6-氨基-9-取代嘌呤雙膦酸化合物的合成及其表征.pdf

1、本文設(shè)計合成以腺嘌呤為R側(cè)鏈取代基的雙膦酸化合物，合成了[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸，并對合成的化合物進行體外活性研究，嘗試開發(fā)的高效低毒的新雙膦酸類藥物。 在雙膦酸化合物的合成試驗中，首先以腺嘌呤為原料，通過N-alkylysisreaction/Michaeladditionreaction在9位氮原子上連接烷酸酯鏈后，再水解生成(6-

2、氨基-嘌呤-9-基)-乙酸和3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-丙酸，然后以二者為原料，經(jīng)膦酸化后，得到兩個雙膦酸化合物，經(jīng)UV、IR、1H-NMR、¨C-NMR、HRMS鑒定其化學結(jié)構(gòu)，確定化合物的結(jié)構(gòu)為[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]瞵酸，其結(jié)構(gòu)與本文設(shè)計的化合物的結(jié)構(gòu)一致，為下一步雙膦酸類藥物的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。本文還研究了兩個雙膦酸化合物體外抑制羥磷灰石

3、溶解的活性，其結(jié)果用于表征化合物體內(nèi)抑制骨吸收的活性，為化合物的體內(nèi)活性研究奠定了基礎(chǔ)。本文同時建立了離子交換、離子對色譜法等兩種色譜方法，以表征目標化合物的含量和純度。 一.6-氨基-9-取代嘌呤雙膦酸化合物的合成 (一)[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸的合成 目的：合成雙膦酸化合物，6-氨基-9-取代嘌呤雙膦酸化合物。 結(jié)果：合成得到的目標產(chǎn)物，經(jīng)UV、IR、1H-NMR、1

4、3C-NMR、HRMS鑒定，其化學結(jié)構(gòu)為[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸。 結(jié)論：經(jīng)四大光譜結(jié)構(gòu)確證，目標產(chǎn)物的化學結(jié)構(gòu)與設(shè)計的結(jié)構(gòu)一致。 (二)[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的合成 目的：合成雙膦酸化合[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸。 結(jié)果：合成得到的目標產(chǎn)物，經(jīng)UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、HRMS鑒定，其化

5、學結(jié)構(gòu)為[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸。 結(jié)論：經(jīng)四大光譜結(jié)構(gòu)確證，目標產(chǎn)物的化學結(jié)構(gòu)與設(shè)計的結(jié)構(gòu)一致。 二.[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸體外抑制羥磷灰石溶解活性研究 目的：測定雙膦酸化合物的體外抑制羥磷灰石溶解活性。 結(jié)果：本文合成的雙膦酸化合物和已上市的雙膦酸鹽藥物均具有體外抑制羥磷灰

6、石溶解的活性，[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸抑制羥磷灰石溶解的活性與阿侖膦酸相當，[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸抑制羥磷灰石溶解的活性與帕米膦酸相當。 結(jié)論：化合物具有體外抑制羥磷灰石溶解的活性，在體內(nèi)應(yīng)具有抑制骨溶的活性。 三.[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸及[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的分析方法研究(一)

7、絡(luò)合滴定法測定[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的含量 目的：建立測定[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸及[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的純度含量的方法。 結(jié)果：[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸自制對照品含量99.7％，3批樣品含量均大于99％；[3-(6-氨基

8、-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸自制對照品含量99.5％，3批樣品含量均大于98％。 結(jié)論：本文建立的方法用于測定目標產(chǎn)物操作簡便，快速；方法準確。 (二)離子交換色譜法測定[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的含量 目的：建立測定[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)

9、-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的色譜分析方法。 結(jié)果：[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的線性范圍分別為20.4～102μg/ml(r2=0.9996，n=5)和25.56～127.8μg/ml(r2=0.9999，n=5)；平均回收率分別為99.2％和100.0％，RSD為0.34％和1.41％。 結(jié)論：本文建立的方法適合目標化合物的分析，

10、結(jié)果準確，操作簡便，分析快速。兩個目標產(chǎn)物的純度分別大于99.6％和99.4％。 (三)離子對色譜法測定[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的含量 目的：建立測定[2-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰乙基]膦酸和[3-(6-氨基-嘌呤-9-基)-1-羥基-膦酰丙基]膦酸的色譜分析方法。 結(jié)果：[2-(6-氨基-嘌呤-9-基