簡介：背景激活的肝星狀細(xì)胞（HSC）是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)其最顯著的特征之一是胞質(zhì)內(nèi)維生素A類明顯減少或消失維甲酸（RA）是維生素A類重要衍生物通過其核內(nèi)受體（RARS）調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡已有報(bào)道在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化發(fā)生過程中HSC胞質(zhì)內(nèi)全反式維甲酸（ATRA）和9順式維甲酸（9CISRA）的含量明顯減少維甲酸核內(nèi)受體（RARΒ、RXR?。┑谋磉_(dá)也大幅下降補(bǔ)充外源性RA可明顯減輕致癌劑導(dǎo)致的肝纖維化在體外還可拮抗TGFΒ、PDGF刺激HSC增殖及誘導(dǎo)Ⅰ型前膠原MRNA水平升高的作用提示RA和RA核內(nèi)受體的相互作用是維持HSC于靜息狀態(tài)或調(diào)節(jié)HSC某些功能的重要環(huán)節(jié)PDGF是HSC的強(qiáng)有絲分裂原這種作用主要通過細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)也可通過SAPKJNK途徑活化JNK上調(diào)AP1活性AP1與相應(yīng)的DNA序列結(jié)合調(diào)節(jié)靶基因如Ⅰ型前膠原（Α1）和TGFΒ等的轉(zhuǎn)錄水平結(jié)論1RXRΑ、RARΒ受體轉(zhuǎn)染可顯著回升PDGF激活后HSC內(nèi)下降的RXRΑ、RARΒ受體水平給予相應(yīng)配體后受體的高表達(dá)可維持一段時(shí)間2RXRΑ、RARΒ受體轉(zhuǎn)染并給予相應(yīng)配體可抑制活化HSC的增殖3RXRΑ、RARΒ受體轉(zhuǎn)染并給予相應(yīng)配體可明顯下調(diào)活化HSC的ΑSMA、DESMIN蛋白表達(dá)水平4RARΒ受體轉(zhuǎn)染并給予相應(yīng)配體ATRA后活化HSC的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原及FN蛋白表達(dá)水平及Ⅰ、Ⅲ型膠原、FNMRNA水平明顯降低RXRΑ受體轉(zhuǎn)染并給予相應(yīng)配體9CISRA后活化HSC的Ⅰ型膠原、FN蛋白表達(dá)及MRNA水平明顯降低但對(duì)Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白表達(dá)及Ⅲ型膠原MRNA水平無明顯影響5RXRΑ、RARΒ受體轉(zhuǎn)染并給予相應(yīng)配體可明顯抑制PDGF上調(diào)的MEK1、ERK蛋白表達(dá)及MRNA水平ERK、JNK磷酸化水平AP1的結(jié)合活性

簡介：點(diǎn)擊查看更多一 心肌梗死后骨髓干細(xì)胞動(dòng)員作用的實(shí)驗(yàn)研究;二 冠心病人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及分化.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多急性髓性白血病間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人胃癌細(xì)胞中熱休克蛋白（HSP）GP96和NM23表達(dá)的生物學(xué)意義及相關(guān)性研究姓名邵龍華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化內(nèi)科）指導(dǎo)教師熊鋒寶20080601摘要P0．05；侵犯深度中MPSO64．3％與MPSL．357．7％的差異性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X2O．1648，P0．05。結(jié)論L、胃癌組織細(xì)胞中熱休克蛋白GP96表達(dá)明顯高于慢性胃炎及消化性潰瘍，這提示了熱休克蛋白GP96參與胃癌的發(fā)生。而在低分化胃癌的組織中的表達(dá)明顯高于中高分化胃癌；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；TNM分型中HIIV組織中的表達(dá)明顯高于IⅡ型，說明了它與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；而不同大體形態(tài)及侵犯深度中，熱休克蛋白GP96表達(dá)存在差異，這也從另一個(gè)側(cè)面反應(yīng)了熱休克蛋白GP96在腫瘤大體形態(tài)及侵犯深度中的作用機(jī)制可能不同。2、胃癌組織細(xì)胞中RIM23表達(dá)明顯低于慢性胃炎及消化性潰瘍，這提示了NM23與胃癌的形成有關(guān)。而在低分化胃癌的組織中的表達(dá)明顯低于中高分化胃癌；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；TNM分型中HIIV組織中的表達(dá)明顯低于III型，說明了它與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；而不同大體形態(tài)及侵犯深度中，NM23表達(dá)存在差異，這也從另一個(gè)側(cè)面反應(yīng)了NM23在腫瘤大體形態(tài)及侵犯深度中的作用機(jī)制可能不同。3、在胃癌的形成中，與熱休克蛋白GP96表達(dá)呈正相關(guān)，而與RIM23的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；在胃癌不同的臨床病理分期中，熱休克蛋白GP96與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分型表達(dá)呈正相關(guān)而NM23與之相反。試驗(yàn)表明熱休克蛋白GP96及NM23在胃癌的形成和浸潤轉(zhuǎn)移中存在著協(xié)同作用。因而熱休克蛋白GP96及NM23可作為胃癌的早期診斷、判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)檢測，其表達(dá)強(qiáng)度的高低有望成為指導(dǎo)臨床治療的一個(gè)手段。關(guān)鍵詞胃癌免疫組織化學(xué)熱休克蛋白GP96RIM23III

