miR-155抑制物對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、背景:
　　骨肉瘤作為最常見的原發(fā)性惡性成骨性腫瘤,其侵襲能力強(qiáng)且有早期轉(zhuǎn)移傾向。骨肉瘤多發(fā)生于兒童和青少年,其最常見的原發(fā)部位為股骨遠(yuǎn)端、脛骨近端及肱骨近端,其中一半始于膝關(guān)節(jié)周圍,嚴(yán)重影響機(jī)體功能。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展,在骨肉瘤的治療中,盡管出現(xiàn)了外科保肢技術(shù)和聯(lián)合化療方案等新的綜合治療方案,但其5年生存率仍只有65-70％。在過去的20多年,骨肉瘤的治療進(jìn)入了瓶頸期,骨肉瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移問題始終未得到解決。鑒于骨肉瘤現(xiàn)狀,我們急

2、需找到新的有前景的骨肉瘤治療手段。
　　MicroRNAs(miRNAs)作為一類真核生物體內(nèi)具有調(diào)控功能的非編碼小RNA,它們能在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá),miRNAs被報(bào)道在許多腫瘤中表達(dá)異常,且異常表達(dá)的miRNAs與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。根據(jù)miRNAs在腫瘤中的不同作用,它們被人為分成“癌基因”和“抑癌基因”兩大類。作為 miRNAs家族成員,miR-155在許多腫瘤中過表達(dá),且過表達(dá)的miR-155在這些腫瘤的進(jìn)展中起到“

3、癌基因”作用。本實(shí)驗(yàn)室在行骨肉瘤SOSP-9607細(xì)胞系 miRNAs克隆時(shí),檢測到miR-155存在,提示miR-155在骨肉瘤中也可能存在促進(jìn)作用。
　　目的:
　　觀察miR-155抑制物對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、周期和凋亡的影響。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分為3組:實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染miR-155抑制物來抑制miR-155的功能。
　　2.MTT和

4、CCK-8實(shí)驗(yàn)測定3組細(xì)胞24、48、72和96小時(shí)OD值,并繪制成生長曲線。
　　3.Transwell實(shí)驗(yàn)測定3組細(xì)胞的侵襲和遷移能力。
　　4.流式細(xì)胞儀觀察3組細(xì)胞的周期和凋亡變化。
　　結(jié)果:
　　1.MTT和CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:兩對(duì)照組間細(xì)胞增殖能力未見明顯差異;而相對(duì)于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力明顯下降(P<0.01)。
　　2.Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:兩對(duì)照組間細(xì)胞侵襲和遷移能力

5、未見明顯差異;而相對(duì)于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞侵襲和遷移能力明顯下降(P<0.05)。
　　3.流式細(xì)胞儀周期結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞 G0/G1期細(xì)胞比率明顯增高,而S期和G2期細(xì)胞比率明顯降低(P<0.01);而兩對(duì)照組間細(xì)胞的周期分布未見明顯差異。
　　4.流式細(xì)胞儀凋亡結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率(8.5±0.4)%較陰性對(duì)照組凋亡率(1.2±0.3)%和空白對(duì)照組凋亡率(1.1±0.2)%明顯增高(P<0.01)