肝素等硫酸多糖與粒細(xì)胞集落刺激因子等蛋白質(zhì)在分子和細(xì)胞水平上的相互作用研究.pdf

1、肝素等硫酸多糖是一類重要的生物分子，它通過與蛋白質(zhì)相互作用在許多生物學(xué)過程中起著重要作用，如信號傳導(dǎo)、細(xì)胞生長與分化等。研究此類相互作用對深入理解生物和生理過程有重要意義，并對以糖為基礎(chǔ)的新藥研發(fā)有促進(jìn)作用。本文以毛細(xì)管電泳(CE)為主要技術(shù)平臺(tái)，結(jié)合高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)和流式細(xì)胞術(shù)等系統(tǒng)研究了肝素等硫酸多糖與粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)等蛋白質(zhì)的相互作用。 利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)研究了不同類型蛋白質(zhì)

2、與肝素的相互作用。發(fā)現(xiàn)CZE既可研究動(dòng)力學(xué)上慢速解離平衡體系，又可研究快速解離平衡體系，擴(kuò)展了CZE的應(yīng)用范圍。發(fā)現(xiàn)粒細(xì)胞巨嗜細(xì)胞集落刺激因子與肝素的相互作用具有特異性，并首次測定了結(jié)合常數(shù)。 利用CZE系統(tǒng)研究了不同分子量、不同來源及不同硫酸化位點(diǎn)的肝素和G-CSF的相互作用，進(jìn)行了定性和定量測定。首次發(fā)現(xiàn)G-CSF能和肝素結(jié)合，且結(jié)合的強(qiáng)弱與肝素的鏈長、來源及硫酸化位點(diǎn)有關(guān)。發(fā)展了一種既適于分離肝素寡糖、又適于研究肝素與蛋白

3、質(zhì)相互作用的方法。首次在肝素寡糖分離基礎(chǔ)上研究其與蛋白質(zhì)的相互作用，并找到了與G-CSF結(jié)合的組分。該方法勿須加入任何添加劑，即可在正向分離模式下使一種肝素酶降解肝素所得寡糖快速達(dá)到基線分離。對該寡糖進(jìn)行了定性研究，未發(fā)現(xiàn)三硫酸化二糖，表明所用肝素酶可選擇性的降解肝素。用HPLC和MS對該寡糖進(jìn)行進(jìn)一步分離和鑒定，得出了各肝素二糖的分子量，與CE所得結(jié)果一致。 作為肝素的擴(kuò)充，研究了其它硫酸聚糖和G-CSF的相互作用，并對硫酸聚