簡介：目的本研究旨在建立一種分離、培養(yǎng)擴增臍帶源間充質(zhì)干細胞HUMANUMBILICALCDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，HUCMSCS的方法，通過對其基本生物學(xué)特性、體外誘導(dǎo)分化能力、綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEINGFP基因質(zhì)粒對其標記示蹤的可能性及體內(nèi)移植促進皮膚創(chuàng)面修復(fù)的可行性等的研究，以期為組織工程種子細胞提供新的細胞來源，為燒傷、腫瘤等導(dǎo)致的皮膚缺損患者的臨床治療提供新思路。方法1、首先建立HUCMSCS分離和培養(yǎng)擴增的方法并通過細胞形態(tài)學(xué)、細胞增殖的研究、細胞免疫表型分析及體外誘導(dǎo)分化能力的檢測對其基本生物學(xué)特性進行研究并與生物學(xué)特性研究較多的臍血間充質(zhì)干細胞HUMANUMBILICALCDBLOODHUCBMSCS進行比較骨髓間充質(zhì)干細胞BONEMARROWMESCNCHYMALSTEMCELLSBMMSCS的生物學(xué)特性研究最多，但本實驗由于骨髓標本來源受限。2、將已轉(zhuǎn)化的GFPN2大腸桿菌109菌種，進行質(zhì)粒提取，脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HUCMSCS，分別于轉(zhuǎn)染24H，96H后計算熒光的轉(zhuǎn)染效率，以未標記的同期細胞作為對照。3、將已標記綠色熒光蛋白基因質(zhì)粒的HUCMSCS移植至表皮缺損的裸鼠表皮缺損處，采用組織切片、免疫熒光等方法檢測裸鼠表皮愈合及HUCMSCS在皮膚缺損處的分布。結(jié)果1、HUCMSCS接種后2448H貼壁，成纖維細胞樣克隆形成UNITFIBROBLASTLIKECOLONYFMING，CFUF時間為57D，首次傳代時間為1216D，對數(shù)生長期細胞倍增時間為29H，均較HUCBMSCS短。免疫表型分析顯示HUCMSCS和HUCBMSCS均表達粘附分子和基質(zhì)細胞標記CD13、CD29、CD105、CD166，不表達造血細胞標記CD14、CD34、CD45，不表達內(nèi)皮細胞標記CD31，兩者表型基本一致，無明顯區(qū)別。此外，實驗還證實HUCMSCS具有向成骨細胞和脂肪細胞誘導(dǎo)分化能力。2、綠色熒光蛋白基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HUCMSCS24H后綠色熒光表達率為37％，而且短期內(nèi)隨著培養(yǎng)時間延長，表達率有上升趨勢。3、實驗組裸鼠大體觀察表皮愈合較對照組好，組織切片見實驗組皮膚結(jié)構(gòu)層次較清晰而對照組大多數(shù)為疤痕愈合，結(jié)構(gòu)層次不清楚，免疫熒光觀察見HUCMSCS在表皮缺損愈合的新生血管中有存活，對照組為陰性。結(jié)論1、成功建立了從人足月臍帶中分離培養(yǎng)擴增HUCMSCS的方法，操作簡單、易行，分離培養(yǎng)的HUCMSCS具有MSCS的基本生物學(xué)特性和免疫表型，且比HUCBMSCS含量更豐富，具有更強的增殖能力，可以作為組織工程新的細胞來源。2、脂質(zhì)體介導(dǎo)的綠色熒光蛋白基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUCMSCS標記示蹤技術(shù)是一種理想的較穩(wěn)定示蹤標記技術(shù)，可以應(yīng)用為組織工程種子細胞示蹤的實驗研究。3、HUCMSCS機體內(nèi)移植能促進皮膚缺損的愈合，可為皮膚缺損患者的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。

簡介：USP22對膠質(zhì)母細胞瘤生物學(xué)特性的調(diào)節(jié)作用研究⑧論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名論文評閱人1評閱人2評閱人3評閱人4評閱人5匿名評閱匿名評閱匿名評閱匿名評閱匿名評閱答辯委員會主席張亞卓教授／博導(dǎo)首都醫(yī)科大學(xué)附屬天壇醫(yī)院蛋貝L塞9住國熬援么譴昱浙江太堂醫(yī)堂隨瞪屆篡三醫(yī)院安貝2毯建民熬援么擅昱逝選太堂匡堂院瞪屆筮三醫(yī)院一一．蛋貝史．王豎苤圭任醫(yī)巫逝江太堂醫(yī)堂醫(yī)隘廈置G逸去醫(yī)院一蛋貝4陵盤達圭任醫(yī)巫塹選省厶民醫(yī)院蛩貝，圃丞麼圭廷醫(yī)啞』熊昱塑’江厶堂醫(yī)堂隨瞰屆箜二匡瞳蛋貝6郄歪廷主任醫(yī)巫塹江太堂醫(yī)堂瞳瞪屆笠二匡隧答辯日期20L2年5月24日THEEFFECTSOFSILENCINGUSP22BYSIL礬AONBIOLOGICALBEHAVIOROFPRIMARYCUITUREDGBMCELLSAUTHOR’SSIGNATLLREF、●●●JSUPERVLS0R7SS12NATURETHESISREVIEWERLTHESISREVIEWER2THESISREVIEWER3THESISREVIEWER4THESISREVIEWER5CHAIRANONYMOUSANONYMOUSANONYMOUSANONYMOUSANONYMOUSPROFZHANGYAZHUOCOMMINEEOFORALDEFENCECOMMITTEEMAN1COMMITTEEMAN2COMMITTEENLAN3PROFLIUW色IGUOPROFZHANGJIANMINDR．WANGⅥRONGCOMMITTEEMAN4DR．CHENSHUDACOMMITTEEMAN5DR．ZHOUYONGQINGCOMMITTEEMAN6DR．ZHENGXIUJUEDATEOFORALDEFENCEMAY24，2012