簡介：血管平滑肌細(xì)胞（VULARSMOOTHMUSCLECELLSVSMCS）是血管壁主要細(xì)胞成分之一，它由收縮表型向合成表型去分化（DEDIFFERENTIATION）是血管重建（REMODELING）發(fā)生發(fā)展過程中的重要事件。VSMCS的細(xì)胞外基質(zhì)（EXTRACELLULARMATRIX，ECM）合成參與調(diào)控細(xì)胞增殖和遷移，對(duì)維持血管壁彈性和功能穩(wěn)定具有重要作用。血液動(dòng)力學(xué)因素和生長因子是引起VSMCS表型轉(zhuǎn)化和細(xì)胞外基質(zhì)合成的重要因素。在體VSMCS主要受到脈動(dòng)血流產(chǎn)生的機(jī)械張應(yīng)力的作用，轉(zhuǎn)化生長因子Β1（TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1，TGFΒ1）是調(diào)控VSMCS表型轉(zhuǎn)化和ECM合成的重要生長因子之一。研究周期性張應(yīng)變和TGFΒ1對(duì)VSMCS分化和ECM的影響及其機(jī)制，對(duì)于探討血管重建機(jī)制有重要的意義。本文應(yīng)用FX4000T細(xì)胞張應(yīng)變加載系統(tǒng)，對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠VSMCS施加10％周期性張應(yīng)變，頻率為125HZ，加載時(shí)間為24H，以未加載張應(yīng)變的靜態(tài)VSMCS為對(duì)照組。采用WESTERNBLOTTING檢測組蛋白去乙?；窼IRT1和SIRT2以及收縮表型標(biāo)志分子Α肌動(dòng)蛋白（ΑACTIN）、調(diào)寧蛋白（CALPONIN）和肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白（SM22Α）蛋白水平的變化；抑制劑SALERE抑制SIRT1和SIRT2表達(dá)，基因芯片篩查SALERE干預(yù)下周期性張應(yīng)變加載VSMCS的差異表達(dá)基因，以研究SIRT1和SIRT2在生理范圍周期性張應(yīng)變對(duì)VSMCS表型分化中的影響及其分子機(jī)制。使用10NGML濃度的TGFΒ1重組蛋白對(duì)體外培養(yǎng)的VSMCS刺激24H，以未加刺激的VSMCS為對(duì)照組，采用WESTERNBLOTTING檢測SIRT1、SIRT2，收縮表型標(biāo)志分子CALPONIN、SM22Α，ECMCOLLAGENI、ELASTIN、COLLAGENIII蛋白水平的變化；抑制劑SALERE或SIRNA干擾抑制SIRT1和SIRT2表達(dá)，以研究SIRT1和SIRT2在TGFΒ1對(duì)VSMCS表型分化和細(xì)胞基質(zhì)合成中的影響及其分子機(jī)制。結(jié)果顯示①施加10125HZ周期性張應(yīng)變誘導(dǎo)VSMCS收縮表型標(biāo)志分子ΑACTIN、CALPONIN和SM22Α的表達(dá)增加；②周期性張應(yīng)變誘導(dǎo)SIRT1和SIRT2的蛋白表達(dá)增加；③SIRT1和SIRT2抑制劑SALERE抑制周期性張應(yīng)變誘導(dǎo)的SIRT1和SIRT2的表達(dá)，同時(shí)顯著抑制VSMCS收縮表型標(biāo)志分子的表達(dá)；④基因芯片篩選121個(gè)差異表達(dá)基因，可能受SIRT1和SIRT2調(diào)控，參與包括分化在內(nèi)的多種生物過程。⑤10NGML濃度的TGFΒ1重組蛋白刺激24H，誘導(dǎo)VSMCS收縮表型標(biāo)志分子CALPONIN、SM22Α和ECMCOLLAGENI、ELASTIN、COLLAGENIII的表達(dá)上升；⑥TGFΒ1誘導(dǎo)SIRT1和SIRT2的蛋白表達(dá)增加；⑦SALERE抑制TGFΒ1誘導(dǎo)的SIRT1和SIRT2的表達(dá)，同時(shí)顯著抑制VSMCS收縮表型標(biāo)志分子CALPONIN、SM22Α和ECMCOLLAGENI、ELASTIN的表達(dá)，但是對(duì)COLLAGENIII無顯著影響；⑧SIRT1和SIRT2的SIRNA干擾抑制TGFΒ1誘導(dǎo)的SIRT1和SIRT2表達(dá)，顯著抑制VSMCS收縮表型標(biāo)志分子CALPONIN、SM22Α的表達(dá)。⑨SALERE抑制TGFΒ1誘導(dǎo)的SMAD5、AKT、ERK磷酸化，但是對(duì)CTGF無影響。上述結(jié)果表明，周期性張應(yīng)變和TGFΒ1可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的合成型VSMCS分化為收縮表型，TGFΒ1可誘導(dǎo)VSMCSECMCOLLAGENI和ELASTIN合成，其機(jī)制都與SIRT1和SIRT2信號(hào)通路相關(guān)。結(jié)果提示，在體情況下血管正常范圍的張應(yīng)變以及TGFΒ1刺激，能防止VSMCS由收縮表型向合成表型去分化，促進(jìn)ECM合成，維持血管結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文胎兒多種組織間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特征及胎兒骨髓血液血管干細(xì)胞特性的研究姓名郭虹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師趙春華200341中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士研究生學(xué)位論文染色鈣鹽塵積的成骨細(xì)胞分化，說明都能向脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化。另外，我們分離的闖充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)分化成為脂肪細(xì)胞后CDL05的表達(dá)明顯下降、有的脂肪細(xì)咆甚至丟失提示CDL05可能在維持間充質(zhì)干細(xì)胞的干細(xì)胞特性上起關(guān)鍵作用，進(jìn)一步證明了CDL05是間充質(zhì)干細(xì)胞的重要表型。以上結(jié)果說明從心、肝、肺、主動(dòng)脈血管、真皮和骨骼肌分離的CDL05成纖維樣的細(xì)胞具有問充質(zhì)干細(xì)胞的特征，提示分布于各組織器官的CDL05的細(xì)胞含有問充質(zhì)干細(xì)胞?？赡芘c所在的組織和器官損傷后的細(xì)胞再生與修復(fù)有關(guān)。第二部分我們分析了從多種組織和器官分離的間充質(zhì)干細(xì)胞在向脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化時(shí)的特征并討論了與某些疾病潛在的關(guān)系。