Drosha在早孕期小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)規(guī)律及在胚胎著床過程中的作用.pdf

1、目的：
　　胚胎的成功著床是活性胚泡和接受態(tài)子宮之間相互作用的結(jié)果。在嚙齒動(dòng)物中子宮處于接受態(tài)的時(shí)間很短，而且它的及時(shí)到來對(duì)胚胎著床至關(guān)重要，蛻膜化的過程和維持對(duì)于著床更是必不可少的。著床過程受到許多分子的調(diào)控，比如激素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等。MicroRNA(miRNA)作為基因表達(dá)調(diào)節(jié)器，已被證實(shí)參與胚胎著床的調(diào)控，Drosha和Dicer在生成成熟miRNA過程中起著非常關(guān)鍵的作用,Dicer和Drosha的表達(dá)水平會(huì)直接影

2、響到miRNA的成熟和表達(dá)及其對(duì)相關(guān)基因的調(diào)節(jié)。因?yàn)閙iRNA在胚胎著床中扮演著重要的角色,以此推測(cè)Dicer和Drosha在胚胎著床中應(yīng)該也起著非常重要的作用。已經(jīng)有研究表明，Dicer參與雌性生殖系統(tǒng)及胚胎的發(fā)育。然而，Drosha在小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)以及在胚胎著床過程中功能仍不是很清楚。我們前期在 DGE(數(shù)字基因表達(dá)譜)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，Drosha的表達(dá)在小鼠著床點(diǎn)和著床旁具有顯著差異，我們推測(cè)這種差異與胚胎著床可能相關(guān)。因此，本

3、研究檢測(cè)了Drosha在小鼠早孕期子宮內(nèi)膜的表達(dá)規(guī)律，雌孕激素對(duì)其的影響，并探索Drosha在胚胎著床中的功能。
　　方法：
　?。?）應(yīng)用熒光定量PCR（qPCR），蛋白免疫印跡技術(shù)(WB)和免疫組織化學(xué)(IHC)的方法檢測(cè)了Drosha mRNA和蛋白在真孕，假孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)模式。為了檢測(cè)Drosha的表達(dá)是不是受到雌孕激素的調(diào)控，我們應(yīng)用蛋白免疫印跡（WB）和免疫組織和化學(xué)技術(shù)（IHC）檢測(cè)了Drosha在激素

4、處理后的小鼠子宮中的表達(dá)情況。
　?。?）通過宮角注射玉米油，免疫組織化學(xué)（IHC）和蛋白免疫印跡技術(shù)（WB）檢測(cè)了人工誘導(dǎo)蛻膜化后Drosha蛋白的表達(dá)部位和表達(dá)量。
　　（3）同時(shí)，分離培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，體外誘導(dǎo)蛻膜化，熒光定量PCR（qPCR）和蛋白免疫印跡技術(shù)(WB)檢測(cè)了Drosha mRNA和蛋白隨著蛻膜化過程的表達(dá)規(guī)律
　　結(jié)果：
　?。?）在早期正常妊娠的小鼠子宮內(nèi)膜中，Drosha具有時(shí)

5、空表達(dá)特性，Drosha的mRNA和蛋白在d4開始升高，并在d6達(dá)到高峰。
　?。?）Drosha在妊娠d5胚胎著床點(diǎn)的表達(dá)明顯高于著床旁。
　　（3）假孕小鼠子宮內(nèi)膜Drosha的表達(dá)低于正常妊娠小鼠。
　　（4）類固醇激素處理模型中發(fā)現(xiàn)Drosha的表達(dá)受P4的調(diào)控。
　?。?）宮角注射玉米油，體內(nèi)人工誘導(dǎo)蛻膜化后，與對(duì)照相比，Drosha的表達(dá)顯著升高
　?。?）分離培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，體外誘導(dǎo)