簡介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文尿液腫瘤生物學(xué)標記物（LEWISX、LEWISA、UBC）對膀胱移行細胞癌的診斷價值姓名張文夏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床技能（泌尿外科）指導(dǎo)教師李如昌2002422復(fù)旦大學(xué)研究生院碩士學(xué)位論文第二部分血型抗原LEWISX在膀胱移行細胞癌尿液脫落細胞標本中的表達撾牲墨立洼受試對象為155例因疑為膀胱癌收住入院的患者，以及103例膀胱癌保留膀胱手術(shù)后隨訪病人。尿液脫落細胞標本分別行常規(guī)細胞學(xué)檢查和以免疫組化ENVISION二步法進行LEWISX抗原染色，計數(shù)每100個脫落細胞所含陽性染色細胞數(shù)目。J結(jié)果根據(jù)ROE曲線得出最佳閾值為5個陽性細胞／100脫落細胞，此時靈敏度單次試驗為82．1～84．2％，特異性為80．3～78．9％，兩次測定作為平行試驗靈敏度為86．8％，特異性為77．O％；靈敏度提高，特異性略有下降。以11個陽性細胞／100脫落細胞為閾值的靈敏度和特異性分別為66．0％和95．4％。尿液脫落細胞學(xué)的靈敏度和特異性分別為47．6％和94．7％印，結(jié)論LEWISX抗原靈敏度高于尿液脫落細胞學(xué)，對低分級、早期腫瘤差別尤其明顯，用于臨床檢驗技術(shù)上難度不大。與B型超聲結(jié)合可以提高靈敏度。第三部分UBCTEST撻抖生直選受試對象同實驗第二部分。每一受試對象采集1．5M膀胱內(nèi)保留3小時以上的自然排出中段尿液，采用IDEALLHONOCIONALUBCELISAKIT，通過每一標本在450HM分光光度儀讀取的吸收值計算UBC濃度，并以尿液肌酐濃度校正。與BTASTAR進行比較。繾里UBC校正值最佳閾值為37LIGUBC／MGCREA，對應(yīng)靈敏度和特異性分別為75．4％和71．2％。BTASTAT靈敏度和特異性分別為63．2％和63．4％。／／，璧墜三一UBCELISATEST總的靈敏度和特異性高于同為快速診斷試驗的BTASTARTEST，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。，關(guān)鍵詞膀胱移行細胞癌診蹣標記物LEWISX抗原／，LEWISA抗原UBCE獅ATEST／2

簡介：研究目的該實驗以大鼠ED135D的HPFL為實驗材料目的在于探索1肝干細胞的體外分離培養(yǎng)的特點2肝干細胞的體外多向分化3體外擴增的肝干細胞植入體內(nèi)的發(fā)育潛力4凍存復(fù)蘇對肝干細胞的生物學(xué)特性的影響以便為臨床應(yīng)用治療肝臟疾病奠定基礎(chǔ)研究結(jié)論HPFL具有干細胞的一般特性具有很強的體外擴增和雙向分化能力盡管凍存復(fù)蘇對HPFL的生物學(xué)功能有一定的影響但HPFL仍可通過凍存長期保存為肝干細胞庫的建立提供了理論依據(jù)和實驗數(shù)據(jù)作為一種有潛力的備選細胞HPFL所表現(xiàn)出的這些優(yōu)于成熟肝細胞的特點為臨床應(yīng)用治療肝臟疾病提供了一種新的選擇

簡介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文ASTROCYTEELEVATEDGENE1在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及基因沉默對細胞生物學(xué)行為的影響姓名劉海燕申請學(xué)位級別博士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師孫若鵬20090415山東大學(xué)博士學(xué)位論文位于8，Q22，該區(qū)域也是人類膠質(zhì)瘤的高度相關(guān)地帶。AEG1CDNA的全長為361LBP，包括多聚A尾，開放閱讀框架從220到1986堿基，編碼的蛋白由582氨基酸組成，分子量為64KDA，等電點為933。近年來對AEG1展開了深入的研究，發(fā)現(xiàn)AEG1不僅能促進神經(jīng)退行性變的發(fā)生，還能促進腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移。盡管對AEG1在細胞內(nèi)的功能、機制及生物學(xué)功能還不完全清楚，最近的研究強烈支持AEG1是促進腫瘤進展的一個關(guān)鍵因子。AEG1在多種體外培養(yǎng)的腫瘤細胞如乳腺癌、多形性膠質(zhì)細胞瘤、前列腺癌及黑色素瘤和腫瘤組織標本中是高表達的。AEG1的過表達能增加腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲，基因沉默AEG1能降低人腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。