在向脂肪細(xì)胞分化時(shí)，地塞米松可以促進(jìn)脂肪的分化，透射電鏡結(jié)果顯示誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞胞漿內(nèi)外可見有胞膜的脂滴，培養(yǎng)液中甘油三酯的含量增高。另外，在向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外均可見鈣鹽沉積。此結(jié)果說明分布于各組織的間充質(zhì)干細(xì)胞在脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)條件下，可以產(chǎn)生含有甘油三酯的脂滴并溢出細(xì)胞外，并且地塞米松促進(jìn)脂肪的分化；在向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)條件下，在胞漿內(nèi)形成鈣鹽沉積并分泌至細(xì)胞外。提示多種組織和器官的間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪和成骨細(xì)胞異常分化，可能會(huì)影響脂類的代謝或細(xì)胞的正常功能，可能與動(dòng)脈粥樣硬化，高脂血癥和硬化病等疾病有關(guān)。因此，對(duì)間充干細(xì)胞的增殖和分化的調(diào)控研究將可能提供治療與之相關(guān)的疾病的新的方法。第三部分我們進(jìn)一步探討了TGF3I對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化與增殖的影響。CDL05作為TGFB1的III型受體，可以與I和II組成功能性的受體復(fù)合物。為此，我們?cè)陂g充質(zhì)干細(xì)胞分化時(shí)加入TGFPI觀察其對(duì)細(xì)胞增殖與分化的影響。結(jié)果顯示CDL05的間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成的脂肪細(xì)胞，CDL05表達(dá)明顯降低，有的細(xì)胞甚至不表達(dá)CDL05。在向脂肪分化的過程中，加入150NG／ML的TGFPI后，一直無充滿大脂滴的脂肪細(xì)胞出現(xiàn)，在成骨誘導(dǎo)過程中，加入TGFIBI大于20NG／ML，鈣化基質(zhì)沉淀明顯降低。而CDL05在細(xì)胞有絲分裂時(shí)表達(dá)明顯高于非分裂相的細(xì)胞，在脂肪誘導(dǎo)環(huán)境中，MTT染色檢測TGFBI對(duì)細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用PO05。2

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文人肝癌細(xì)胞系FHCC98的建立及其生物學(xué)特性研究與體外藥理實(shí)驗(yàn)姓名樓朝陽申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師馮英明20040501第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文縮略語HCCHABL8GCDL47PBSSDSSPHELFHABL8PAGETEMEDPICKLDHHE5FUMDRSAPKERKMMPSFCSFBSSCGECONASPFELISANBTNAD縮略語表莢文壘稱HEPATOCE|LULARCARCINOMAHEPATOMAANTIBODY18ASSOCIATEDANTIGENCLUSTEROFDIFFERENTIATION147PHOSPHATEBUFIEREDSALINESODIUMDODECYLSULFATESTREPAVIDINPEROXIDASEHUMANEMBRYONICLUNGFIBROBLASTMONOCLONALANTIBODYAGAINSTHUMANHEPATOMAL8POLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISN，N，N’，N’TETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEPROPIDIUMIODIDECYTOKERATINLACTICDEHYDROGENASEHEMATOXYLINANDEOSINSTAINING5FLIOROURACILMULTIDRUGRESISTANCESTRESSACTIVATEDPROTEINKINASEEXTRACELLULARREGULATIONKINASEMATRIXMETALLOPROTEINASESPETALCALFSERUMFETALBOVINESERUMSINGLECELLGELELECTROPHORESISASSAYCONCANAVALINASPECIFICPATHOGENFREEENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYNITROBENZENETHIOCYANATENICOTINANIDEADENINEDINUCLEOTIDEFOXIDEDL第1頁中文全稱肝細(xì)胞肝癌肝癌單抗HABL8相關(guān)抗原白細(xì)胞分化抗原147磷酸鹽緩沖液十二烷基磺酸鈉鏈霉素抗生物素一過氧化物酶人胚胎肺成纖維細(xì)胞抗人肝癌單克隆抗體18聚丙烯酰銨凝膠電泳N，N，N’，N1一四甲基乙二胺碘化丙啶細(xì)胞角蛋白乳酸脫氫酶同工酶蘇木素伊紅染色5氟脲嘧啶多耐藥性應(yīng)激活化的蛋白激酶細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶基質(zhì)金屬蛋白酶小牛血清胎牛血清單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)刀豆球蛋白A無特定病原體酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)氯化硝基四氯唑藍(lán)氧化型輔酶I

