重慶市管網末梢水中有機提取物的雄性生殖毒性及綠茶拮抗作用研究.pdf

1、本研究應用GC/MS分析和整體動物實驗的方法，對重慶市管網末梢水中有機物污染狀況及雄性生殖毒性危害進行了研究。同時鑒于綠茶的抗氧化、抗突變等多方面的保健功能，還同時觀察了綠茶對重慶市管網末梢水中有機提取物對雄性生殖毒性損傷的拮抗效應。 實驗方法： 2003年12月15-23日在本室，采用固相萃取技術(solid-phaseextraction，SPE)，用GDX-102大孔樹脂富集以嘉陵江(重慶段)為源水的2100升管網

2、末梢水中的有機物，運用氣/質(GC/MS)聯用儀對水樣中有機提取物(organicextract,OE)的污染物種類進行分析、測定DBP的含量。其次運用整體動物實驗，研究OE對小鼠雄性生殖系統(tǒng)的影響。同時觀察了綠茶對重慶市管網末梢水中有機提取物對雄性生殖毒性損傷的拮抗效應。 動物實驗：雄性昆明種小鼠100只，按體重隨機分為7組。Ⅰ(二甲基亞砜0.005L/kg，記為DMSO)、Ⅱ(OE12.5L/kg，記為OEl)、Ⅲ(OE25

3、.0L/kg，記為OEm)、Ⅳ(OE50.0L/kg，記為OEh)、Ⅴ(OE50L/kg+2g/L，記為OEh+GTl)、Ⅵ(OE50L/kg+12g/L，記為OEh+GTh)、Ⅶ(環(huán)磷酰胺40mg/kg，記為CP)，Ⅰ溶劑對照、Ⅶ陽性對照組每組10只，其余各組每組16只。其中Ⅴ、Ⅵ綠茶拮抗組染毒前15天飲用綠茶浸出液，其余喂飼條件與各組相同。各組動物分別用上述相應的試劑、劑量染毒小鼠，腹腔注7射連續(xù)5天。 分別在染毒后第15天

4、、35天處死動物取材。用細胞計數板光鏡下計數單位重量附睪精子數量；伊紅染色光鏡下計數精子畸形；放射免疫分析法(RIA)檢測血清中的睪酮(T)的水平，免疫放射分析法測定促卵泡生成素(FSH)的含量；化學比色法測定睪丸組織液中酸性磷酸酶(ACP)和γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)的活性，硫代巴比妥酸法(TBA)檢測睪丸組織液中丙二醛(MDA)的含量；光鏡和電鏡觀察睪丸病理組織學改變。 實驗結果: (一)GC/MS分析結果顯示：管

5、網末梢水水樣共檢出有機污染物17種，鄰苯二甲酸酯類物質含量占整個水樣氣相色譜總峰面積的44.23％。經外標法定量DBP的含量為1.9μg/L。 (二)動物實驗結果： 1.第15天，35天與DMSO組相比，OE組單位重量附睪精子數量降低，其中OEh、CP組與DMSO組相差顯著(P＜0.05)，OEh+GTl、OEh+GTh與OEh相比單位重量附睪精子數增多。 2.第15天精子畸形率顯著升高，OEh、CP組與DMSO

6、組相差極為顯著(P＜0.01)；35天精子畸形率略有降低，但OEh、CP組與DMSO組相差極為顯著(P＜0.01)。OEh+GTh與OEh組比較精子畸形率顯著降低(P＜0.05)。 3.第15天OE組睪酮水平顯著性降低，OEl、OEm組與DMSO組相差極為顯著(P＜0.01)，FSH有升高的趨勢、但組間無顯著性差異(P＞0.05)；OEh+GTh組睪酮含量回升明顯。35天睪酮無明顯改變；除OEl外、與DMSO組相比各組FSH水平

7、顯著性降低(P＜0.05)。 4.第15天，與DMSO組相比各組ACP的活性顯著降低(P＜0.05)，35天后有所回升，僅見OEh、CP組與DMSO組相差顯著(P＜0.05)，15天、35天OEh+GTl組降低程度不大。染毒后第15天γ-GT活性升高，OEh、CP組與DMSO組相差顯著(P＜0.05)，35天γ-GT活性回落，但無顯著性差異(P＞0.05)；第15天、35天MDA的含量未見顯著差異(P＞0.05)。 5.

8、第15天光鏡下改變以生精細胞疏松脫落，數量減少，支持細胞空泡變性為主；35天伴有間質細胞不同程度的增生，OEh+GTl組病變程度略輕于OEh組。第15天電鏡下可見生精細胞胞膜溶解、核固縮；支持細胞胞質腫脹、滑面內質網擴張；間質細胞線粒體嵴腫脹塌陷、脂滴蓄積。35天可見間質細胞、支持細胞、生精細胞病變程度較染毒后第15天輕，細胞功能相對活躍。 實驗結論： 一、GC/MS分析結果顯示重慶市管網末梢水受到有機物污染。主要以PA

9、Es類物質為主，其中對雄性生殖系統(tǒng)具有危害的DBP含量較高。 二、動物實驗研究結果表明，管網末梢水中有機提取物對小鼠雄性生殖系統(tǒng)具有一定程度的毒性。 1.OE可引起單位重量附睪精子數量減少，精子畸形率升高。畸形類型以頭部不定形為主。 2.OE導致小鼠血清中睪酮水平下降，促卵泡生成素水平降低。睪酮水平下降推測可能與睪丸間質細胞受損有關，FSH水平的降低可能是下丘腦-垂體-性腺軸調節(jié)所致。 3.OE可引起AC

10、P酶活性的降低，γ-GT酶活性的升高。前者提示生精上皮變性，后者說明支持細胞功能受損。 4.OE作用后可引起生精細胞、支持細胞、間質細胞廣泛的病理損傷。光鏡下特征性的變化是生精細胞疏松脫落，支持細胞空泡變性，間質細胞增生；電鏡下生精細胞壞死，支持細胞結構破壞，間質細胞線粒體受損、脂滴蓄積。 三、綠茶對管網末梢水中有機提物所誘導的小鼠雄性生殖毒性損傷，具有部分拮抗作用，尤其是對OE引起的精子畸形率的升高有顯著的抑制作用。