AEG1是HARAS信號途徑的下游基因，HARAS激活可以增加細胞的克隆形成，而AEG1基因沉默能顯著抑帶THARAS激活導(dǎo)致的效應(yīng)。AEG1的異位過表達還導(dǎo)致NFRD3反應(yīng)的粘附分子ICAM2，ICAM3，選擇素E，選擇素L，選擇素P配體，TLR4TOLL1IKERECEPTOR，TLR5和IL一8等的細胞因子上調(diào)，解釋了AEG1增加乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移和永生化的黑素細胞對肺上皮細胞粘附的機制。但是，其在神經(jīng)母細胞瘤中的表達情況還不清楚，同時，還沒有任何研究把側(cè)重點放在AEG1與臨床病理參數(shù)的關(guān)系及其能否成為預(yù)測腫瘤預(yù)后的指標上，因此本課題不僅研究AEG1在神經(jīng)母細胞瘤中的表達情況，同時研究AEG1與臨床特征的關(guān)系及其對病人預(yù)后的影響。I礬A干擾IⅢAINTERFERENCE，IⅢAI是指雙鏈RNADSRNA進入細胞后特異性阻斷與其同源的基因表達的現(xiàn)象。它是當前研究基因功能的重要工具，而且已有人將其應(yīng)用于腫瘤、病毒感染基因治療的研究中。用慢病毒LENTIVIRUS做載體介導(dǎo)RNAI用于基因治療的研究更有實際應(yīng)用潛力，因為與其它病毒載體系統(tǒng)相比，慢病毒能轉(zhuǎn)導(dǎo)非分裂NONDIVIDING細胞并將SHRNA表達結(jié)構(gòu)整合到宿主細胞基因組，實現(xiàn)目的基因的穩(wěn)定沉默。我們假設(shè)用RNA干擾技術(shù)破壞AEG1MRNA，使AEG1蛋白的合成處在極低的水平，降低AEG1蛋白及對下游基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，能夠在很大程度上阻斷腫瘤細胞的AEG1的表達，抑制AEG1促進腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的效應(yīng)，提高神經(jīng)母細胞瘤的治療效果。在本研究中，首先深入了解AEG1在神經(jīng)母細胞瘤中的表達情況，以及其與神經(jīng)母細胞瘤的臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系；在此基礎(chǔ)上采用慢病毒介導(dǎo)RNAI的方式建立AEG1基因穩(wěn)定沉默的神經(jīng)母細胞瘤細胞株，證明其AEG1基因沉默的效果；通過與其親本細胞的比較，觀察阻斷AEG1蛋白對細胞2

簡介：目的探討成人外周血來源的平滑肌祖細胞SMOOTHMUSCLEPROGENITCELLSSPCS與成熟血管平滑肌細胞SMOOTHMUSCLECELLSSMCS細胞形態(tài)、增殖潛能等方面的異同點為血管組織工程提供可靠的種子細胞來源。方法1、密度梯度離心法分離成人外周血中單個核細胞于用纖粘連蛋白包被的含血小板衍生生長因子BBPLATELETDERIVEDGROWTHFACTBBPDGFBB和EGM2培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導(dǎo)培養(yǎng)觀察細胞形態(tài)變化常規(guī)換液、傳代、凍存及復(fù)蘇。2、通過手術(shù)取得實驗用大隱靜脈3CM采用膠原蛋白酶消化、差異貼壁法原代培養(yǎng)含PDGFBB的EGM2培養(yǎng)基培養(yǎng)觀察細胞形態(tài)獲得平滑肌細胞。3、平滑肌祖細胞及平滑肌細胞分別進行細胞爬片應(yīng)用細胞免疫熒光檢測平滑肌肌動蛋白ΑSMA和調(diào)寧蛋白CALPONIN1的表達。4、用RTPCR檢測平滑肌肌動蛋白ALPHASMOOTHMUSCLEACTINASMA和調(diào)寧蛋白CALPONIN1CAP的MRNA表達。5、MTT四唑鹽比色實驗分別檢測第6代平滑肌祖細胞與平滑肌細胞的增殖能力。結(jié)果1、SPCS傳代細胞培養(yǎng)達8090％融合時呈螺旋狀排列并可呈典型“峰、谷”樣形態(tài)符合平滑肌細胞形態(tài)學(xué)特征。2、平滑肌祖細胞可表達平滑肌細胞特異性標記ΑSMA和CALPONIN1。3、第6代的SPCSN10A043±002增殖能力明顯強于第6代的SMCSN10A021±002P結(jié)論1、外周血中單個核細胞在PDGFBB的刺激下可以分化為具有平滑肌細胞特性的平滑肌祖細胞。2、平滑肌祖細胞較平滑肌細胞增殖旺盛培養(yǎng)3個月未見老化具有發(fā)展為一種理想的血管組織工程種子細胞來源的可能性。