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文人牙髓細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立及生物學(xué)特性研究姓名張春艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（口內(nèi)）指導(dǎo)教師孫善珍20030422山東太學(xué)碩士學(xué)位論文久牙髓纓腱囂多}培莽模鍪鰉建變愛生物學(xué)特毪研究?牙髓干細(xì)胞定位的初步探討研究生張春艷導(dǎo)師孫謄珍教授中文摘要囂豹邋過建立囂麓、穰髓纓魅熬體羚培養(yǎng)模鱉，研究斃較幫贛粒體癸生長特性、堿性磷酸酶活性以及礦化結(jié)節(jié)形成的能力；并引入礦化小結(jié)作為牙黼干細(xì)胞體鈴分化的標(biāo)記，初步探討牙髓干細(xì)胞在瓣髓、根髓中的存在情況，為牙髓予緇瑰靜迸一移琴}究羹定墓獺。方法采用臨床因正畸或阻生拔除的第三磨牙，于無菌條件下分別取出冠髓、根髓1用組織塊法和組織塊酶解法分鄹進(jìn)行冠、根髓的原代培養(yǎng)。2繪裁生長魏線；采靂黼疆酉睦釜滾溺定鬃爨璜熬活毪；考罵麓亮夔法測定細(xì)胞器白質(zhì)含量。3體外持續(xù)培養(yǎng)冠髓、檄髓細(xì)胞并分別設(shè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照綴用正常培養(yǎng)滾，實(shí)驗(yàn)組在囊鬻培莽滾熱入10NMOL／L遮褰張撿、TOMMOL／L§一甘油磷酸鈉、50MG／L，維生素C。分別于培養(yǎng)的5、LO、15天時(shí)進(jìn)行堿性磷酸酶染色，對(duì)冠髓和根髓細(xì)胞的ALP活性以及鼴組的ALP活性分蘩送行魄鞍。4冠髓、根髓細(xì)胞體外持續(xù)培養(yǎng)，用蔭索紅和VONKOSSA兩種染甑方法觀察冠、檄髓細(xì)胞礦化縭節(jié)形成情況。

簡介：研究目的1體外建立K562IMATINIB耐藥細(xì)胞株并對(duì)其生物學(xué)特性初步探討。2研究其可能的耐藥機(jī)制，為腫瘤耐藥的研究提供實(shí)驗(yàn)室條件。研究方法1K562耐藥細(xì)胞耐藥克隆建立以伊馬替尼IMATINIB濃度梯度遞增法誘導(dǎo)K562細(xì)胞耐藥。極限稀釋法克隆篩選，建立耐藥細(xì)胞株。2K562R的生物學(xué)特性分析24孔板培養(yǎng)K562R和K562S，繪制細(xì)胞生長曲線。MTT法檢測不同濃度組的伊馬替尼對(duì)K562S和K562R耐藥性。3K562R耐藥機(jī)制的初步分析PCR技術(shù)擴(kuò)增BCRABL融合基因及MDRL多藥耐藥基因。測序分析ABL酪氨酸激酶區(qū)有無點(diǎn)突變。流式細(xì)胞術(shù)檢測PGP表達(dá)。研究結(jié)果1KS62R的克隆純化和生物學(xué)特性分析極限稀釋法成功克隆篩選出6株K562IMATINIB純化細(xì)胞株，其能長期存活于5ΜMOLL的伊馬替尼培養(yǎng)液中。細(xì)胞生長曲線顯示5ΜMOLL伊馬替尼作用于K562R細(xì)胞120H，活細(xì)胞數(shù)量與0H活細(xì)胞數(shù)量相比呈指數(shù)遞增。6個(gè)濃度梯度的伊馬替尼0、025、05、075、10、20ΜMOLL作用于K562S細(xì)胞24H，發(fā)現(xiàn)所有濃度0濃度除外伊馬替尼均可明顯抑制K562S細(xì)胞的生長，24H細(xì)胞活力幾乎為零。MTT法抑制率測定K562S細(xì)胞IC50為067±009ΜMOLL，K562R細(xì)胞約為1017±085ΜMOLL，耐藥倍數(shù)約為15倍，細(xì)胞耐藥性明顯增加，各耐藥細(xì)胞株間IC50無顯著性差異。2K562R耐藥機(jī)制的初步分析巢式PCR檢測K562R及K562S細(xì)胞株均有1579BP及863BP大小BCRABL融合基因表達(dá)，863BP目的基因序列測定未發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變。RTPCR檢測發(fā)現(xiàn)一株耐藥細(xì)胞MDR1表達(dá)陽性，流式細(xì)胞術(shù)檢測其PGP弱陽性，兩者具有一致性。結(jié)論1體外成功建立K562IMATINIB耐藥細(xì)胞株6株，平均耐藥濃度為1017±085ΜMOLL，耐藥倍數(shù)約為15倍，耐藥性明顯增加。各耐藥細(xì)胞株間IC50無顯著性差異。2多藥耐藥基因MDRL及其編碼蛋白PPG參與了K562R6的耐藥機(jī)制。3BCRABL激酶區(qū)序列測定未發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變，其耐藥機(jī)制有待于更進(jìn)一步的研究。

簡介：分類號(hào)密級(jí)尺1夠．轉(zhuǎn)么千L單位代碼10422學(xué)號(hào)P小夠3Z⑧∥蔡辦I碩士學(xué)位論文論文題目THESISFORMASTERDEGREE朋2刮匡瑾繃胞對(duì)人乞舌，絢岔勿施厶協(xié)忱怕歷訝坦翮影_向．EFF彩。7肌M叩諏叭召C．口幻，以渺PF以～二鋤樅咖胖批銣厶L／，作者學(xué)院專業(yè)指導(dǎo)合作姓名名稱名稱教師導(dǎo)師墊疊匡辱}鉑園九殳副彀數(shù)為節(jié)年歲月2日目錄中文摘要?????????????????????????1英文摘要?????????????????????????4符號(hào)說明?????????????????????????71LJL一日U舌???????????????????????????9實(shí)驗(yàn)材料和方法????????????????????????15實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????????????????????29討論??????????????????????????34參考文獻(xiàn)????????????????????????37致謝??????????????????????????43攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文???????????????44

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文凝血酶對(duì)人牙髓成纖維細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)及其受體在人牙髓組織中表達(dá)的研究姓名王美霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔科學(xué)口內(nèi)指導(dǎo)教師張郁200051第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文，觀察凝血酶作用后HDPF超微結(jié)構(gòu)的變化。F結(jié)果與對(duì)照組相比較，凝血酶1～25U／M1刺激48H后，HDPF明顯向周圍伸展，體積變大，突起增多、伸長，變得粗大，核仁突出，核質(zhì)比增加，胞漿豐富，可見較豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和大量核糖體，高爾基復(fù)合體發(fā)達(dá)，呈典型的生長合成旺盛像。提示凝血酶可能通過改變HDPF的超微結(jié)構(gòu)，而增加細(xì)胞遷移、游走能力，促使細(xì)胞分裂增殖、合成膠原等細(xì)胞外基質(zhì)?！?