二氫卟吩e6聲動力對乳腺癌細胞MDA-MB-231生長的作用.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病率和死亡率現(xiàn)已居我國女性惡性腫瘤的第一位,是危害婦女健康的主要惡性腫瘤。目前的治療手段包括手術治療、放射治療、化療藥物治療、內分泌治療以及分子靶向治療的綜合治療。乳腺癌初始治療后的5年生存率約50％～60％,但仍有近50％患者治療后復發(fā)轉移?；熓菑桶l(fā)轉移乳腺癌的主要治療手段,但療效已達平臺。聯(lián)合用藥可以提高有效率和延長無病生存期,但是聯(lián)合用藥并不能明顯延長總生存期[1]。而且化療在殺傷腫瘤細胞的同時,亦不加選擇地殺傷正常細

2、胞,毒副作用大,病人難以承受而不能堅持治療。內分泌治療的重要性雖已提高到與化療、放療同等高度,但受到雌激素受體和乳腺癌分型的限制,在雌激素受體陰性、高轉移、高度惡性的乳腺癌分型中療效并不明顯。晚期乳腺癌缺乏療效確切的治療方法,中位生存期短,患者平均生存時間僅18～30個月。因此,尋找治療乳腺癌的新方法,仍然是當今醫(yī)學研究的熱點。
　　 聲動力療法(Sonodynamic therapy,SDT)是在光動力療法(Photodyna

3、mictherapy,PDT)基礎上發(fā)展起來的一種腫瘤治療新理念、新方法。SDT 將組織穿透力強的超聲替代了PDT的激光,利用腫瘤組織對聲敏劑的優(yōu)先攝取和長時間的滯留的特性,隨后用一定頻率的超聲激發(fā)聲敏劑而殺死腫瘤細胞。超聲波有很強的穿透能力,并且聚集于腫瘤組織的區(qū)域內激活聲敏藥物,繼而產生一系列的生物化學反應(如空化效應及產生單態(tài)氧)使腫瘤細胞發(fā)生不可逆的損傷[2]。由于超聲波較紅光選擇性聚焦且穿透力強,并且對周圍正常組織損傷較小,因

4、此,聲動力療法的抗腫瘤效應具有良好的應用前景。鑒于多數光敏劑同時具聲動力作用,目前聲動力多采用光敏劑做聲敏劑[3],但目前存在兩個問題:一是光敏劑腫瘤特異性聚集低、正常組織清除慢及光毒副作用高等缺點,限制了SDT 被批準用于臨床,因此需發(fā)展新型聲敏劑；二是SDT如何與其他主要治療手段聯(lián)合進一步提高療效。
　　 光敏劑二氫卟吩e6具有腫瘤特異性聚集性高,排泄快等優(yōu)點,鑒于多數光敏劑同時具聲動力作用,我們用其作為聲敏劑,首先觀察其介

5、導的聲動力效應對乳腺癌細胞MDA-MB-231生長的影響。
　　 近年來,光動力療法聯(lián)合化療藥物治療惡性腫瘤頗受重視,MatthewPeterson、Canti G 及 Kirveliene 等人分別采用不同的光敏劑介導的PDT聯(lián)合阿霉素治療惡性腫瘤,發(fā)現(xiàn)阿霉素對PDT的抗瘤作用有增敏效應[4,5],并且該效應具有時序性[5,6]。本研究的第二個目的是觀測阿霉素對以二氫卟吩e6為聲敏劑的聲動力療法抑制乳腺癌細胞MDA-MB-23

6、1生長的作用,旨在探討阿霉素對二氫卟吩e6聲動力療法是否具有增敏作用。
　　 第一部分 二氫卟吩e6介導的聲動力效應對MDA-MB-231細胞以及PMNC細胞生長的影響
　　 超聲與二氫卟吩e6單獨及聯(lián)合處理 MDA-MB-231 細胞和正常人外周血單核細胞 PMNC,45min 后采用噻唑藍(MTT)比色法檢測細胞生長,熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。實驗數據采用 SPSS13.0軟件進統(tǒng)計學分析,實驗結果以平均數±標準差

7、(x±s)表示,相關多組采用 One-way ANOVA 檢驗,各組間采用 LSD 或 Tamhane 檢驗,P<0.05 判定為差異有統(tǒng)計學意義。結果顯示:
　　 1.1.0MHz頻率超聲強度 1.0～2.0W/cm2 作用60s呈強度依賴性抑制MDA-MB-231 細胞和PMNC細胞生長,其抑制50％PMNC和MDA-MB-231細胞生長的超聲強度分別為1.23 W/cm2和1.25 W/cm2,表明相應強度的超聲對乳腺癌細

