PAP為核心的三酰甘油合成及相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、三酰甘油(triacylglycerol，TAG)約占人體脂類(lèi)的95％，它的合成與動(dòng)員是能量平衡調(diào)節(jié)的主要環(huán)節(jié)，而這一調(diào)節(jié)的失衡是誘發(fā)肥胖，產(chǎn)生高血壓、心臟病及皮下脂肪丟失等疾病的主要原因。油脂代謝會(huì)受到油脂基因所編碼的脂肪調(diào)節(jié)酶的直接調(diào)控，該代謝過(guò)程在真核系統(tǒng)中具有高度的保守性。TAG的合成是油脂代謝中關(guān)鍵的步驟之一，其中磷脂酸磷酸酶(phosphatidate phosphatase，PAP)在TAG合成代謝中起關(guān)鍵作用。PAP也稱(chēng)

2、脂素，其相關(guān)基因PAH1(釀酒酵母)、LIPIN1、LIPIN2、LIPIN3(哺乳動(dòng)物)是近年來(lái)確定的一類(lèi)TAG代謝調(diào)控的關(guān)鍵基因。
　　 通過(guò)序列比對(duì)和分析，能夠了解基因的基本信息，預(yù)測(cè)所編碼蛋白的結(jié)構(gòu)與功能。針對(duì)PAH1及LIPIN1的編碼序列，利用NCBI、HHpred、Bioedit等生物信息學(xué)工具進(jìn)行同源性分析;采用Phyre2蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)分析軟件針對(duì)兩個(gè)基因編碼蛋白中的HAD-LIKE高度保守區(qū)域進(jìn)行結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。同

3、時(shí)在野生型菌株(BY4742α)的基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建PAH1缺陷型酵母;發(fā)現(xiàn)該突變體具有高度溫度及脂毒敏感性。通過(guò)油脂成分薄層色譜分析及細(xì)胞脂滴熒光染色檢測(cè)，PAH1的缺陷能夠造成酵母三酰甘油合成受阻，三酰甘油含量要比野生型酵母菌株的少90％以上;細(xì)胞中脂肪滴的數(shù)量減少約70％。通過(guò)在突變體中轉(zhuǎn)入人源LIPIN1基因能夠部分彌補(bǔ)和恢復(fù)因PAH1缺失造成的油脂減少、溫度和脂毒高度敏感等異常，有力地證明了PAH1與LIPIN1編碼蛋白在三酰甘

4、油合成代謝調(diào)控中的保守性。最后，針對(duì)三酰甘油代謝中起主要作用的水解酶編碼基因TGL3、TGL4進(jìn)行敲除，高表達(dá)PAH1基因，人為制造TAG代謝障礙，造成胞內(nèi)TAG過(guò)度積累，建立酵母肥胖模型。并以鹽酸普洛萘爾，鹽酸克倫特羅，鹽酸黃連素，牛磺酸四種常用的降脂相關(guān)藥物對(duì)肥胖酵母進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)鹽酸黃連素具有較好的降脂效果。
　　 以釀酒酵母真核系統(tǒng)為基礎(chǔ)，利用人類(lèi)與酵母PAP高保守性，建立以PAP為核心的三酰甘油合成及相關(guān)調(diào)控機(jī)制研究平