細菌生物被膜耐藥及形成相關基因調控機制的研究.pdf

1、目的：東方田鼠抗日本血吸蟲相關基因KPNA2重組逆轉錄病毒載體的構建和病毒制備研究機械通氣患者氣管導管細菌生物被膜的病原學分布,通過生物被膜菌與相應浮游菌在體外培養(yǎng)的藥敏試驗進行比較,進而探討細菌生物被膜對抗生素的耐藥性。進一步以臨床分離的表皮葡萄球菌生物被膜菌和對應的浮游菌為研究對象,探討表皮葡萄球菌生物被膜形成相關的基因(操縱子—icaA基因,轉錄調控子—sigB基因,操縱子調節(jié)基因—icaR基因,毒力因子調節(jié)系統(tǒng)—agrA基因)的

2、分布及與生物被膜形成的關系。
　　 方法：
　　 (1)研究了110例施行人工氣道(氣管插管和氣管切開)并機械通氣的患者拔除的氣管導管,用剛果紅培養(yǎng)基篩選出生物被膜菌株和相應的浮游菌株,并對生物被膜菌進行半定量檢測,藥敏實驗分析生物被膜菌株和相應的浮游菌在普通洲培養(yǎng)基上耐藥差異以及生物被膜陽性菌在泊洛沙姆(Poloxamer,F-127)培養(yǎng)基和普通姍培養(yǎng)基上耐藥性差異進行分析。
　　 (2)收集氣管導管中分離的

3、表皮葡萄球菌,按生物被膜陽性表皮葡萄球菌及相應的浮游菌表皮葡萄球菌分為2組。使用RT-PCR分別對生物被膜菌組和浮游菌組細菌的icaA、sigB、icaR、agzA基因輝度比進行檢測;利用Real-time PCR分別檢測生物被膜菌組和浮游菌組細菌的icaA、sigB、icaR、agrA四種與生物被膜形成相關的基因的表達,并通過2-△△Ct方法進行相對定量。分析表皮葡萄球菌臨床菌株中icaA、sigB、icaR、agrA基因轉錄水平與表

4、皮葡萄球菌生物被膜形成的相關性。
　　 結果：
　　 (1)110例機械通氣患者氣管導管中篩選出生物被膜陽性菌61株,陽性率為55.45％。以葡萄球菌屬,糞腸球菌及銅綠假單胞菌最常見,生物被膜菌株與相應浮游菌株在普通MH培養(yǎng)基上藥敏結果相似,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);生物被膜菌株在普通MH培養(yǎng)基上和在Poloxamer培養(yǎng)基上藥敏結果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),且后者耐藥性更強。
　　 (2)RT-

5、PCR中icaA、sigB、icaR、agrA基因的輝度測定值統(tǒng)計分析結果顯示生物被膜陽性表皮葡萄球菌及相應的浮游菌表皮葡萄球菌兩組細菌間差異無顯著性(P＞0.05),但icaA、sjgB基因生物被膜菌組平均秩及秩和明顯高于浮游菌組;而icaR、agrA基因生物被膜菌組平均秩及秩和明顯小于浮游菌組。
　　 (3)Real-time PCR檢測顯示表皮葡萄球菌生物被膜菌組icaA,sigB基因表達量分別是浮游菌組的418.8倍與8

6、1倍,而icaR,agrA基因在生物被膜菌組中表達量僅為浮游菌組的1/145與1/270。
　　 結論：
　　 (1)本院機械通氣患者氣管導管生物被膜病原學分布以葡萄球菌屬,糞腸球菌和銅綠假單胞菌為主,生物被膜菌與浮游菌在普通MH培養(yǎng)基上耐藥性分析未見明顯差異,生物被膜菌在Poloxamer培養(yǎng)基上和在MH培養(yǎng)基上耐藥性有明顯差異,推測Poloxamer培養(yǎng)基有可能反映生物被膜菌較真實的對藥物的耐受情況,其耐受性更強。<