8、胞MDA-MB-231和正常人體單核細胞PMNC殺傷效應相似。0.1mg/ml～1.6mg/ml二氫卟吩e6濃度依賴性抑制MDA-MB-231 細胞和PMNC細胞生長,其抑制MDA-MB-231 細胞和PMNC細胞生長的IC50值分別為0.38mg/ml和0.77mg/ml,表明MDA-MB-231細胞對二氫卟吩e6的作用更敏感。
　　 2.0.5W/cm2×60s× 1.0MHz 超聲和0.05mg/ml～0.2mg/ml 二

9、氫卟吩 e6 無抑制PMNC 細胞生長作用(超聲組以 Welch 檢驗得到 F=141.792,P=0.000,超聲0.5W/cm2 組的P=1.000,與對照組相比無統(tǒng)計學差異；二氫卟吩 e6 組F=64.468,P=0.000,經由 LSD 法檢測組內差異,0.05mg/ml～0.2mg/ml與對照相比,P 值分別為0.951、0.952、0.915,均無統(tǒng)計學差異),兩者聯(lián)合顯著抑制MDA-MB-231細胞生長(F=66.099,

10、P=0.000,經由LSD法檢測組內差異,超聲聯(lián)合0.05mg/ml～0.2mg/ml二氫卟吩e6各組的P值均為0.000,與對照組相比有顯著性差異)。
　　 3.細胞形態(tài)觀察顯示,與單純超聲(0.5W/cm2×60s×1.0 MHz)和chlorin-e6(O.2mg/mL)相比,超聲聯(lián)合 chlorin-e6 組 MDA-MB-231 細胞死亡數目增加,損傷程度明顯加重,完整細胞的比例明顯減少,可以看到更多的細胞碎片。

11、>　　 第二部分 二氫卟吩e6介導的聲動力聯(lián)合阿霉素對乳腺癌細MDA-MB-231的體外殺傷
　　 超聲、二氫卟吩e6、SDT 作用同第一部分實驗,在此基礎上,使用阿霉素以及 SDT 聯(lián)合阿霉素處理MDA-MB-231 細胞,45min 后采用噻唑藍(MTT)比色法檢測細胞生長。采用 SPSS13.0 軟件,實驗結果以平均數±標準差(x±s)表示,相關多組采用 One-way ANOVA 檢驗,各組間采用LSD或Tamhane

12、檢驗P<0.05 判定為差異有統(tǒng)計學意義。結果顯示:
　　 1.1.0MHz 頻率、強度為0.5～2.0W/cm2的超聲作用 60s 以及0.05mg/ml～1.6mg/ml二氫卟吩e6對MDA-MB-231 細胞生長的影響結果同第一部分實驗。
　　 2.0.5W/cm2×60s×1.0MHz 超聲和0.05mg/ml～0.2mg/ml 二氫卟吩e6兩者聯(lián)合的SDT作用結果見第一部分實驗。
　　 3.0.1μg/

13、ml～0.4μg/ml的阿霉素無抑制 MDA-MB-231 細胞生長作用
　　 4.0.5W/cm2×60s×1.0MHz 超聲和0.1mg/ml二氫卟吩e6聲動力治療聯(lián)合0.1μg/ml～0.4μg/ml的阿霉素呈阿霉素濃度依賴性抑制 MDA-MB-231 細胞生長,且相比聲動力以及阿霉素組均有更顯著抑制MDA-MB-231 細胞生長(經由Welch 檢驗得到 F=141.431,.P=0.000,經由 Tamhane 法組內

14、檢驗得出:聯(lián)合治療組與單獨聲動力組和單獨阿霉素組相比,除阿霉素 0.1μg/ml 和0.2μg/ml 聯(lián)合聲動力組與單獨聲動力組比較,P 值為 1.000 外,其余 P<0.05,差異具有統(tǒng)計學意義)；不同的聯(lián)合時序可產生不同的抑制效應,聲動力作用后加入阿霉素組(SDT+阿霉素)比先加入阿霉素后進行聲動力組(阿霉素+SDT)更能顯著抑制乳腺癌細胞的生長(經由Welch檢驗得到F=141.431,P=0.000,經由Tamhane法組內檢

15、驗得出:阿霉素濃度分別為0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml時,SDT+相應濃度阿霉素組與相應濃度阿霉素+SDT組相比,P值分別為0.000、0.038、0.006,差異具有統(tǒng)計學意義)。
　　 結論:二氫卟吩e6介導的聲動力能夠特異性抑制乳腺痛細胞MDA-MB-231 生長,有望成為一個新型聲敏劑用于聲動力治療乳腺癌。二氫卟吩e6聲動力聯(lián)合ADM 顯著抑制乳腺痛細胞 MDA-MB-231 生長,且聲動力作用后用