重要耐鹽多基因載體GY11在水稻中的表達分析.pdf

1、鹽害是影響農業(yè)生產重要的非生物逆境脅迫之一，水稻作為全世界人口最重要的食用作物之一，全球近一半人口均以稻米為主食。鹽害導致世界上灌溉地的三分之一的水稻減產。在我國，約占總水稻種植面積近五分之一的稻田受鹽害的脅迫，并且鹽害的程度隨著環(huán)境的變化還在日益擴大和不斷加劇，給我們造成了很大的損失。寧夏地區(qū)現(xiàn)有鹽堿化耕地已占整個引黃灌區(qū)耕地的33.54％，且鹽堿化程度仍舊在加劇。所以，培育耐鹽水稻品種具有很重要的意義。
　　 本研究通過改良

2、的農桿菌介導遺傳轉化法，將多基因表達載體GY11轉入優(yōu)引3號水稻，通過分子生物學檢測，獲得了較多的轉基因植株，并進行了耐鹽性鑒定。為以后植物轉基因表達載體的設計和水稻耐鹽性育種奠定了良好的基礎。主要研究結果如下：⑴水稻再生體系的優(yōu)化:分化培養(yǎng)基中最佳激素配比組合為:0.6 mg/L NAA+1.8 mg/L6-BA。⑵水稻遺傳轉化體系的優(yōu)化:Hyg篩死濃度為50 mg/L最佳Hyg篩選濃度為42 mg/L。⑶最佳分蘗激素配比:陽性轉基因

3、植株的最佳分蘗激素配比為:0.2 mg/L NAA+0.8 mg/L6-BA。⑷分子檢測:PCR檢測結果:從抗性植株中擴增出目的基因片段;RT-PCR檢測結果，各功能基因均表達;southern blotting結果，檢測出單拷貝和多拷貝。⑸Hyg基因表達檢測:將50 mg/L的Hyg涂抹在轉基因植株和對照植株葉片上，7d后陽性轉基因水稻的葉片沒有變化，野生型對照的水稻葉片變黃，表明Hyg基因在陽性轉基因植株中已經得到表達。⑹轉基因植株