新型微量復雜樣品連續(xù)電泳預分離方法研究.pdf

1、蛋白質作為后基因組時代生命科學的重要研究內(nèi)容，已成為當今的研究重點及熱點。目前對于蛋白質的研究還存在著一定的挑戰(zhàn)，其主要原因在于待檢測樣品中所含有的蛋白質組成復雜，且其中某些蛋白質含量低，給分析檢測帶來了很大困難。解決如上困難的途徑之一是對蛋白質樣品進行分離及濃集。自由流電泳是一種獨特的電泳分離方法，不僅分離條件溫和，還可進行連續(xù)分離，十分適用于蛋白等復雜生物樣品的預處理。本文介紹了一種新型芯片自由流電泳裝置，通過引入離子交換膜為電泳分

2、離的同時利用濃度極化效應進行濃集提供了條件。
　　第一章對自由流電泳分離原理及其應用以及微納流控及渦流現(xiàn)象，離子交換膜和蛋白質組學進行了介紹和綜述。
　　第二章利用聚甲基丙烯酸甲酯（有機玻璃，PMMA）基材制作了一種自由流電泳芯片系統(tǒng)，并對芯片結構進行了一系列改進。利用改進后的芯片對三種熒光探針分子混合物進行了分離，分離效果良好。對該芯片分離濃集性能進行了表征，包括緩沖液濃度、電壓、加電方式、分離室高度等對分離濃集現(xiàn)象的影響

3、，并對分離時電流-電壓曲線進行了測定及對分離組分的電導率及pH進行了測定。實驗結果表明，該芯片裝置在正向加電（陽極-陽離子交換膜-陰離子交換膜-陰極）時具有良好的分離效果，反向加電（陰極-陽離子交換膜-陰離子交換膜-陽極）時在離子交換樹脂界面出現(xiàn)離子耗盡和渦流現(xiàn)象。系統(tǒng)在如上兩種加電模式下均表現(xiàn)出一定的濃集能力。用所建立的分離濃集裝置對蛋白質混合樣品（胃蛋白酶pI1.5-2.5、牛血紅蛋白pI6.9及溶菌酶pI11.0）進行了分離，并在