高效親和色譜柱填料DYE-P（GMA-EDMA）的制備及其性能評價.pdf

1、單分散交聯(lián)聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯/甲基丙烯酸乙二醇酯P(GMA-EDMA)微球的疏水性比交聯(lián)聚苯乙烯弱且其表面含有豐富的環(huán)氧基，改性后會衍生出大量的羥基，特別適合于生物大分子的分離純化。8微米左右的表面多孔P(GMA-EDMA)微球可作為高效液相色譜柱填料中的基質(zhì)材料。親和色譜是一種高效簡便的蛋白純化分離技術(shù)，高效親和色譜(HPAC)是在經(jīng)典親和色譜技術(shù)上結(jié)合高效液相色譜(HPLC)特點發(fā)展起來的一個新技術(shù)，它具有分離速度快、分析檢測簡單

2、、較好的分離效果和較高的回收率等優(yōu)點，適用于批量樣品的分析和制備。本文將P(GMA-EDMA)微球作為高效液相色譜的基質(zhì)材料，三嗪染料作為擬生物親和配基，兩者耦聯(lián)成為一種新型的染料配基親和色譜填料并將其用于對蛋白質(zhì)純化分離，主要做了以下研究工作： 1，以分散聚合法制備的2微米聚苯乙烯微球為種子，GMA、EDMA為單體，用一步種子溶脹法制備了表面多孔的P(GMA-EDMA)微球。分別研究了制備種子和微球的影響因素，并對微球進行了性

3、能表征。實驗結(jié)果表明，當溶脹倍數(shù)為30左右，交聯(lián)劑含量為45％，單體與致孔劑比為1.25時所制備的微球在7微米左右，粒徑單分散，表面多孔，剛性好，適合用做高效色譜柱填料。 2，以自制P(GMA-EDMA)微球為基球，共價耦聯(lián)兩種染料配基CB F3GA和PBMX-R，制得了兩種高效親和色譜填料PB MX-R-P(GMA-EDMA)和CBF3GA-P(GMA-EDMA)，對其進行性能表征。研究了染料耦合的最佳反應(yīng)條件，實驗表明制得的

4、染料樹脂性能穩(wěn)定，在酸性堿性溶液中沒有泄漏情況。 3，用勻漿法將所制的兩種染料親和色譜填料填裝成高效親和色譜柱，研究了兩種染料親和色譜柱分離蛋白樣品的色譜條件、分離選擇性、穩(wěn)定性、色譜柱柱壓、柱子的樣品負載量和樣品回收率等。 在10×0.46 cm的PB MX-R-P(GMA-EDMA)色譜柱上，探討了pH、流速、離子強度和有機修飾劑對溶菌酶分離的影響，得出目標蛋白溶菌酶的最佳淋洗條件為含1.0 mol/LNaCl、15

5、％乙二醇，pH7.8的Tris-HCl緩沖液為淋洗液，流速為0.5ml/min。在最佳淋洗條件下對不同濃度溶菌酶進行測定，該高效親和色譜柱具有良好的線性、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性等色譜性能。實際應(yīng)用中，它能將雞蛋清樣品中的溶菌酶成功分離。 在25×0.46 cm的CB F3GA-P(GMA-EDMA)色譜柱上，測得溶菌酶在1.0 ml/min流速下的動態(tài)最大吸附量為45.3 mg/ml。牛血清蛋白和溶菌酶蛋白混合標樣在此色譜柱上能很好分離