二氫卟吩e6聲敏納米脂質(zhì)體制備及體外抗腫瘤試驗.pdf

1、1.目的:
　　聲敏納米脂質(zhì)體(Sound sensitive liposomes)是一種新型藥物載體，可以運(yùn)載藥物至特定組織及器官，并在局部超聲波刺激下釋放藥物，從而達(dá)到靶向快速釋藥的目的，進(jìn)一步提高靶向性及局部給藥濃度。高強(qiáng)度聚焦超聲(HIFU)是一種腫瘤熱療技術(shù)，通過對腫瘤局部實施高強(qiáng)度的定位聚焦超聲而產(chǎn)生以瞬間高溫為主的多重殺傷效應(yīng)，從而殺滅腫瘤細(xì)胞[1]。但由于HIFU的高度定位特性，使實體瘤周邊的腫瘤細(xì)胞無法有效殺傷。

2、納米脂質(zhì)體顆粒還可作為HIFU增敏劑，能有效降低HIFU消融所需的強(qiáng)度閾值，并極大地增強(qiáng)腫瘤治療的效果[2]。磁性普通納米脂質(zhì)體作為一種磁導(dǎo)向新型藥物傳遞系統(tǒng)，可利用外加磁場的引導(dǎo)來改變藥物在體內(nèi)的分布，提高其治療部位的藥物濃度，并降低其他非治療部位的藥物濃度，達(dá)到靶向治療的效果[3]。將二者聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤的治療，可達(dá)到協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞的效果。
　　本研究在前期工作基礎(chǔ)上[4]，選擇聲敏劑二氫卟吩e6(Ce6)為藥物，采用蛋黃卵磷

3、脂(EPC)與膽固醇作為聲敏脂質(zhì)體的膜材，通過正交試驗進(jìn)行處方工藝的優(yōu)化，同時加入油酸改性納米四氧化三鐵，制成Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體（聲敏脂質(zhì)體），進(jìn)行質(zhì)量檢查并評價其靶向性、聲敏特性及細(xì)胞毒性等相關(guān)指標(biāo)，為進(jìn)一步采用微透析技術(shù)進(jìn)行腫瘤局部藥物動力學(xué)及PK-PD結(jié)合模型研究提供劑型支持。
　　2.方法:
　　2.1運(yùn)用紫外分光光度法進(jìn)行Ce6的含量檢測，并進(jìn)行方法學(xué)考察。
　　2.2選擇適當(dāng)?shù)闹苽浞椒ê筒牧现苽浯判月?/p>

4、敏脂質(zhì)體，并通過正交試驗，優(yōu)化處方工藝，對制備得到的Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體進(jìn)行包封率、載藥量、粒徑形態(tài)、磁靶向性和聲敏特性的評價。
　　2.3由于Ce6對人肺腺癌和人乳腺癌具有較好的治療作用，因此分別以人肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞株和人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株為考察對象，試驗中分為單純細(xì)胞組、單純超聲組、二氫卟吩e6組，空白脂質(zhì)體組，單純脂質(zhì)體1（普通脂質(zhì)體:Ce6磁性普通納米脂質(zhì)體），單純脂質(zhì)體2（聲敏脂質(zhì)體:Ce6磁性

5、聲敏納米脂質(zhì)體），聲動力治療組（Ce6溶液+超聲治療），聲動力治療組1（普通脂質(zhì)體+超聲治療），聲動力治療組2（聲敏脂質(zhì)體+超聲治療），采用MTT比色法，考察在不同的超聲參數(shù)下，Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體對腫瘤細(xì)胞的抑制情況，計算抑制率，并與普通脂質(zhì)體及未超聲時進(jìn)行比較?？疾煲陨蟽烧叩目鼓[瘤活性以及各組不同濃度水平的抗腫瘤情況。
　　3結(jié)果
　　3.1根據(jù)藥物性質(zhì)，建立了紫外分光光度計分析方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果表明，其線

