二氫卟吩e6載藥膠束的制備與評價(jià).pdf

1、聚合物膠團(tuán)系兩親性嵌段或接枝共聚物，在水性介質(zhì)中自發(fā)形成核-膜結(jié)構(gòu)的膠粒，共聚物的疏水片段形成膠粒的內(nèi)核，親水片段形成外膜。聚合物膠團(tuán)的內(nèi)核可以作為疏水性藥物的儲(chǔ)庫，將藥物增溶在核心，外膜可以維持膠團(tuán)在水性環(huán)境中的穩(wěn)定性，對藥物起保護(hù)作用，提高藥物的穩(wěn)定性，聚合物膠團(tuán)對藥物具有緩釋作用。膠團(tuán)特有的納米級粒徑可有效促進(jìn)聚合物膠團(tuán)的“滲透與保留作用”，賦予其被動(dòng)靶向腫瘤組織的功能，同時(shí)通過對聚合物膠團(tuán)表面進(jìn)行配體或抗體修飾可幫助其達(dá)到主動(dòng)靶

2、向的目的。聚合物膠團(tuán)對難溶性藥物、大分子藥物和基因治療藥物在載體給藥方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢，與傳統(tǒng)的低分子量表面活性劑相比，聚合物膠團(tuán)具有更低的臨界膠團(tuán)濃度，因而在體循環(huán)中具有更高的穩(wěn)定性。
　　 本研究以18.0 KDa的低分子量殼聚糖(chitosan oligosaccharide，CSO)為原料，以碳二亞胺為偶合劑，將硬脂酸(stearic acid，SA)的羧基以共價(jià)鍵的形式結(jié)合到殼聚糖鏈的游離氨基上，得到殼聚糖硬脂酸嫁接

3、物(stearic acidgrafted chitosanoligosaccharide copolymer，CSO-SA).以三硝基苯磺酸法測定嫁接物氨基取代度；以芘熒光法測定該嫁接物在水中的臨界膠團(tuán)濃度；以熒光淬滅法測定該嫁接物在水中自聚集后形成的疏水核區(qū)域數(shù)；以微粒粒度及表面電位分析儀測定嫁接物膠團(tuán)在水中的粒徑與表面電位。同時(shí)以光敏劑二氫卟吩e6(chlorin e6，Ce6)為模型藥物，進(jìn)行嫁接物膠團(tuán)載藥性能研究?？疾炷z團(tuán)載藥

4、前后粒徑與表面電位變化，并進(jìn)行包封率測定。以A549為模型細(xì)胞進(jìn)行嫁接物膠團(tuán)的細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)。利用殼聚糖鏈游離氨基和葉酸分子游離羧基的反應(yīng)活性，對殼聚糖硬脂酸嫁接物進(jìn)行葉酸修飾，考察葉酸修飾前后嫁接物膠團(tuán)理化性質(zhì)的變化。以A549(FR=(-))，MCF-7(FR=32％)細(xì)胞系為模型細(xì)胞，考察葉酸修飾對細(xì)胞選擇性攝取嫁接物膠團(tuán)的影響，以二氫卟吩e6為模型藥物，考察葉酸修飾對膠團(tuán)載藥行為和細(xì)胞攝取的影響。
　　 經(jīng)生物酶降解得到重

5、均分子量為18.0 KDa的低分子量殼聚糖在水中具有良好的溶解性。采用偶合反應(yīng)對其進(jìn)行疏水性修飾，得到氨基取代度為4.96％±0.10％的殼聚糖硬脂酸嫁接物(CSO-SA)，在水中的臨界膠團(tuán)濃度為36.27±1.51μg/mL。1.0 mg/mL濃度的嫁接物膠團(tuán)溶液中，單個(gè)CSO-SA分子形成的疏水性微區(qū)域數(shù)為4.55個(gè)。1.0 mg/mL濃度的嫁接物膠團(tuán)溶液，其數(shù)均粒徑為28.9 nm，表面電位為39.1±0.5 mV。
　　

6、 葉酸修飾的殼聚糖硬脂酸嫁接物，可以提高嫁接物在水中的自聚能力，并進(jìn)一步增加單個(gè)嫁接物分子形成的疏水核數(shù)。A549(FR=(-))，MCF-7(FR=32％)細(xì)胞系對嫁接物載藥膠團(tuán)的藥物攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，葉酸分子的表面修飾，使腫瘤細(xì)胞A549對藥物的攝取無明顯影響，但顯著增加了葉酸受體過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞MCF-7(FR=32％)對藥物的攝取百分率。葉酸分子的表面修飾，對Ce6載藥膠團(tuán)的藥物包封率和載藥量無影響，但在一定程度上減少了藥物的體

7、外釋放量。
　　 以Hela細(xì)胞系為模型細(xì)胞，采用四唑藍(lán)比色法考察Ce6包載前后的細(xì)胞毒性.在無光照條件下，Ce6在CSO-SA和FA-CSO-SA包載后，對Hela細(xì)胞的24h半數(shù)致死量增加，說明載藥膠團(tuán)可以降低藥物的毒性。在光照條件下，Ce6、CSO-SA/Ce6和FA-CSO-SA/Ce6對Hela細(xì)胞的毒性作用明顯增加。FA-CSO-SA/Ce6的安全系數(shù)最大，說明采用較小的光敏劑量就可以達(dá)到與游離藥物相當(dāng)?shù)墓鈩?dòng)力效應(yīng)，