凝血酶受體TR在人牙髓組織和培養(yǎng)的HDPF中的表達(dá)為了探討凝血酶對(duì)牙髓的作用機(jī)理，采用免疫組化方法觀察了TR在人牙髓組織和培養(yǎng)的HDPF中表達(dá)的研究。結(jié)果體外培養(yǎng)的TDPF呈強(qiáng)陽性染色，經(jīng)凝血酶作用的HDPF，與對(duì)照組相比，染色強(qiáng)度無明顯差異正常及炎癥的牙髓組織中成牙本質(zhì)細(xì)胞層、牙髓細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞呈廣泛的陽性表達(dá)；炎癥牙髓組織中可見炎癥浸潤區(qū)的淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞染色為陽性。提示HDPF的TR表達(dá)水平不受凝血酶濃度調(diào)控，凝血酶對(duì)牙髓的作用，可能與其表達(dá)TR密切相關(guān)。斗關(guān)鍵詞凝血酶受體人牙髓成纖維細(xì)胞人牙髓

簡介：華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生物學(xué)特性研究姓名錢坤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師何福仙200251蘭型墊奎蘭旦塑墨蘭墮』生竺型I蘭一6．23／一0．64PO．O1。4、異位內(nèi)膜ECADHERIN表達(dá)積分為3．45／1．45顯著低于正常內(nèi)日苴RR50／．089OO1、。、L一1廠一“P膜8．O01廣Y。結(jié)論1、異位內(nèi)膜細(xì)胞并非高度增殖而是表現(xiàn)為抗凋亡、侵襲性。2、本實(shí)驗(yàn)提示異位內(nèi)膜細(xì)胞的細(xì)胞周期受到了正常的調(diào)控。3、異位內(nèi)膜細(xì)胞的生物學(xué)特性在EM的病因及病理生理中起著重要作用。關(guān)鍵詞子宮內(nèi)膜異位癥鈣粘素．E●KI。67細(xì)胞周期細(xì)胞凋亡

簡介：研究背景銀屑病PSIASIS是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，病情頑固，且發(fā)病率在逐年增高。該病組織病理改變主要為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞KERATINOCYTE，KC過度增殖和分化異常，真皮乳頭毛細(xì)血管增生、擴(kuò)張，以及真表皮內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤。近年來，銀屑病發(fā)病的免疫機(jī)制備受關(guān)注，對(duì)銀屑病患者皮損處T細(xì)胞的特性及其產(chǎn)生細(xì)胞因子功能的研究發(fā)現(xiàn)，一種新的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞即TH17細(xì)胞及其活化后產(chǎn)生的細(xì)胞因子INTERLEUKIN17AIL17A、IL17F和IL22在銀屑病的發(fā)病中具有重要作用。一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是在銀屑病患者的皮損及血漿中IL22表達(dá)均顯著增加。研究表明，IL22阻礙KC的終末分化，誘導(dǎo)KC的促炎基因表達(dá)和KC的遷移。然而目前并不十分明確IL22介導(dǎo)的KC效應(yīng)的細(xì)胞分子機(jī)制。GRB2相關(guān)結(jié)合蛋白12GRB2ASSOCIATEDBINDER12，GAB12是一類腳手架接頭蛋白，主要參與膜表面受體酪氨酸激酶和非受體酪氨酸激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。磷酸化的GAB1通過與含有2個(gè)SRC同源結(jié)構(gòu)域SH2的蛋白酪氨酸磷酸酶SRCHOMOLOGY2DOMAINCONTAININGTYROSINEPHOSPHATASE，SHP2相互作用，具有調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)的表皮生長和分化，但尚不清楚GAB1以及同樣高表達(dá)于KC細(xì)胞上的GAB2在IL22誘導(dǎo)的KC增殖、遷移和分化中是否發(fā)揮作用銀屑病屬于中醫(yī)“白疕”、“蛇虱”、“松皮癬”等范疇。清熱解毒，涼血活血是中醫(yī)治療本病的重要治則。紫草味甘、咸，性寒，有涼血、活血、清熱、解毒透疹等功效。紫草素SHIKONIN為紫草中的主要有效成分之一，具有多種藥用價(jià)值，包括抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)靜、清熱解毒、免疫調(diào)節(jié)以及促進(jìn)傷口愈合等。在對(duì)紫草素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)，紫草素可調(diào)節(jié)促分裂原活化蛋白激酶激酶MITOGENATIVATEDPROTEINKINASEKINASE，MAPK通路的活性，降低ERK，JNK，STAT3磷酸化水平，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長、增殖、存活。臨床發(fā)現(xiàn)紫草素治療銀屑病具有較好的療效，但其機(jī)制尚有待探討。我們提出一假設(shè)，即紫草素通過拮抗IL22刺激皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞引起的GAB12的磷酸化，進(jìn)一步抑制其下游ERKMAPK信號(hào)通路的活化，從而抑制KC增殖，影響KC分化及遷移等。本文的研究目的第一部分研究紫草素對(duì)IL22刺激HACAT細(xì)胞生物學(xué)行為影響1觀察紫草素對(duì)IL22刺激HACAT細(xì)胞增殖、遷移的影響2觀察紫草素對(duì)IL22刺激HACAT細(xì)胞分泌S100A7，S100A8、S100A9的影響。