6、性范圍及精密度、穩(wěn)定性、回收率等均符合實驗要求。
　　3.2通過對制備方法和制備材料進(jìn)行篩選，本實驗選擇EPC和膽固醇為載體材料，按照薄膜分散-真空冷凍干燥技術(shù)制備，通過正交試驗進(jìn)行篩選、優(yōu)化。
　　3.3確定了制備工藝條件為有機(jī)相三氯甲烷，水化介質(zhì)水，水化時間60min，水化溫度50℃。優(yōu)選的配方工藝條件為藥脂比1∶50，卵磷脂-膽固醇(5∶1)，tween-80用量0.5％，藥磁比1∶2。制備的Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體透

7、射電鏡下呈球形粒子分布，其外觀圓整、大小均一，平均包封率90.28％，滲漏率3.28％，粒徑176.9nm。
　　3.4未經(jīng)超聲時，對比游離Ce6溶液，Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的體外釋放度表現(xiàn)出一定的緩釋效果。當(dāng)采用超聲天使治療儀，固定超聲頻率1.0MHz，與Ce6磁性普通脂質(zhì)體相比，隨著超聲時間(0～150s)和超聲強(qiáng)度(0～2.0 W/cm2)的增加，Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的體外累積釋放度也隨之增大，表現(xiàn)出良好的體外聲敏特性

8、。
　　3.5實驗發(fā)現(xiàn)對于兩種腫瘤細(xì)胞，聲動力治療組2相對于其他組藥物都顯示出了更好的抑制效果。聲敏脂質(zhì)體的藥物濃度分別在2.5～7.5μg/mL及2.5～10μg/mL，未經(jīng)聲動力治療時，對SPC-A-1及MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞均呈抑制作用。
　　對于SPC-A-1腫瘤細(xì)胞，固定超聲頻率1.0MHz，當(dāng)超聲時間60s，超聲強(qiáng)度為0.5W/cm2，聲動力治療組2對其抑制率隨著聲敏脂質(zhì)體藥物濃度的增加(2.5～7.5μg

9、/mL)而增加;當(dāng)超聲強(qiáng)度為0.5W/cm2時，聲動力治療組2（2.5～7.5μg/mL）的抑制率隨著超聲時間(30～120s)的增加而有所升高(P＜0.05);當(dāng)超聲時間為60s時，聲動力治療組2(2.5～7.5μg/mL)的抑制率隨著超聲強(qiáng)度(0.5～2.0 W/cm2)的增加而顯著提高(P＜0.05)。
　　另外，對于MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞，固定超聲頻率1.0MHz，當(dāng)超聲時間60s，超聲強(qiáng)度為1.0W/cm2，聲動力

10、治療組2對其抑制率隨著聲敏脂質(zhì)體藥物濃度的增加(2.5～10μg/mL)而增加;當(dāng)超聲強(qiáng)度為1.0 W/cm2時，聲動力治療組2(2.5～10μg/mL)的抑制率隨著超聲時間(30～120s)的增加而有所升高(P＜0.05);當(dāng)超聲時間為60s時，聲動力治療組(2.5～10μg/mL)的抑制率隨著超聲強(qiáng)度(0.5～2.0W/cm2)的增加而顯著提高(P＜0.05)。
　　4.結(jié)論:
　　4.1薄膜分散-真空冷凍干燥技術(shù)適用于

11、Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的制備。以蛋黃卵磷脂作為聲敏脂質(zhì)體的制備材料，包封率為指標(biāo)，通過正交試驗進(jìn)行影響因素篩選，可以制得聲敏性良好的脂質(zhì)體。
　　4.2用油酸進(jìn)行磁性Fe3O4表面的改性，有利于提高磁粉的親油性，使磁粉與脂質(zhì)體表面的結(jié)合更容易，形成的穩(wěn)定磁性脂質(zhì)體混懸體系，在外加磁場的引導(dǎo)下，能夠聚集在腫瘤部位。
　　4.3研究Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性試驗，利用超聲天使治療儀裝置，在設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，經(jīng)過不同超聲