殼聚糖基可注射納米復(fù)合凝膠的制備及其在組織工程血管化的研究.pdf

1、組織工程用于器官損傷和組織缺損治療在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有良好的前景。目前臨床應(yīng)用局限在于構(gòu)建組織無(wú)法實(shí)現(xiàn)組織血管化，導(dǎo)致構(gòu)建組織失效。血管化問(wèn)題是組織工程取得成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，研究生物材料對(duì)組織工程血管化過(guò)程的影響，設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)血管化的支架材料是組織工程對(duì)生物材料的挑戰(zhàn)。研究表明，材料的三維結(jié)構(gòu)、表面性質(zhì)和生長(zhǎng)因子釋放均可顯著影響血管的形成。因此本論文針對(duì)上述問(wèn)題，借鑒醫(yī)學(xué)、材料學(xué)領(lǐng)域研究方法，制備了三維多孔水凝膠支架材料，并利用納米顆粒對(duì)生長(zhǎng)

2、因子包載，以期因子通過(guò)納米顆粒與凝膠雙重釋放的方式促進(jìn)血管化進(jìn)程。論文的主要內(nèi)容如下:
　　(1)利用殼聚糖(CS)和巖藻聚糖(F)的靜電作用制備納米顆粒，通過(guò)測(cè)定Zeta電位、PDI、粒徑等參數(shù)篩選得到組合為C5F5、C2F5納米顆粒，紅外結(jié)果顯示納米顆粒有效制備。并對(duì)納米顆粒C5F5、C2F5進(jìn)行血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF-1)包載，同樣測(cè)定其Zeta電位、PDI、粒徑等參數(shù)篩選得到包載因子的納米顆

3、粒C5F5-SDF-1、 C2F5-VEGF。成功實(shí)現(xiàn)因子負(fù)載，透射電鏡顯示顆粒為圓球狀，尺寸范圍在50～200nm。
　　(2)采用殼聚糖(CS)/β-甘油磷酸鈉(β-GP)/明膠(G)制備可注射溫敏水凝膠，測(cè)定了凝膠時(shí)間、動(dòng)態(tài)粘彈性、流變性質(zhì)和凝膠的形貌以及細(xì)胞生長(zhǎng)行為。測(cè)定結(jié)果表明CS/β-GP/G水凝膠可原位成膠具有溫敏性，凝膠時(shí)間可根據(jù)CS濃度和CS與β-GP的體積比調(diào)整，37℃體溫時(shí)候其配比濃度為5∶1;同時(shí)SEM電鏡

4、顯示該水凝膠為多孔的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)孔徑為20～50μm。細(xì)胞行為研究表明該溫敏凝膠無(wú)細(xì)胞毒性，細(xì)胞在三維凝膠表面呈圓球狀。
　　(3)通過(guò)ELISA測(cè)定因子(VEGF/SDF-1)在不同載體中的緩釋情況，通過(guò)比較得出納米顆粒包載因子在水凝膠中的釋放比水凝膠直接作為緩釋載體釋放穩(wěn)定，因子釋放對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)趨化作用顯著。三維凝膠包埋BMSC后，CCK-8結(jié)果顯示細(xì)胞活性保持在穩(wěn)定狀態(tài);同時(shí)組織切片后HE染色表明包埋能夠?qū)崿F(xiàn)