第二部分紫草素對(duì)IL22刺激HACAT細(xì)胞生物學(xué)行為改變的機(jī)制研究1研究IL22刺激HACAT細(xì)胞中JAK1TYK2STAT，ERKMAPK信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)2研究IL22刺激GAB1和GAB2突變體（SHP2結(jié)合缺陷型）感染的HACAT細(xì)胞中ERKMAPK信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)3研究IL22刺激GAB1和GAB2基因沉默的HACAT細(xì)胞中ERKMAPK信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)4探討GAB1和GAB2是否共同參與IL22誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖和遷移以及對(duì)細(xì)胞分化的影響5研究IL22刺激HACAT細(xì)胞后GAB1、GAB2以及ERK12磷酸化水平及紫草素干預(yù)后的變化。研究方法1WST1法檢測細(xì)胞增殖2TRANSWELL法檢測細(xì)胞遷移3REALTIMEPCR法檢測基因MRNA表達(dá)4WESTERNBLOT法檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)5免疫沉淀技術(shù)檢測特定蛋白間的相互作用6構(gòu)建SHP2結(jié)合缺陷型GAB1和或GAB2以及GAB1和GAB2SIRNA干擾的重組腺病毒7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS170統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜005時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果1紫草素抑制HACAT細(xì)胞的生長不同濃度的紫草素對(duì)HACAT細(xì)胞的生長有一定的抑制作用，但低濃度時(shí)（濃度為01和025ΜGML），紫草素本身不影響細(xì)胞活性，對(duì)HACAT細(xì)胞無損傷及毒性作用。2紫草素抑制IL22介導(dǎo)的HACAT細(xì)胞增殖和遷移實(shí)驗(yàn)分組未處理（未加紫草素和IL22）組、IL22刺激24H組、IL22紫草素24H組，IL22刺激48H組、IL22紫草素48H組。紫草素作用濃度選擇為025ΜGML，IL22推薦工作濃度為100NGML，IL22刺激HACAT細(xì)胞24H和48H后可促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移，與未處理組相比，P均＜005加入紫草素組，IL22誘導(dǎo)的HACAT細(xì)胞增殖和遷移作用被抑制，P均＜005。3紫草素可下調(diào)IL22誘導(dǎo)的促炎癥因子S100A7、S100A8MRNA表達(dá)REALTIMEPCR檢測紫草素對(duì)IL22刺激HACAT細(xì)胞分泌促炎癥因子S100A7、S100A8，S100A9MRNA影響，根據(jù)擴(kuò)增曲線由公式得出2△CT值（即實(shí)驗(yàn)組目的基因的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組基因的變化倍數(shù)），IL22刺激S100A7S100A8MRNA表達(dá)與未處理組相比其差別倍數(shù)（2△△CT）均大于2，而加入紫草素組與IL22組相比其差別倍數(shù)均小于1，表明IL22可明顯刺激HACAT細(xì)胞分泌S100A7，S100A8，而紫草素可下調(diào)IL22誘導(dǎo)的S100A7S100A8MRNA表達(dá)，但對(duì)S100A9MRNA的影響不明顯。4IL22誘導(dǎo)HACAT細(xì)胞JAK1TYK2STAT通路、MAPK通路的活化HACAT細(xì)胞饑餓處理1618H后，加入IL22100NGML刺激10MIN、20MIN、30MIN、60MIN以及120MIN，提取總蛋白，WESTERNBLOT檢測到IL22刺激10MIN后即可見JAK1TYK2STAT通路中STAT3TYR705位酪氨酸磷酸化、STAT3SER727位絲氨酸磷酸化、JAK1以及TYK2磷酸化MAPK通路中ERK12和P38磷酸化。MEK抑制劑PD9805910ΜM預(yù)處理HACAT細(xì)胞1H，然后再用IL22刺激，則ERK12活化被抑制，同時(shí)PD98059預(yù)處理后IL22誘導(dǎo)的HACAT細(xì)胞的增殖及遷移亦被抑制（P分別＜001和＜005），而KC細(xì)胞分化標(biāo)志性蛋白LICRM在IL22刺激72H后仍未檢測到表達(dá)，但PD98059預(yù)處理后再用IL22刺激則LICRIN表達(dá)明顯增加。5IL22刺激HACAT細(xì)胞引起GAB1和GAB2磷酸化，并進(jìn)一步活化ERK12IL22刺激饑餓處理后的HACAT細(xì)胞，10MIN后裂解細(xì)胞，采用免疫共沉淀技術(shù)及免疫印跡技術(shù)檢測IL22刺激后，GAB1和GAB2磷酸化水平明顯升高，SHP2結(jié)合增強(qiáng)。以表達(dá)SHP2結(jié)合缺陷型GAB1和GAB2重組腺病毒ADGAB1FF、ADGAB2F以及野生型GAB1和GAB重組腺病毒ADGAB1WT、ADGAB2WT感染HACAT檢測IL22刺激引起的ERK12以及STAT3TYR795蛋白活化水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ERK12磷酸化水平在ADGAB1FFHACAT、ADGAB2FHACAT組明顯降低，STAT3TYR795磷酸化水平在缺陷型組及野生型組基本沒有變化IL22刺激SIRNA沉默GAB1和或GAB2腺病毒感染的HACAT細(xì)胞ADGAB1SIRNAHACAT、ADGAB2SIRNAHACAT、ADGAB1SIRNAADGAB2SIRNAHACAT，檢測ERK12以及STAT3TYR795蛋白活化水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ERK12磷酸化水平在基因沉默組中明顯降低，磷酸化STAT3TYR795水平依然沒有變化。6GAB1和GAB2影響IL22誘導(dǎo)的HACAT細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移及分化與SHP2相關(guān)IL22刺激ADGAB1WTHACAT、ADGAB2WTHACAT、ADGAB1FFHACAT、ADGAB2FHACAT，24H和48H后分別檢測細(xì)胞增殖率及細(xì)胞遷移，結(jié)果ADGAB1FFHACAT、ADGAB2FHACAT組細(xì)胞增殖率減低（P均＜001），遷移細(xì)胞數(shù)減少（P均＜001）IL22刺激ADGAB1SIRNAHACAT、ADGAB2SIRNAHACAT、ADGAB1SIRNAADGAB2SIRNAHACAT，24H和48H后檢測細(xì)胞增殖率和遷移，與感染空載體HACAT細(xì)胞相比，細(xì)胞增殖率減低P＜005，P＜001，細(xì)胞遷移數(shù)減少（P均＜005）。