轉(zhuǎn)錄因子Slug在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)及功能研究.pdf

1、Slug是Snail鋅指轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，參與調(diào)控胚胎發(fā)育和腫瘤的發(fā)生。Slug基因在物種進(jìn)化過(guò)程中比較保守，有高度保守的C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)域，通過(guò)連接到E-box以抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄。Slug編碼的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)在不同組織發(fā)育的各階段，對(duì)于原腸胚和中胚層的形成都是必需的，可促進(jìn)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換（epithelial-mesenchymal transition，EMT）和抑制上皮細(xì)胞鈣粘蛋白（E-cadherin）在內(nèi)的黏附分

2、子和上皮細(xì)胞標(biāo)記物，而促進(jìn)細(xì)胞的遷移。在EMT過(guò)程中，Slug通過(guò)對(duì)E-鈣粘蛋白的下調(diào)，促進(jìn)上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化。許多研究表明，Slug是E-鈣粘蛋白啟動(dòng)子的抑制子，參與控制細(xì)胞分化和凋亡的不同進(jìn)程，并與腫瘤進(jìn)展和侵襲有關(guān)。 胚胎植入（embryo implantation）是哺乳動(dòng)物生殖過(guò)程中一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，是建立成功妊娠的第一步。在植入過(guò)程中胚胎與子宮都處在生長(zhǎng)發(fā)育的動(dòng)態(tài)階段，而胚胎的侵入性和子宮內(nèi)膜的接受性必須達(dá)到“同步”才

3、能保證植入成功，這段關(guān)鍵時(shí)期稱植入窗或著床窗。胚胎侵入性和子宮內(nèi)膜接受性都與細(xì)胞分化或發(fā)育狀態(tài)有關(guān)。細(xì)胞在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中有兩種主要表型，即上皮型和間充質(zhì)型，并能進(jìn)行上皮間充質(zhì)表型轉(zhuǎn)換。子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞在接受性的獲得過(guò)程中，極性結(jié)構(gòu)逐漸消失，特征性蛋白（如鈣粘蛋白、波形蛋白）表達(dá)改變，甚至還發(fā)生行為變化，以利于滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入。然而，滋養(yǎng)層細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞一樣，其侵襲能力受細(xì)胞外基質(zhì)、基質(zhì)金屬蛋白酶、細(xì)胞黏附分子以及其它生長(zhǎng)因子的調(diào)控[8]。

4、 最近幾年，Slug轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤發(fā)生和侵襲過(guò)程中的作用已被提出并大量研究，由于胚胎植入與腫瘤侵襲過(guò)程很大程度上具有相似性[8]，Slug是否在胚胎植入過(guò)程中起一定作用，對(duì)其進(jìn)行研究將具有很重要的意義。 目的：研究轉(zhuǎn)錄因子Slug在小鼠子宮內(nèi)膜表達(dá)的規(guī)律性變化及其對(duì)胚胎植入的影響，初步探討它在小鼠生殖中的作用。 方法： 1.收集未孕和早孕1、2、3、4、5、6、7天小鼠子宮內(nèi)膜，共8組，每組20只小鼠。（

5、1）運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）技術(shù)測(cè)定Slug mRNA的表達(dá)規(guī)律；（2）免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)小鼠子宮內(nèi)膜中Slug蛋白的表達(dá)情況。 2.于孕3天晚8時(shí)小鼠子宮角注射Slug抗體，于孕8天觀察著床胚泡數(shù)。 結(jié)果： 1.FQ-PCR：早孕小鼠子宮內(nèi)膜和未孕小鼠子宮內(nèi)膜均有SlugmRNA表達(dá)，早孕小鼠子宮內(nèi)膜組織Slug的表達(dá)高于未孕小鼠子宮內(nèi)膜組織，且隨著妊娠天數(shù)的增加呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，到孕

6、4天達(dá)到最高。 2.免疫組織化學(xué)：Slug蛋白在子宮內(nèi)膜廣泛表達(dá)，特別是腔上皮、腺上皮細(xì)胞，基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)也較豐富，Slug蛋白的表達(dá)規(guī)律與mRNA結(jié)果基本一致。 3.于孕3天晚8時(shí)子宮角注射Slug抗體，觀察結(jié)果顯示注射Slug抗體組著床胚胎數(shù)明顯減少，差異顯著（p<0.05）。 結(jié)論：Slug在孕4天高表達(dá)，Slug的高表達(dá)抑制E-cadherin的表達(dá)以利于上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增加滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲能力的同時(shí)