簡介：背景和目的同源盒基因在胚胎發(fā)育中調(diào)節(jié)細胞的生長、分化和遷移GAXGROWTHARRESTHOMEOBOX基因是一個主要存在于心血管系統(tǒng)的同源盒基因血管壁中GAX基因表達在球囊損傷后快速下調(diào)在受有絲分裂原刺激后由G期向G期轉(zhuǎn)變的血管平滑肌細胞VSMC中也明顯降低其降低程度與有絲分裂原刺激DNA合成的能力有關(guān)GAX基因在VSMC中的這種表達模式與GASGROWTHARRESTSPECIFIC基因和GADDGROWTHARRESTDNADAMAGEINDUCIBLE基因相似后二者中的一些基因表達增強時可抑制細胞生長說明GAX基因?qū)SMC的生長和增殖可能起著抑制作用考慮到VSMC的增殖、遷移以及凋亡失調(diào)在血管成形術(shù)后再狹窄病灶新生內(nèi)膜形成中起著重要作用該實驗通過構(gòu)建攜帶GAX基因的重組腺病毒載體并轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的VSMC研究GAX基因表達增強后VSMC增殖、遷移和凋亡等生物學(xué)行為所受影響及其機制從而探討增強GAX基因表達對血管成形術(shù)后再狹窄的作用和意義結(jié)論1PDGFBB刺激使GAX基因在細胞轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達均下降且隨PDGFBB濃度的升高GAX基因表達下降程度更加顯著2該實驗構(gòu)建的復(fù)制缺陷型腺病毒重組體ADCMVGAX轉(zhuǎn)染VSMC后可顯著增強GAX基因在VSMC的表達3ADCMVGAX轉(zhuǎn)染使VSMC表達GAX增強后可抑制由有絲分裂原刺激所引起的VSMC增殖GAX基因抑制VSMC增殖的機制與其增強P21和P27表達、抑制CDK2和PCNA的活性有關(guān)GAX基因?qū)X43表達的調(diào)控使正常的細胞間連接通訊得到維護也是其抑制VSMC增殖的重要機制4ADCMVGAX轉(zhuǎn)染使VSMC表達GAX增強后可抑制由有絲分裂原刺激所引起的VSMC遷移GAX基因抑制VSMC遷移的作用可通過抑制MMP2的表達和骨橋蛋白的轉(zhuǎn)錄來實現(xiàn)5ADCMVGAX轉(zhuǎn)染使VSMC表達GAX增強后可促進有絲分裂原刺激后的VSMC凋亡但對靜止期細胞無促進凋亡的作用GAX基因?qū)SMC凋亡的調(diào)控可通過促進BAX蛋白和抑制BCL2蛋白的表達來實現(xiàn)6GAX基因所介導(dǎo)的上述作用可能有利于減輕血管球囊損傷后新生內(nèi)膜的形成對RS的防治有益

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文SURVIVIN對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路姓名艾志宏申請學(xué)位級別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師豐有吉20060401復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文兩株子宮內(nèi)膜癌細胞ISHIKAWA和HEC一1一A中均為強陽性表達。2SURVIVIN蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達水平顯著高于不典型增生子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜組織分別為PO．05和PO．01。SURVIVIN蛋白在兩株子宮內(nèi)膜癌細胞ISHIKAWA和HEC一1一A中也均為強陽性表達，與RTPCR結(jié)果一致。SURVIVIRL蛋白在子宮內(nèi)膜癌細胞中的表達部位主要是細胞漿。結(jié)論SURVIVIN的過度表達可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān)。第二部分SURVIVIN對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、凋亡的影響目的探討SURVIVIN對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、凋亡的調(diào)控作用及其相關(guān)機制。方法針對SURVIVINMRNA序列設(shè)計了三條SURVIVIN特異性的SIRNAS和一條陰性對照NONTARGETSIRNA，并分別克隆入PRNA質(zhì)粒載體。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ISHIKAWA細胞，用RNAI抑制ISBIKAWA細胞中SURVIVIN的表達。采用RTPCR和WESTERNBLOT檢測干擾效果，BRDU實驗和流式細胞儀分別檢測干擾前后細胞增殖和細胞凋亡的變化。并用WESTERNBLOT檢測了與細胞增殖密切相關(guān)的CYCLIND1、CYCLINE、PRB的表達以及與凋亡密切相關(guān)的CASPASE一3、CASPASE一8、BCL一2的表達，初步探討SURVIVIN調(diào)控細胞增殖和細胞凋亡的途徑。結(jié)果1成功構(gòu)建了三個針對SURVIVIN基因MRNA不同位點的重組質(zhì)粒PRNATSUVL，PRNATSUV2，PRNATSUV3和一個陰性對照質(zhì)粒PRNATNEG。其中兩個質(zhì)粒PRNATSUV2和PRNATSUV3特異并有效地抑制了ISHIKAWA細胞中SURVIVIN的表達，同未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染PRNATNEG組相比，SURVIVINMRNA的表達水平分別被抑制了78．97±4．13％和80．23±5．42％均為PO．01；SURVIVIN蛋白的表達水平分別被抑制了81．61±3．45％和82．63±4．76％均為PO．01。2RNA干擾SURVIVIN使細胞周期阻滯在G．期，顯著抑制了細胞的增殖。