IL22刺激重組腺病毒感染的HACAT的細(xì)胞72H后，檢測LICIN蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與野生型組相比，基因突變和沉默組細(xì)胞LICIN的表達(dá)量均明顯增加。7紫草素拮抗IL22刺激皮膚角質(zhì)細(xì)胞引起的GAB1，GAB2以及ERK12的磷酸化IL22刺激經(jīng)紫草素025ΜGML預(yù)處理HACAT細(xì)胞，檢測GAB1和GAB2以及ERK12磷酸化水平，與未經(jīng)紫草素處理組相比，明顯減低。研究結(jié)論1紫草素能夠抑制IL22誘導(dǎo)的HACAT細(xì)胞的增殖和遷移，并下調(diào)IL22誘導(dǎo)的HACAT細(xì)胞S100A7，S100A8MRNA表達(dá)。2IL22誘導(dǎo)JAK1TYK2STAT及MAPK通路在HACAT細(xì)胞中的活化，介導(dǎo)細(xì)胞增殖、遷移和分化。3GAB1和GAB2共同參與IL22誘導(dǎo)的HACAT細(xì)胞中的ERKMAPK信號(hào)通路的活化，并共同參與IL22介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、遷移和分化。SHP2與GAB1和GAB2結(jié)合是IL22介導(dǎo)的效應(yīng)所必需的。4紫草素抑制IL22誘導(dǎo)的GAB1，GAB2以及ERK12磷酸化，從而推論紫草素治療銀屑病機(jī)制可能與抑制IL22引起的GAB1、GAB2磷酸化，進(jìn)一步抑制ERK12MAPK通路活化有關(guān)。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2009級(jí)博士學(xué)位論文食管癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測方法和生物學(xué)特征的研究T1’’1‘‘‘‘‘‘‘‘●●LNENTILLCATMNMETHODSANDDIOL02ICALCHARACTERISTICS0T■L‘●L●L●_CIRCULATINGTLLMORCELLSINESOPHAGEALSQNAMOUSCELLCARCINOMA課題來源國際科技合作與交流專項(xiàng)食管癌癌變分子機(jī)理研究編號(hào)2008DFA31130和國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目973課題腫瘤微環(huán)境分泌蛋白質(zhì)介導(dǎo)的上皮細(xì)胞癌變的機(jī)制研究編號(hào)2011CB910703專業(yè)名稱學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)喬媛嬡趙曉航教授段蘊(yùn)鈾教授萬成松教授徐東剛教授宋亞軍教授周春華教授王偉主任醫(yī)師周麗君研究員論文評(píng)閱人楊曄教授虞積耀教授馬驄主任技師王嘉璽研究員2012年5月3日廣州摘要大的瀑布反應(yīng)。目前腫瘤的發(fā)現(xiàn)和診斷仍主要依賴于影像學(xué)檢查及腫瘤特異性血清標(biāo)志物的檢測，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。由于腫瘤細(xì)胞經(jīng)過血液循環(huán)系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)播散至遠(yuǎn)端器官并且形成的明顯轉(zhuǎn)移灶是惡性腫瘤最主要的死亡原因，因此CTCS檢測能夠?yàn)槟[瘤早期發(fā)現(xiàn)及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)監(jiān)測提供一種有效手段。研究表明，CTCS數(shù)量及表型的改變可作為了解惡性腫瘤生物學(xué)特征及腫瘤進(jìn)展的窗口，經(jīng)過非侵入性的檢測方法檢測CTCS，為腫瘤早期篩查、腫瘤治療的療效評(píng)價(jià)、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)監(jiān)測和預(yù)后判斷等提供必要的信息，然而常規(guī)的檢測手段很難發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞。目前，采用何種方法鑒定外周血中的CTCS，以及如何找到更多的CTCS特異性標(biāo)志物，以提高CTCS檢測的敏感性和特異性，成為該領(lǐng)域研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。本研究首先采用基于免疫磁珠的負(fù)性篩選食管癌外周血中CTCS的方法，分析CTCS與食管癌進(jìn)展的關(guān)系。總結(jié)了CTCS與食管癌分期、腫瘤體積大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移以及患者生存時(shí)間等的聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞分化程度越差、TNM分期越高，外周血CTCS檢出數(shù)量越多。CTCS水平高可能提示預(yù)后不良。外周血CTCS的檢出率，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的，腫瘤浸潤程度高的高于浸潤程度低的，腫瘤分期高的高于腫瘤分期低的，分化程度差的高于分化程度好的。術(shù)前CTCS分組以5為界值及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的顯著因素，術(shù)前CTC≥5組和CTC5組相比，病人死亡的風(fēng)險(xiǎn)為3078倍；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組相比，病人死亡的風(fēng)險(xiǎn)為3331倍。同時(shí)，追蹤了一例ESCC病例，動(dòng)態(tài)監(jiān)測不同治療階段患者外周血中CTCS細(xì)胞形態(tài)特征及數(shù)量變化，結(jié)合影像學(xué)及血清學(xué)標(biāo)志，探討其與治療療效及腫瘤進(jìn)展的關(guān)系，進(jìn)一步證實(shí)了CTCS對(duì)于腫瘤診斷和預(yù)后的價(jià)值。由于腫瘤具有異質(zhì)性，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中腫瘤細(xì)胞會(huì)發(fā)生上皮間葉轉(zhuǎn)變EPITHELIALMESENCHYMALTRANSFCIRMATION，EMT及間葉上皮轉(zhuǎn)變MESENCHYMALEPITHELIALTRANSITION，MET等過程，細(xì)胞的各種標(biāo)志會(huì)隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展而改變。CTCS脫離原發(fā)灶后，在隨后的變異中有部分細(xì)胞獲得了高

