同源基因Vangl1和Vangl2在早孕小鼠子宮組織的表達及意義.pdf

1、Vangl2是在果蠅屬中首次發(fā)現(xiàn)并鑒定的Van Gogh(Vang)基因的脊椎動物同源物，氨基端胞質(zhì)區(qū)絲氨酸簇模體及羧基端胞質(zhì)區(qū)的PDZ結(jié)構(gòu)模體使其在進化過程中非常保守，該基因在人、小鼠、斑馬魚中存在著同源基因Vangl1，且其氨基酸序列的同源性達73.1％，這種結(jié)構(gòu)上的同源性決定了它們功能上的相似性。已知在原腸胚和神經(jīng)胚發(fā)育過程中Vangl1和Vangl2基因的功能缺失可導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常，嚴重者會誘發(fā)孕期中胚胎死亡。其機制是由于突變的

2、Vangl1和Vangl2基因干擾了Wnt/PCP信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而影響細胞的遷移、粘附、極性及細胞骨架的重構(gòu)。胚胎著床作為整個妊娠過程中的首要關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其成功與否直接影響著胚胎發(fā)育和妊娠結(jié)局。同源基因Vangl1和Vangl2是否參與胚胎著床？在早孕小鼠胚胎圍著床期起何作用？這些問題值得關(guān)注。
　　實驗采用Real-time PCR、原位雜交、免疫組化和western blot法分別檢測了Vangl1和Vangl2基因在正常早

3、孕小鼠和假孕小鼠子宮組織中的mRNA和蛋白表達情況;采用宮角注射方法，于孕D3.5分別注射Vangl1和Vangl2反義寡聚脫氧核苷酸，24小時后收集子宮組織，檢測其mRNA和蛋白表達情況;觀察記錄并統(tǒng)計了術(shù)后D8小鼠子宮形態(tài)變化和胚胎著床數(shù)目。實驗取得如下結(jié)果。
　　1.Real-time PCR結(jié)果顯示:在正常早孕小鼠子宮組織中，Vangl1和Vangl2基因的mRNA水平隨著妊娠天數(shù)的增加逐漸上調(diào)，并在著床窗口期D5天達到最

4、高峰。在假孕小鼠子宮組織中，Vangl1基因的mRNA水平顯著低于正常組;Vangl2基因的mRNA水平未發(fā)生明顯改變。
　　2.原位雜交結(jié)果顯示:在正常早孕小鼠子宮組織中，VanglmRNA在妊娠D4、D5和D6主要定位于子宮的腔上皮、腺上皮、基質(zhì)細胞和蛻膜細胞，而Vangl2 mRNA定位于子宮的腔上皮、腺上皮和蛻膜細胞。假孕組中這兩個基因的mRNA定位均與正常組相似。
　　3.Western-blot結(jié)果與Real-t

5、ime PCR結(jié)果一致。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示:在正常早孕小鼠子宮組織中，Vangl1蛋白定位于基質(zhì)細胞以及蛻膜細胞，Vangl2蛋白定位于腔上皮和腺上皮細胞。假孕組中這兩個基因的蛋白定位均與正常組相似。
　　5.宮角注射反義寡聚脫氧核苷酸實驗顯示:Vangl1和Vangl2 mRNA和蛋白的表達均受到抑制，并且小鼠胚胎著床數(shù)目明顯減少（*P＜0.05）。
　　綜上所述，在胚胎植入窗口期,Vangl1和Vangl2