四組細胞的增殖率分別為未轉(zhuǎn)染組52．42_3．17％，轉(zhuǎn)染PRNATNEG組49．67±2．52％，轉(zhuǎn)染PRNATSUV2組33±2．65％，轉(zhuǎn)染DRNATSUV3組34±2．0％。干擾組與陰性對照組分別比較，差異均有顯著性均為尺O．01。3細胞周期蛋白CYCLIND1和P～RB在RNA干擾后表達明顯下降，而CYCLINE含量則無明顯變化。4RNA干擾SURVIVIN誘導(dǎo)了細胞凋亡。四組細胞的凋亡率分別為未轉(zhuǎn)染組2．17±O．05％，轉(zhuǎn)染PRNATNEG組3．99±0．17％，轉(zhuǎn)染PRNATSUV2組38．48±2．13％，轉(zhuǎn)染PRNATSUV3組39．39±2．55％。干擾組與陰性對照組分別比較，差異均有顯著性均為PO．01。5RNA干擾SURVIVIN使CASPASE一3和CASPASE一8裂解增加，而BCL一2的表達無明顯變化。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文姜黃素Ⅲ脂質(zhì)體制備及其對肺癌細胞A549生物學(xué)特性的影響姓名宮亮申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（呼吸系?。┲笇?dǎo)教師楊和平20040501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2LIPOSOMALPREPARATIONOFCURCUMINANDITSEFFECTSONTHEBIOLOGICALPROPERTIESOFHUMANPULMONARYADENOCARCINOMACELLLINEA549ABSTRACTPULMONARYCARCINOMAISONEOFTHECOMMONLYENCOUNTEREDMALIGNANTTUMORSINWHICHMORETHAN80ARENONSMALLCELLLUNGCANCERNSCLCNSCLCHASPOORSENSITIVITYTORADIOTHERAPYANDCHEMOTHERAPYTHEGROWTH,RECURRENCE,ANDMETASTASISOFTUMORARETHEMAINFACTORSAFFECTINGTHEPROGNOSISITHASINDICATEDTHATCURCUMINOIDS,THEMAINACTIVEINGREDIENTINCURCUMA,HASSIGNIFICANTLYINHIBITORYEFFECTONVARIOUSTYPESOFTUMORSITCANINFLUENCEEACHPHASEOFTHETUMORGROWTHINITIATIONPROMOTIONANDPROGRESSION,ANDHASINHIBITORYEFFECTONINFILTRATIONANDMETASTASISBYMEANSOFINHIBITIONTHETUMORANGIOGENESISCURCUMINOIDSINCLUDEMAINLY3KINDSOFACTIVEMONOMES,IECURCUMINICURCUMIN,CURCUMINIIDEMETHOXYCURCUMIN,ANDCURCUMINBISDEMETHOXYCURCUMINPREVIOUSSTUDIESHAVEPROVEDTHATCURCUMINHASSTRONGERACTIVITYINANTITUMORANDANTIANGIOGENESISHOWEVER,CURCUMINOIDSCANNOTBEDISSOLVEDINWATERANDCANALSOBEOXIDIZEDEASILYINVITRO,SOVENOUSADMINISTRATIONISHARDANDTHEREHASBEENNODRUGPREPARATIONWITHGOODSTABILITYBESIDES,INVIVOSTUDIESHAVEREVEALEDTHATSMALLAMOUNTOFCURCUMINCANBEDETECTEDINPLASMAAFTERORALADMINISTRATIONANDLARGEAMOUNTOFCURCUMINISINACTIVATEDBYMETABOLISMINGASTROINTESTINALTRACTSTHESEBRINGABOUTDIFFICULTIESINTHECLINICALAPPLICATIONOFCURCUMINRECENTSTUDIESHAVESHOWNTHATLIPOSOMEENCAPSULATIONTECHNIQUECANBEEMPLOYEDTOSOLVETHEPROBLEMTHATFATSOLUBLEDRUGSCANNOTBEEASILYDISSOLVEDINWATERLIPOSOMEISALSOANIDEALCARRIEROFANTITUMORDRUGSITCANDECREASETHETOXICITYOFTHEENCAPSULATEDDRUGSANDINCREASETHEAMOUNTOFDRUGSABSORBEDBYHIGHLYPROLIFERATIVETUMORCELLSTHEREFORE,INTHISSTUDYWEAPPLIEDLIPOSOMEFORTHEENCAPSULATIONOFCURCUMIN,ANDEMPLOYEDPULMONARYADENOCARCINOMACELLLINEA549ASTHEOBJECTFORTHESTUDYOFANTINONSMALLCELLLUNGCANCERTHEPURPOSEISTOEXPLORINGTHEPOSSIBILITYOFNEWPREPARATIONOFCURCUMINSUITABLEFORVENOUSADMINISTRATIONUSINGLIPOSOMEASACARRIER,ANDFURTHERUNDERSTANDINGTHEEFFECTSOFCURCUMINONTHEBIOLOGICALPROPERTIESOFPULMONARYCARCINOMACELLSANDTOPROVIDEPROOFFORTHEFURTHERSTUDIES

