻瘟病菌具有拮抗效應的細菌菌株，我們分別從西藏采集了米拉山口、工布江達、達孜縣、比日神山、墨脫縣龍達村、貢嘎縣以及日喀則等七個地區(qū)的地表5-10cm層的土壤，通過土壤梯度稀釋和平板涂布法分離獲得了共計232株形態(tài)各異的細菌菌株，通過平板對峙法分離篩選出了一株對稻瘟病原菌具有較強抑制作用的細菌，通過對該菌株的生理生化測定和分子測定確定了其類型，并對其適宜的碳源、氮源和環(huán)境條件等進行了探究，同時對其發(fā)酵適宜的環(huán)境因素和營養(yǎng)因素

2、進行了研究，在此基礎上探索了發(fā)酵液的穩(wěn)定性和拮抗菌及其發(fā)酵液對病原菌菌絲和孢子的影響。另外，對發(fā)酵液中有效抑菌物質進行了簡單的提取，并完成了對拮抗菌的抑制機理的初步探索。主要結論如下：
　　從西藏地區(qū)的7個不同地點采集的土樣中共分離出232株形態(tài)有差異的細菌，通過初篩和平板對峙法進行復篩，發(fā)現貢嘎縣土樣中有一株具有較強的對稻瘟病有拮抗作用的細菌菌株，相對抑菌效率達到了90％。通過傳統的生理生化鑒定與16rsDNA分子鑒定相結合的方

3、法，確定該菌株為枯草芽孢桿菌屬Bacillus atrophaeus。
　　通過檢測OD600和相對抑菌效率，確定了該拮抗菌最適生長碳源和氮源分別為蔗糖和酵母粉，最適生長溫度為30℃-35℃，生長最適初始pH為7-8。拮抗菌發(fā)酵條件最適碳源為乳糖，最適氮源為谷氨酸鈉，最適發(fā)酵溫度為30℃-35℃，為節(jié)約能源，可選用30℃，最適發(fā)酵初始pH為8。有機氮源的利用效率高于無機氮源，二糖的利用效率高于單糖和多糖。
　　利用不同方法對

4、發(fā)酵液中抑菌物質進行粗提取，發(fā)現有效抑菌物質類型并不單一，可能包括大分子蛋白，低分子肽類等，并且具有較強的極性。通過對發(fā)酵液穩(wěn)定性檢測，發(fā)現抑菌物質對酸堿環(huán)境，紫外輻照不敏感。在40-80℃范圍內，對溫度敏感性不高，抑菌效率無顯著變化，當溫度高于100℃時，相對抑菌效率顯著降低。較好的穩(wěn)定性決定了該拮抗菌具有開發(fā)為生物農藥的潛力。
　　拮抗菌發(fā)酵液對稻瘟病菌絲的生長和孢子的萌發(fā)具有抑制作用。抑菌物質對病原菌細胞膜造成破壞，增大細胞