簡介：背景與目的內(nèi)毒素休克等重癥感染性疾病的發(fā)病過程中，由于多種因素的作用，患者會(huì)發(fā)生絕對(duì)或相對(duì)腎上腺功能不全，導(dǎo)致臨床搶救成功率下降。TNFΑ是一種重要的前炎癥介質(zhì)，是內(nèi)毒素休克等重癥疾病發(fā)生發(fā)展過程中主要的炎癥介質(zhì)，可作用于下丘腦垂體腎上腺軸（HPA軸）的各個(gè)環(huán)節(jié)，影響腎上腺皮質(zhì)的功能。本課題組通過檢測TNFΑ對(duì)小鼠腎上腺皮質(zhì)Y1細(xì)胞凋亡以及皮質(zhì)醇合成的影響，應(yīng)用RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察Y1細(xì)胞的TNF受體亞型的分布應(yīng)用小RNA干擾法下調(diào)Y1細(xì)胞中陽性表達(dá)的TNF受體，探討TNFΑ對(duì)干擾后Y1細(xì)胞凋亡以及皮質(zhì)醇合成的影響從而明確小鼠腎上腺皮質(zhì)Y1細(xì)胞表面是否存在TNFΑ受體，存在何種受體，以及TNFΑ對(duì)Y1細(xì)胞的作用是否通過該受體發(fā)揮作用初步探討TNFΑ對(duì)Y1細(xì)胞凋亡和皮質(zhì)醇合成影響及其作用機(jī)理。研究結(jié)果可為臨床內(nèi)毒素休克等重癥感染性疾病的救治提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法1、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測TNFΑ在不同劑量、不同作用時(shí)間對(duì)Y1細(xì)胞凋亡的影響，同時(shí)應(yīng)用酶標(biāo)法檢測CASPASE8和CASPASE3的變化，探討其對(duì)細(xì)胞凋亡通路的影響2、應(yīng)用放免法檢測一定濃度的TNFΑ或和ACTH作用Y1細(xì)胞不同時(shí)間后對(duì)皮質(zhì)醇合成的影響3、應(yīng)用RTPCR檢測一定濃度的TNFΑ或和ACTH作用Y1細(xì)胞不同時(shí)間后對(duì)皮質(zhì)醇合成限速酶類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白STAR表達(dá)的影響4、應(yīng)用RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在MRNA和蛋白水平檢測Y1細(xì)胞表面TNF受體類型5、小RNA干擾法下調(diào)Y1細(xì)胞中陽性表達(dá)的TNF受體，QPCR法和WESTERNBLOT法檢測干擾效果6、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測TNFΑ在不同劑量、不同作用時(shí)間對(duì)TNFRMIRNAY1細(xì)胞凋亡的影響，同時(shí)應(yīng)用酶標(biāo)法檢測CASPASE8和CASPASE3的變化，觀察其在劑量、時(shí)間上對(duì)凋亡通路的影響7、應(yīng)用放免法檢測一定濃度的TNFΑ或和ACTH作用TNFRMIRNAY1細(xì)胞不同時(shí)間后對(duì)其皮質(zhì)醇合成的影響。結(jié)果1、Y1細(xì)胞在100～250UML的TNFΑ作用不同時(shí)間后，細(xì)胞凋亡率明顯增加P＜005，同時(shí)CASPASE8和CASPASE3的表達(dá)增強(qiáng)，呈劑量、時(shí)間依賴性P＜005）2、TNFΑ單獨(dú)作用對(duì)Y1細(xì)胞皮質(zhì)醇合成的抑制不明顯P＞005，ACTH可明顯促進(jìn)Y1細(xì)胞皮質(zhì)醇的合成P＜005，TNFΑ與ACTH共同作用后，可明顯抑制Y1細(xì)胞由于ACTH介導(dǎo)的皮質(zhì)醇合成的增加P＜0053、RTPCR結(jié)果顯示TNFΑ單獨(dú)作用對(duì)Y1細(xì)胞的STAR抑制作用不顯著（P＞005），ACTH單獨(dú)作用后STAR表達(dá)顯著上升P＜005）。而TNFΑ和ACTH共同作用Y1細(xì)胞STAR的表達(dá)受到抑制P＜0054、RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示Y1細(xì)胞TNFR1MRNA和蛋白表達(dá)陽性，TNFR2MRNA和蛋白表達(dá)陰性5、檢測小RNA抑制TNFR1后的TNFRMIRNAY1細(xì)胞干擾效率為7174％，WESTERNBLOT顯示TNFRMIRNAY1細(xì)胞TNFR1表達(dá)水平明顯下降6、TNFΑ對(duì)TNFRMIRNAY1細(xì)胞凋亡無明顯促進(jìn)作用P＞005，對(duì)CASPASE83活性也無明顯影響P＞0057、放免結(jié)果顯示ACTH可明顯促進(jìn)TNFRMIRNAY1細(xì)胞皮質(zhì)醇的合成P＞005，TNFΑ與ACTH共同作用后，對(duì)TNFRMIRNAY1細(xì)胞ACTH介導(dǎo)的皮質(zhì)醇合成的無明顯影響P＞005。結(jié)論1、TNFΑ能夠誘導(dǎo)Y1細(xì)胞的凋亡，并呈劑量時(shí)間依賴關(guān)系這種凋亡誘導(dǎo)作用可能是通過激活CASPASE8和CASPASE3通路實(shí)現(xiàn)的2、TNFΑ單獨(dú)作用對(duì)Y1細(xì)胞的皮質(zhì)醇合成和STAR的影響不顯著ACTH單獨(dú)作用能夠促進(jìn)Y1細(xì)胞皮質(zhì)醇的合成和STAR的表達(dá)TNFΑ與ACTH共同作用可能通過下調(diào)STAR的表達(dá)而抑制Y1細(xì)胞ACTH介導(dǎo)的皮質(zhì)醇的合成3、從蛋白、MRNA水平證實(shí)，Y1細(xì)胞以表達(dá)TNFR1為主4、TNFΑ對(duì)干擾后的TNFRMIRNAY1細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)激酶CASPASE8和CASPASE3無明顯影響同時(shí)TNFΑ與ACTH共同作用對(duì)TNFRMIRNAY1細(xì)胞的皮質(zhì)醇的合成影響不顯著，提示TNFΑ對(duì)Y1細(xì)胞的作用是通過TNFR1介導(dǎo)而實(shí)現(xiàn)的。