鹵蟲休眠形成過程中microRNA的表達譜和miR-100的功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、細胞靜息,也稱為G0期,被定義為可逆的細胞周期停滯,并為重新進入細胞周期做準備。細胞靜息的發(fā)生對生物體的發(fā)育、生殖及抗逆起著關鍵性作用,但是到目前為止還有很多機理尚未研究清楚。鹵蟲在環(huán)境條件惡劣的時候依靠產出休眠卵來繁殖后代(卵生),而在環(huán)境條件適宜時則直接產出可游動的幼蟲(卵胎生)。鹵蟲休眠卵的胚胎發(fā)育停滯在原腸胚期,其中大約含4000個細胞,這些細胞都處于細胞周期停滯、代謝水平極低的狀態(tài)。鹵蟲休眠卵的這一特性為研究胚胎發(fā)育過程中細胞

2、靜息提供了良好的材料。
  我們通過對鹵蟲卵生途徑中的四個時期的樣本早期胚胎(Pre-diapause)、休眠卵(Diapause)、激活的休眠卵(Post-diapause)以及無節(jié)幼體(Nauplius)進行高通量測序,建立了miRNA在卵生發(fā)育途徑中的表達譜。將所得序列比對到所有動物非冗余成熟miRNA序列中(來自于miRbase20.0),共比對上370個分布在87個已知家族當中的動物miRNA和13個未知家族的動物miR

3、NA。同時,對四個樣本的miRNA表達譜進行差異性比較,發(fā)現了107個差異表達的miRNA,其中miR-100在胚胎發(fā)育過程中高量表達但在休眠卵中痕量表達。實驗結果表明在卵生鹵蟲中過表達miR-100可以促進有絲分裂使卵生鹵蟲胚胎發(fā)育無法停滯在原腸胚期,所產出的休眠卵其細胞周期并未停滯,而是逐漸凋亡。另一方面,在卵胎生鹵蟲中抑制miR-100使卵胎生鹵蟲無法直接產出無節(jié)幼體而是產出不帶保護殼的假休眠卵,并且在胚胎發(fā)育過程中DNA復制受阻

4、,有絲分裂受到抑制。對miR-100下游靶點的研究表明miR-100通過調控蛋白PLK1的翻譯水平來影響PLK1下游MEK-ERK-RSK信號通路。在卵生途徑中過表達miR-100使PLK1蛋白表達水平降低,PLK1的磷酸化水平也相應降低,從而激活下游分子MEK、ERK和RSK,使細胞進入有絲分裂。
  本研究通過對比鹵蟲休眠發(fā)育途徑各個時期的miRNA表達譜,發(fā)現miRNA在鹵蟲休眠形成過程中對調控細胞有絲分裂和細胞靜息有著重要

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