毛細(xì)管電泳復(fù)合手性體系的構(gòu)建及其在手性藥物分析中的應(yīng)用.pdf

1、手性對映體的存在是自然界的普遍現(xiàn)象，在生命科學(xué)、藥物化學(xué)和農(nóng)業(yè)化學(xué)中占有十分重要的地位。手性化合物尤其是手性藥物對映體的分離分析具有非常重要的意義，己成為分析化學(xué)領(lǐng)域中廣泛研究的課題之一。這是因為手性藥物的兩個對映體的藥理活性和毒性往往有很大差異，有時甚至截然相反，這主要是因為生物機(jī)體和藥物的特異性化學(xué)反應(yīng)與藥物的分子結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。以前由于對此缺少認(rèn)識，人類曾經(jīng)有過慘痛的教訓(xùn)。為了準(zhǔn)確了解藥效和安全用藥以避免這類悲劇的再次發(fā)生，世界各國

2、開始關(guān)注手性藥物，美國FDA 1992發(fā)布了手性藥物指導(dǎo)原則，要求所有在美國上市的消旋體類新藥，生產(chǎn)者均需提供報告，說明藥物中所含的對映體各自的藥理作用、毒性和臨床效果。歐共體國家及日本、加拿大等國隨后也規(guī)定了類似的法規(guī)。在20世紀(jì)最后十余年內(nèi)，手性藥物臨床用量日益上升，市場份額逐年擴(kuò)大。手性藥物的不斷增加改變著化學(xué)藥物的構(gòu)成，成為制藥工業(yè)的新寵兒。療效高、毒副作用小、用藥量少是當(dāng)前藥物研究的發(fā)展趨勢。手性藥物正滿足了這個要求，因而成為

3、未來新藥研發(fā)的方向。因此，發(fā)展和建立手性藥物對映體的分離分析方法，并用于臨床研究和藥物質(zhì)量控制，具有重要意義。目前常用的分離方法有超臨界流體色譜(SFC)法、高效液相色譜(HPLC)法、手性配體交換色譜、氣相色譜(G-C)法、毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis，CE)法和分子烙印法。 毛細(xì)管電泳是20世紀(jì)80年代興起的一種新的分離分析技術(shù)，發(fā)展非常迅速。與其它方法相比，毛細(xì)管電泳(CE)具有分離效率高

4、、分離模式多、低耗、快捷簡便等優(yōu)勢，在手性藥物分離研究中得到了廣泛作用。藥物手性分離的毛細(xì)管電泳具有以下優(yōu)點(diǎn)： (1)很高的分離效率使具有較小分離選擇系數(shù)的對映體也可以達(dá)到滿意的分離度； (2)可供選擇的分離模式多且變換簡單，手性選擇試劑直接加入載體電解質(zhì)中，容易通過選用不同的手性選擇試劑和改變背景電解質(zhì)溶液的組成提高分離選擇性； (3)手性選擇劑的消耗量很少，運(yùn)行成本較低，對環(huán)境污染小。 因此，毛細(xì)管電

5、泳在手性分離中應(yīng)用廣泛，開展毛細(xì)管電泳化學(xué)檢測在手性藥物分離檢測的應(yīng)用研究中具有重要的學(xué)術(shù)意義和應(yīng)用價值。目前，毛細(xì)管電泳手性藥物的分離檢測的文獻(xiàn)報道中主要以紫外檢測為主，但由于大部分的手性選擇劑本身的紫外吸收將引入背景吸收值，信噪比降低，從而最終導(dǎo)致檢測靈敏度降低。而本實驗過程中用到的電化學(xué)檢測由于其靈敏度高、選擇性好等特點(diǎn)，可以彌補(bǔ)紫外檢測的不足。本論文是廣東省自然科學(xué)基金資助項目(031589)的一部分。 本論文分為三章，

6、主要內(nèi)容和方法如下： 第一章 回顧了毛細(xì)管電泳的發(fā)展歷史；詳細(xì)介紹毛細(xì)管電泳的基本原理，進(jìn)樣方法，檢測方法；對毛細(xì)管電泳手性藥物分離方面的研究應(yīng)用進(jìn)行了綜述，重點(diǎn)介紹了以環(huán)糊精及其衍生物和大環(huán)抗生素為手性選擇劑的研究進(jìn)展情況以及復(fù)合手性體系中手性選擇劑的協(xié)同效應(yīng)。闡述了本課題的背景和意義。 第二章 報道了以未涂層融硅石英毛細(xì)管(50cm×50μm)為分離柱，采用二元復(fù)合手性體系，電泳介質(zhì)為3mmol·L-

7、1(NH4)3Cit(檸檬酸銨)+12mmol·L-1 Cit(檸檬酸)+20mmol·L-1HP-β-CD(羥丙基-β-環(huán)糊精)+8mg·L-1HPMC(羥丙基甲基纖維素)，進(jìn)樣電壓9kV，分離電壓15kV，采用了高效毛細(xì)管電泳-電導(dǎo)檢測法，在復(fù)合手性體系中實現(xiàn)了手性藥物氧氟沙星對映體的分離檢測，在該條件下其線性范圍2-550μmol·L-1，檢出限為1μmol·L-1。闡述了緩沖溶液種類、濃度、分離電壓、pH對拆分效果的影響；初步探

8、討了拆分原理。應(yīng)用于市售氧氟沙星的對映體分離檢測，得到了滿意的結(jié)果。 第三章 報道了以未涂層融硅石英毛細(xì)管(50cm×50μm)為分離柱，采用二元復(fù)合手性體系，電泳介質(zhì)為12mmol·L-1Tris(三羥甲基氨基甲烷)+8mmol·L-1 Cit(檸檬酸)+20mmol·L-1β-CD(β-環(huán)糊精)+10mg·L-1HPMC(羥丙基甲基纖維素)為電泳介質(zhì)，進(jìn)樣電壓9kV，分離電壓15kV，采用高效毛細(xì)管電泳-電導(dǎo)檢測法，