小檗堿對(duì)幾種重要消化酶部分性質(zhì)的影響.pdf

1、小檗堿(berberine)系從毛莨科黃連屬植物黃連(coptis chinesis Feranch)，根和皮中提取的異喹啉類生物堿，為黃連的主要成分，具有廣泛的藥理作用。作為一種藥物，小檗堿主要在胃腸道發(fā)揮作用。因此小檗堿將不可避免地與動(dòng)物和人體內(nèi)的消化酶發(fā)生作用，所以我們研究了小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶這三種消化酶部分性質(zhì)的影響。 研究發(fā)現(xiàn)小檗堿對(duì)三種消化酶均有一定程度的抑制作用，小檗堿對(duì)胰蛋白酶的抑制率最高，對(duì)

2、α-淀粉酶的抑制率最低。當(dāng)小檗堿與三種消化酶的終濃度比達(dá)到1.5/1時(shí)，小檗堿對(duì)這三種酶的抑制率分別達(dá)到16.63％、10.05％及8.29％。 當(dāng)向三種消化酶中加入不同濃度的小檗堿時(shí)，隨著小檗堿濃度的增加，胃蛋白酶在275 nm附近、胰蛋白酶在270 nm附近以及α-淀粉酶在265 nm附近的紫外吸收光譜均有一定程度的升高。 通過(guò)實(shí)驗(yàn)得知小檗堿對(duì)三種消化酶的內(nèi)源熒光均有很強(qiáng)的淬滅作用，根據(jù)Stern-Volmer方程作

3、小檗堿對(duì)三種消化酶淬滅的Fo/F曲線，得出當(dāng)溫度為20℃和37℃時(shí)，小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶的動(dòng)態(tài)淬滅常數(shù)Ksv。隨著溫度升高，小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶的動(dòng)態(tài)淬滅常數(shù)Ksv降低，由此可判斷出小檗堿對(duì)三種消化酶熒光淬滅是靜態(tài)淬滅作用。由于生物大分子的熒光平均壽命約為10<'-8>s，因而可求得當(dāng)溫度為20℃和37℃時(shí)，小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶的動(dòng)態(tài)淬滅速率常數(shù)Kq。且小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α

4、-淀粉酶的動(dòng)態(tài)淬滅速率常數(shù)Kq遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于各種淬滅劑對(duì)生物大分子的最大擴(kuò)散碰撞常數(shù)，表明小檗堿對(duì)三種酶的熒光淬滅并不是由于分子擴(kuò)散和動(dòng)態(tài)碰撞引起的，可能是由于小檗堿“鑲嵌”于酶分子之間，彼此結(jié)合形成了某種特定結(jié)構(gòu)的復(fù)合物而引起的靜態(tài)淬滅。同時(shí)隨著溫度升高，小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶的動(dòng)態(tài)淬滅速率常數(shù)Kq降低。以1g[(F<,0>-F)/F]對(duì)1g[Q]作線性擬合，即可求出在20℃和37℃時(shí)小檗堿與三種酶的表觀結(jié)合常數(shù)KA和結(jié)合位

5、點(diǎn)數(shù)n，當(dāng)溫度為20℃時(shí)，小檗堿與胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶結(jié)合位點(diǎn)數(shù)分別為1.12、1.30、1.17；當(dāng)溫度為37℃時(shí)，小檗堿與胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n為1.09、1.29、1.16，這表明小檗堿與三種消化酶之間只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。隨著溫度升高，小檗堿對(duì)胃蛋白酶、胰蛋白酶及α-淀粉酶的表觀結(jié)合常數(shù)K<,A>減小。溫度升高，產(chǎn)物的穩(wěn)定性降低，表觀結(jié)合常數(shù)K<,A>減小，進(jìn)一步推斷淬滅過(guò)程為形成復(fù)合物所引起的靜態(tài)淬滅