簡介：現(xiàn)代大量研究均表明，胃經(jīng)穴位電針對胃腸功能有良好的調(diào)整作用，但其確切機制仍未完全闡明。進一步闡明電針足三里穴對胃運動、胃電雙向調(diào)節(jié)的發(fā)生機制，對指導(dǎo)臨床治療具有重要的意義。本實驗在電針大鼠足三里穴情況下，在觀察胃電圖變化的基礎(chǔ)上，研究針刺足三里穴引起胃電起搏區(qū)CAJAL間質(zhì)細胞（INTERSTITIALCELLSOFCAJALICCS的變化及與ICCS信息傳遞密切相關(guān)的縫隙連接蛋白43CX43的變化、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族中的ERK的變化情況，并同步采用基因芯片技術(shù)，研究電針大鼠足三里穴引起信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及標志基因的變化，為探討電針對胃運動的調(diào)節(jié)作用機制提供全新的理論依據(jù)。方法①將大鼠隨機分成足三里組、非經(jīng)非穴組、非針刺組，采用電生理學(xué)方法同步觀察電針后胃電的變化；②采用免疫組化熒光雙重標記ICCS與CX43、ICCS與ERK的方法，觀察針刺足三里穴引起胃電起搏區(qū)ICCS的變化、與ICCS信息傳遞相關(guān)的CX43的變化、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族中的ERK的變化情況；③采用基因芯片技術(shù)，按TRIZOL法抽提三個胃組織標本總RNA，經(jīng)純化、逆轉(zhuǎn)錄合成摻入生物素標記的CRNA合成探針，與美國SUPERARRAY公司的OLIGOGEARRAY基因芯片雜交，掃描芯片熒光信號圖像，計算機分析，比較基因及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路差異。結(jié)果1電針足三里穴對胃電有明顯影響。電針足三里穴可使胃電頻率及波幅增高，提示電針足三里穴對胃動力有明顯促進作用。2電針足三里穴可顯著激活胃肌間和肌層ICCS表達及與ICCS信息傳遞密切相關(guān)CX43的表達；電針足三里穴能促進肌間和肌層與ICCS調(diào)節(jié)胃運動的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)之MAPK途徑中ERK的上調(diào)表達。3篩選出與針刺作用相關(guān)的標志基因及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。三個標本中，電針足三里組明顯差異表達的標志基因HOXA1、LEP、BCL2上調(diào)，分屬于維甲酸通路、胰島素通路、SURVIVAL通路、雌激素通路、磷脂酶C通路；電針足三里組明顯差異表達的標志基因PTGS2下調(diào)，屬于磷脂酶C通路。其中LEP基因的上調(diào)表達，與ICCS的激活呈正相關(guān)關(guān)系，而PTGS2基因的下調(diào)表達與ICCS的激活呈負相關(guān)關(guān)系，可能在胃運動功能調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮作用。結(jié)論電針足三里穴對大鼠胃電具有明顯的促進作用；電針足三里穴促進胃運動的機制可能通過激活I(lǐng)CCS而產(chǎn)生顯著電生理活動、通過ICCS及SMC之間的縫隙連接蛋白傳遞達到平滑肌進而調(diào)節(jié)胃運動。這一作用的完成，可能是通過ICCS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)MAPK途徑中ERK通路實現(xiàn)的；電針調(diào)控大鼠胃運動的機制與某些差異基因上調(diào)或下調(diào)表達及其相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文慢病毒導(dǎo)入的PLCGAMMA1SIRNA對人大腸癌細胞生物學(xué)行為的影響姓名譚麗申請學(xué)位級別碩士專業(yè)細胞生物學(xué)指導(dǎo)教師羅深秋20060606中文摘要腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用還并不清楚。傳統(tǒng)研究PLCGAMMAL的方法存在著很大的局限性和不客觀性，如用U73122對PLCGAMMAL進行抑制，它屬于PLC的特異抑制劑，在抑制了PLCGARNMAL的同時也抑制了PLC其它亞型的活性，這使得實驗結(jié)果很難解釋，缺乏客觀性。另外運用含有SH2，SH3和一個INHIBITORYI結(jié)構(gòu)域的顯性負突變片段PLCZ的表達來抑制PLCGAMMAL的表達，理論上雖然可行，但是由于蛋白質(zhì)翻譯后的修飾和加工機制，因此在真核細胞中蛋白的表達需要一個很有效的蛋白表達系統(tǒng)刁一行，并且還會受到很多因素的限制和影響。