PTEN在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)及功能研究.pdf

1、胚胎著床是人類(lèi)和哺乳動(dòng)物生殖過(guò)程中妊娠建立的第一步，也是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵。成功的植入取決于處于接受狀態(tài)的子宮內(nèi)膜和具有侵入性的胚胎間的同步協(xié)調(diào)反應(yīng)。但是子宮內(nèi)膜僅在某一特定時(shí)期允許胚胎著床，這一時(shí)期時(shí)間很短，代表著子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎具有容受性，稱(chēng)為“著床窗口期”。胚胎著床過(guò)程包括脫去透明帶、定位、黏附、侵入到最后著床等幾個(gè)階段。由于涉及到眾多基因的調(diào)控以及錯(cuò)綜復(fù)雜的調(diào)節(jié)因子網(wǎng)絡(luò)的參與，早期的胚胎發(fā)育和著床的詳細(xì)分子機(jī)制尚不清楚。自18

2、29年，Lobstein等提出腫瘤胚胎性起源概念以來(lái)，胚泡著床與腫瘤侵襲性轉(zhuǎn)移之間相似的生物學(xué)行為就越來(lái)越受到重視，原癌基因及腫瘤抑制基因也成為了胚泡著床機(jī)制研究的熱點(diǎn)。PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10)，是位于人類(lèi)染色體的10q23的腫瘤抑制基因，編碼一個(gè)403個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，是蛋白酪氨酸酶家族的一個(gè)成員，具有多種功能的PTEN在胚胎正常發(fā)育

3、過(guò)程中是必需的。Ozlem Guzeloglu-Kayisli等發(fā)現(xiàn)在早孕期的蛻膜和腺體細(xì)胞PTEN的表達(dá)比月經(jīng)周期任一期的表達(dá)均高，推測(cè)可能和這一時(shí)期子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖減少和細(xì)胞凋亡增加有關(guān)。 在對(duì)不同組織PTEN基因敲除的小鼠模型的研究中發(fā)現(xiàn)，PTEN等位基因純合性敲除會(huì)導(dǎo)致生殖細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞及哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞的腫瘤發(fā)生?？傊?，PTEN是一種胚胎發(fā)育過(guò)程中必不可少的腫瘤抑制因子，它促進(jìn)凋亡的發(fā)生。因此我們推測(cè)，在胚胎植入的過(guò)

4、程中，PTEN在誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞，蛻膜細(xì)胞及滋養(yǎng)層細(xì)胞的凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。然而PTEN在小數(shù)鼠妊娠早期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況國(guó)內(nèi)外尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道，是一個(gè)值得研究的課題。 目的：研究凋亡抑制基因PTEN在小鼠子宮內(nèi)膜表達(dá)的規(guī)律性變化及其對(duì)胚泡植入的影響，初步探討它在小鼠生殖中的作用。 方法： 1．收集未孕和早孕1、3、4、5、7天小鼠子宮內(nèi)膜，共6組，每組20只小鼠。(1)運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反

5、應(yīng)(FQ-PCR)技術(shù)測(cè)定PTEN mRNA的表達(dá)規(guī)律；(2)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)小鼠子宮內(nèi)膜中PTEN蛋白的表達(dá)情況； 2．于孕3天晚8時(shí)小鼠子宮角注射PTEN反義寡核苷酸，于孕8天觀察著床胚泡數(shù)。 結(jié)果： 1．FQ-PCR：早孕小鼠子宮內(nèi)膜和非孕小鼠子宮內(nèi)膜均有PTENmRNA表達(dá)，妊娠的子宮內(nèi)膜組織PTEN的表達(dá)高于未妊娠的子宮內(nèi)膜組織，且隨著妊娠天數(shù)的增加呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，到妊娠第五天達(dá)到最高；

6、 2．免疫組織化學(xué)：PTEN蛋白在子宮內(nèi)膜廣泛表達(dá)，特別是上皮細(xì)胞胞漿，間質(zhì)細(xì)胞胞漿表達(dá)也較豐富。PTEN蛋白的表達(dá)規(guī)律與mRNA結(jié)果基本一致。 3．于孕3天晚8時(shí)子宮角注射PTEN反義寡核苷酸，觀察結(jié)果顯示注射PTEN反義寡核苷酸組著床胚泡數(shù)明顯減少，差異顯著(p<0.05)。 結(jié)論： PTEN在妊娠第5天高表達(dá)，說(shuō)明它可能與誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞發(fā)生凋亡，進(jìn)而協(xié)調(diào)子宮內(nèi)膜的蛻膜化和滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵入有關(guān)。用