高海拔土壤中稻瘟病拮抗細(xì)菌的篩選及其抗菌機(jī)理研究.pdf

1、為了獲得對(duì)水稻稻瘟病菌具有拮抗效應(yīng)的細(xì)菌菌株，我們分別從西藏采集了米拉山口、工布江達(dá)、達(dá)孜縣、比日神山、墨脫縣龍達(dá)村、貢嘎縣以及日喀則等七個(gè)地區(qū)的地表5-10cm層的土壤，通過(guò)土壤梯度稀釋和平板涂布法分離獲得了共計(jì)232株形態(tài)各異的細(xì)菌菌株，通過(guò)平板對(duì)峙法分離篩選出了一株對(duì)稻瘟病原菌具有較強(qiáng)抑制作用的細(xì)菌，通過(guò)對(duì)該菌株的生理生化測(cè)定和分子測(cè)定確定了其類(lèi)型，并對(duì)其適宜的碳源、氮源和環(huán)境條件等進(jìn)行了探究，同時(shí)對(duì)其發(fā)酵適宜的環(huán)境因素和營(yíng)養(yǎng)因素

2、進(jìn)行了研究，在此基礎(chǔ)上探索了發(fā)酵液的穩(wěn)定性和拮抗菌及其發(fā)酵液對(duì)病原菌菌絲和孢子的影響。另外，對(duì)發(fā)酵液中有效抑菌物質(zhì)進(jìn)行了簡(jiǎn)單的提取，并完成了對(duì)拮抗菌的抑制機(jī)理的初步探索。主要結(jié)論如下：
　　從西藏地區(qū)的7個(gè)不同地點(diǎn)采集的土樣中共分離出232株形態(tài)有差異的細(xì)菌，通過(guò)初篩和平板對(duì)峙法進(jìn)行復(fù)篩，發(fā)現(xiàn)貢嘎縣土樣中有一株具有較強(qiáng)的對(duì)稻瘟病有拮抗作用的細(xì)菌菌株，相對(duì)抑菌效率達(dá)到了90％。通過(guò)傳統(tǒng)的生理生化鑒定與16rsDNA分子鑒定相結(jié)合的方

3、法，確定該菌株為枯草芽孢桿菌屬Bacillus atrophaeus。
　　通過(guò)檢測(cè)OD600和相對(duì)抑菌效率，確定了該拮抗菌最適生長(zhǎng)碳源和氮源分別為蔗糖和酵母粉，最適生長(zhǎng)溫度為30℃-35℃，生長(zhǎng)最適初始pH為7-8。拮抗菌發(fā)酵條件最適碳源為乳糖，最適氮源為谷氨酸鈉，最適發(fā)酵溫度為30℃-35℃，為節(jié)約能源，可選用30℃，最適發(fā)酵初始pH為8。有機(jī)氮源的利用效率高于無(wú)機(jī)氮源，二糖的利用效率高于單糖和多糖。
　　利用不同方法對(duì)

4、發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)進(jìn)行粗提取，發(fā)現(xiàn)有效抑菌物質(zhì)類(lèi)型并不單一，可能包括大分子蛋白，低分子肽類(lèi)等，并且具有較強(qiáng)的極性。通過(guò)對(duì)發(fā)酵液穩(wěn)定性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)抑菌物質(zhì)對(duì)酸堿環(huán)境，紫外輻照不敏感。在40-80℃范圍內(nèi)，對(duì)溫度敏感性不高，抑菌效率無(wú)顯著變化，當(dāng)溫度高于100℃時(shí)，相對(duì)抑菌效率顯著降低。較好的穩(wěn)定性決定了該拮抗菌具有開(kāi)發(fā)為生物農(nóng)藥的潛力。
　　拮抗菌發(fā)酵液對(duì)稻瘟病菌絲的生長(zhǎng)和孢子的萌發(fā)具有抑制作用。抑菌物質(zhì)對(duì)病原菌細(xì)胞膜造成破壞，增大細(xì)胞