近年來的研究表明，一些小的雙鏈RNA可以高效、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達，促使MRNA降解，誘使細胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型，可作為一種抑制細胞中某個基因表達的有力工具。與傳統(tǒng)的反義技術(shù)相比較，RNA干擾的作用更為強大，可作為基因治療的工具，在腫瘤、感染性疾病或顯性遺傳疾病中發(fā)揮作用。目前已有研究顯示2卜NTSIRNA能夠特異性抑制哺乳動物及小鼠中內(nèi)源基因的表達。但是對于特異性SIRNA的導(dǎo)入來說，以DNA為基礎(chǔ)的質(zhì)粒載體可將SIRNAS導(dǎo)入到哺乳細胞內(nèi)，但只是瞬時地表達SIRNAS，不容易得到穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。利用脂質(zhì)體或物理方法如電穿孔直接導(dǎo)入SIRNAS，轉(zhuǎn)染效率低下，會使細胞的活性喪失。相比較而言，病毒載體能夠有效地導(dǎo)入SIRNA，并且趨向于提供更為穩(wěn)定的基因表達抑制，尤其是慢病毒載體，它不僅可以穩(wěn)定地表達SIRNA，而且還具有很高的轉(zhuǎn)染效率轉(zhuǎn)染效率大于90％和較長時間的持續(xù)效應(yīng)。本課題以大腸癌細胞為研究模型，利用RNA干涉技術(shù)等手段，研究了PLCGAMMAL與大腸癌細胞多種生物學(xué)行為的關(guān)系，以期全面地揭示PLCGAMMAL在大腸癌發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，為尋找治療的靶位點和大腸癌的基因治療提供理論和實驗依據(jù)。本研究首先合成特異性干擾PLCGAMMAL的SHRNA分子，并與入門載體PENTR“／U6連接，使PLCGAMMAL的SHRNA分子克隆到啟動子U6的下游，然后與病毒載體PLENTI6／BLOCKIT“一DEST在ATT位點重組，在三種包膜載體

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文阿霉素誘導(dǎo)人膽管癌細胞系耐藥株的建立及其生物學(xué)特性評價姓名李明申請學(xué)位級別碩士專業(yè)普外科指導(dǎo)教師吳小鵬20060303山東大學(xué)碩士學(xué)位論文阿霉素誘導(dǎo)人膽管癌細胞系耐藥株的建立及其生物學(xué)特陛評價研究生導(dǎo)師專業(yè)李明吳小鵬副教授外科學(xué)普外科中文摘要目的多藥耐藥MULTIDRUGRESISTANCE，MDR是腫瘤化學(xué)治療的主要障礙，使得膽管癌的化學(xué)治療效果差，本研究擬在源于人的肝門部膽管癌原發(fā)灶的膽管癌細胞系FRH020I的基礎(chǔ)上建立膽管癌細胞阿霉素耐藥株FRH一020L／ADM，并研究其生物學(xué)特性，為探討惡性腫瘤細胞對化療耐藥的機制并且體外逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的新方法，克服當前化學(xué)治療腫瘤中存在的這一主要障礙奠定一個研究的基礎(chǔ)平臺。方法選擇我們建立并已經(jīng)傳代的原發(fā)肝門部膽管癌細胞系FRH一0201，已傳至第120代，細胞生長穩(wěn)定，用2UG／ML阿霉素ADRIAMYCIN，ADM間歇性作用誘導(dǎo)法逐漸篩選出耐藥細胞，最終建立了能在I|LGML阿霉素濃度的培養(yǎng)液中生長并傳代的膽管癌細胞阿霉素耐藥株FRH020I／ADM。以FRH一020I為對照，通過光鏡觀察細胞的形態(tài)變化，通過MTT繪制生長曲線觀察細胞的生長規(guī)律和倍增時間；用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測細胞的腫瘤標志物CAL99和CAL25的變化情況；用MTT法檢測耐藥性即耐藥指數(shù)的改變；流式細胞術(shù)檢測細胞的周期分布的變化；逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測了MDRL基因MRNA表達量。免疫組織化學(xué)抗體染色檢測細胞表面耐藥基因MDRI的表達產(chǎn)物P一糖蛋白PGLYCOPROTEIN，PGP表達。激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)阿霉素藥物濃度的變化以觀察癌細胞的膜蛋白的功能變化情況?！锷綎|省科技廳資助課題003130107

簡介：研究目的探討晚期糖基化終產(chǎn)物AGES對人近端腎小管上皮細胞PTEC的存活代謝活性和結(jié)締組織生長因子CTGF表達的干預(yù)作用以及分子量對AGES的生物學(xué)活性的影響揭示AGES在腎臟纖維化中的作用機制研究方法1用凝膠層析法分離AGES用不同種類和濃度的AGES干預(yù)人近端腎小管上皮細胞系HK2不同時間并用氨基胍、葛根素等在此基礎(chǔ)上進行干預(yù)MTT法測定細胞的存活代謝活性半定量RTPCR測定細胞CTGF和纖維結(jié)合素FNMRNA表達水平結(jié)果1HK2細胞的存活代謝活性隨著孵育AGES的葡萄糖濃度、AGES的濃度以及干預(yù)時間的增加而降低P005但均高于消化前P005結(jié)論1AGES抑制PTEC的存活代謝活性增加其CTGFMRNA表達并且至少部分地通過增加CTGF的表達來增加FN的表達這可能是AGES致腎臟纖維化的重要機制氨基胍、葛根素可以抑制AGES的生物學(xué)效應(yīng)可能有助于延緩腎間質(zhì)纖維化的進程2分子量是影響AGES生物學(xué)效應(yīng)的重要因素小分子AGESAGEP較大分子AGES的生物學(xué)活性更強

