基于熒光標(biāo)記適配體的熒光各向異性法檢測小分子.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一章:對核酸適配體的性質(zhì)和篩選作了簡要介紹,詳述了熒光各向異性(FA)法的定義和其在生物分析化學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用,闡述了本論文的立題背景,所研究的主要內(nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)。
  第二章:利用適配體具有親和力高、穩(wěn)定性好、易于合成和標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn),結(jié)合熒光各向異性法簡單穩(wěn)定的特點(diǎn),建立了一種非競爭性的基于四甲基羅丹明(TMR)熒光基團(tuán)標(biāo)記適配體的FA分析方法用于赭曲霉素A(OTA)的檢測。TMR和適配體堿基間存在的分子內(nèi)作用力會影響TMR的局部轉(zhuǎn)

2、動和FA值,目標(biāo)物與適配體結(jié)合后,適配體構(gòu)象發(fā)生改變,引起分子內(nèi)作用力改變,TMR的FA值也隨之變化。將TMR標(biāo)記到OTA適配體的不同位點(diǎn)(適配體末端和T堿基)上,考察相應(yīng)適配體對OTA的FA響應(yīng),發(fā)現(xiàn)第10個(gè)堿基T上標(biāo)記有TMR的適配體( T10-TMR-O36)展現(xiàn)出顯著的FA降低響應(yīng)?;赥10-TMR-O36適配體的FA分析方法檢測OTA具有很高的靈敏度和很好的選擇性,檢出限為3 nM,檢測范圍為3 nM-3μM,OTA的結(jié)構(gòu)類

3、似物不會對OTA的檢測產(chǎn)生干擾。
  第三章:本章利用TMR標(biāo)記的腺苷適配體發(fā)展了一種簡單高效的FA分析方法用于直接檢測腺苷。我們實(shí)現(xiàn)了將TMR標(biāo)記于適配體的5'端、3'端、A堿基、C堿基和T堿基上,更為全面的考察了這些TMR標(biāo)記適配體對腺苷的不同F(xiàn)A響應(yīng)。適配體和腺苷結(jié)合后,TMR和它周圍的G堿基間的分子內(nèi)作用力改變,引起TMR的局部轉(zhuǎn)動和FA值也發(fā)生變化。其中第16個(gè)堿基C上標(biāo)記TMR的適配體C16-TMR-Ad25對腺苷展現(xiàn)

4、出最大的FA降低響應(yīng),并可檢測到2μM的腺苷。此外,此種FA分析方法還可應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)中腺苷的檢測。
  第四章:本章采用和前面兩章相似的檢測原理,建立了一種靈敏的三磷酸腺苷(ATP)檢測方法。用于檢測腺苷的適配體同樣適用于檢測ATP,我們篩選出對ATP有較大FA響應(yīng)的兩個(gè)TMR標(biāo)記的適配體,即在第16個(gè)堿基C上標(biāo)記 TMR的 C16-TMR-Ad25和在第23個(gè)堿基 A上標(biāo)記 TMR的A23-TMR-Ad25,這兩個(gè)適配體都可實(shí)

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