整合素β3胞漿段尾部RGT序列調(diào)控整合素αvβ3相關(guān)細胞功能的機制研究.pdf

1、整合素（integrin）家族是介導(dǎo)細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)間連接的膜表面粘附分子，在細胞的許多生物學(xué)功能中發(fā)揮著重要作用：如細胞的遷移、增殖、分化和組織發(fā)育等。整合素是由α、β亞基組成的二聚體，根據(jù)β亞基可分為8個組（β1、β2、β3、β4、β5、β6、β7、β8），其中β3組包括主要表達于血小板和巨核細胞表面的αIIbβ3和在不同細胞中廣泛表達的αvβ3。αIIbβ3是整合素研究的典范，特別是在其雙向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面，而整合素β3亞

2、基在調(diào)控內(nèi)向外和外向內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮著重要作用。已有研究表明，在血小板中存在鈣蛋白酶對β3胞漿段的酶解切割，并且產(chǎn)生不同的截短體調(diào)控雙向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。其中鈣蛋白酶識別Y759位點，切割截短了β3 C末端的RGT序列，而RGT序列是整合素β3與c-Src的結(jié)合位點，介導(dǎo)外向內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)并在血栓形成中起關(guān)鍵性作用。另外，可透膜的RGT肽通過競爭性干擾αIIbβ3/c-S rc相互作用而抑制血栓形成。已知整合素αvβ3參與調(diào)節(jié)腫瘤的進展、轉(zhuǎn)移、血管

3、生成等病理過程，其與c-S rc之間的相互作用與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡相關(guān)，但整合素β3在腫瘤復(fù)雜環(huán)境中的具體機制仍不明確。
　　我們利用高表達αvβ3的乳腺癌細胞株MDA-MB-435檢測其中鈣蛋白酶的活性以及對β3胞漿段的切割作用。結(jié)果顯示在腫瘤細胞中同樣存在類似于血小板中的β3截短性切割。模擬這種切割作用，實驗室前期已經(jīng)構(gòu)建了C HO-αvβ3以及C HO-αvβ3Δ759穩(wěn)定細胞株，并探究到截短RGT序列后αvβ3介導(dǎo)的在

4、玻連蛋白（vitronectin，Vn）上的伸展能力減弱，遷移能力明顯受損，同時干擾了β3與c-Src之間的相互作用?？紤]到 Src具有多種激活途徑，且有研究表明活化型SrcYF與αvβ3之間的相互作用促進細胞腫瘤性轉(zhuǎn)化，我們在CHO-αvβ3、C HO-αvβ3Δ759細胞中轉(zhuǎn)染活化型c-Src，探究其對野生型及截短型整合素β3的影響。結(jié)果表明：活化型c-Src增強CHO-αvβ3細胞的遷移能力，對CHO-αvβ3Δ759細胞無明顯影

5、響。而在伸展和粘附能力方面，CHO-αvβ3Δ759細胞由于β3尾部R GT序列的截短而伸展功能受限，活化型c-Src未能糾正其伸展缺陷且降低了其粘附力。同時檢測了細胞內(nèi)β3酪氨酸磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)活化型c-Src增強了β3Y747、Y759磷酸化水平。由此推論：CHO-αvβ3Δ759細胞伸展功能的抑制是由c-Src脫離整合素β3胞內(nèi)段所致，只有與整合素β3連接的c-Src活性調(diào)節(jié)整合素αvβ3介導(dǎo)的細胞在Vn上的伸展功能?；罨蚦-S

6、rc可使表達αvβ3的細胞遷移能力增強，增加腫瘤的惡性度，而對表達αvβ3Δ759的細胞卻并未增強腫瘤惡性度甚至可能因細胞粘附力下降誘導(dǎo)細胞凋亡。為了進一步明確RGT序列在整合素αvβ3介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用，我們將人工模擬整合素β3胞漿段尾部的RGT透膜肽（myr-AC~CRGT）處理MDA-MB-435細胞，發(fā)現(xiàn)其呈劑量依賴性地影響MDA-MB-435細胞的形態(tài)及抑制細胞遷移能力。通過免疫共沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)RGT肽能干擾αvβ3與c-S