簡介：點擊查看更多AP-1 decoy寡核苷酸對腎小管上皮細胞生物學(xué)行為及其病理炎性效應(yīng)影響的體外研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的糖基化終末產(chǎn)物ADVANCEDGLYCATIONENDPRODUCTS，AGES是體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸與葡萄糖或其他還原單糖非酶反應(yīng)生成的穩(wěn)定的共價化合物，它可通過損傷血管內(nèi)皮、促進白細胞粘附、增加血小板聚集和刺激血管平滑肌增殖等機制，促進動脈粥樣硬化、糖尿病血管并發(fā)癥、尿毒癥等疾病的發(fā)生發(fā)展。大量研究表明，AGES在動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、尿毒癥等多種血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。AGES在血管病變中的作用機理主要是損傷血管內(nèi)皮；促進白細胞粘附、聚集及活化；刺激血管平滑肌細胞增值；加快血小板聚集和血栓形成。血管病變是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥，也是當今因糖尿病致殘致死的主要原因之一。糖尿病并發(fā)癥主要以糖尿病大血管病變和微血管病變最為常見，是決定糖尿病患者預(yù)后的最主要因素，是導(dǎo)致糖尿病致死率和致殘率增高的最主要原因。因此，目前各種糖尿病并發(fā)癥的防治已成為世界醫(yī)學(xué)糖尿病研究的重要課題。AGES在糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)病中起重要作用。研究表明，內(nèi)皮祖細胞ENDOTHELIALPROGENITCELLS，EPCS在血管新生、血管內(nèi)皮修復(fù)和促進傷口愈合方面具有重要作用。但是，外周血EPCS在其分化成熟過程中，如果功能受損或過早凋亡，都會影響到血管內(nèi)膜重新內(nèi)皮化和新血管形成。1型糖尿病患者的EPCS數(shù)量較正常對照組低44％，且與糖化血紅蛋白HBALC水平有關(guān)，同時體外血管新生能力檢測證明EPCS功能減弱，其EPCS在培養(yǎng)基支持形成內(nèi)皮血管的能力明顯下降。合并有糖尿病并發(fā)癥的1型糖尿病患者的血漿AGES水平遠高于健康人群。目前，國內(nèi)外尚無AGES對EPCS功能及其凋亡方面的研究。因此，研究AGES能否影響人循環(huán)EPCS生物學(xué)特性很有必要。方法采取健康人外周血抗凝，用淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離外周血中的內(nèi)皮祖細胞和單個核細胞，在含有體積分數(shù)為02胎牛血清、20ΜGL的血管內(nèi)皮細胞生長因子和4ΜGL的堿性成纖維細胞生長因子的M199培養(yǎng)液中培養(yǎng)和擴增，由FITCUEAI和DILACLDL熒光雙染鑒定。加入不同濃度糖基化終末產(chǎn)物人血清白蛋白ADVANCEDGLYCATIONENDPRODUCTSHUMANSERUMALBUMIN，AGESHSA培養(yǎng)48H，然后分別采用MTT法、BOYDEN小室測定來觀察EPCS的增殖、遷移能力；以人纖維連接蛋白HUMANFIBRONECTIN，HFN檢測EPCS的黏附能力；用體外血管生成分析試劑盒檢測不同濃度AGESHSA作用后的EPCS成血管能力；分別采用甲醛和DNASEI誘導(dǎo)EPCS凋亡作為陽性對照組，用ANNEXINVFITCPI和TUNEL法流式細胞儀檢測AGES對EPCS凋亡率的影響。結(jié)果1經(jīng)高濃度AGESHSA作用的EPCS的梭形變能力明顯變差。2以不同濃度AGESHSA作用EPCS2天，可見AGESHSA高濃度組EPCS貼壁細胞顯著減少。3貼壁EPCS經(jīng)AGESHSA作用后，可見已貼壁細胞懸浮于培養(yǎng)基中，并隨AGESHSA濃度的增加而增多；EPCS的黏附、增殖、遷移能力在AGESHSA高濃度組均明顯減弱。4EPCS的早期凋亡在AGESHSA高濃度各組增多，各組間細胞凋亡數(shù)有統(tǒng)計學(xué)意義；中晚期凋亡檢測未見細胞凋亡隨AGESHSA濃度增加而增多，各組間細胞凋亡無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論1AGESHSA可抑制EPCS的分化、成熟，且抑制程度與AGESHSA濃度正相關(guān)。2AGESHSA顯著降低了EPCS的粘附、遷移和增殖能力P005。3AGESHSA顯著增加了EPCS的早期凋亡率P0001，未見晚期調(diào)亡出現(xiàn)。