簡(jiǎn)介：目的聚電解質(zhì)絡(luò)合法制作海藻酸鈉殼聚糖海澡酸鈉（ACA）微囊化人內(nèi)皮抑素293（HUMANENDOSTATIN293，HES293）細(xì)胞，檢測(cè)不同密度ACA微囊化HES293細(xì)胞體外培養(yǎng)狀況下的生物學(xué)性狀，及其對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的作用；比較微囊前后HES293細(xì)胞生物學(xué)性狀差異。方法聚電解質(zhì)絡(luò)合法制作不同密度的ACA微囊化HES293細(xì)胞，分為3組A組低密度組，為1104CELLSML組；B組中密度組，為1106CELLSML組；C組高密度組，為1108CELLSML組，每組6個(gè)樣本，分別在實(shí)驗(yàn)觀察的第1、3、7、14、35天，采用倒置顯微鏡觀察、臺(tái)盼蘭染色計(jì)數(shù)不同密度微囊化細(xì)胞的細(xì)胞總數(shù)和存活率，MTT法測(cè)定微囊化HES293細(xì)胞及微囊化HES293細(xì)胞與HUVEC共培養(yǎng)后HUVEC生長(zhǎng)狀況、ELISA法檢測(cè)上清液中目的蛋白的含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)微囊前后HES293細(xì)胞細(xì)胞周期。結(jié)果在實(shí)驗(yàn)觀察的35天內(nèi)，聚電解質(zhì)絡(luò)合法制作的三種不同密度的ACA微囊化HES293細(xì)胞，囊壁透明球形，表面光滑，直徑為500700ΜM。13天內(nèi)，細(xì)胞以單細(xì)胞形式均勻分布于囊內(nèi)空間。7天以后，細(xì)胞逐漸聚集生長(zhǎng)為大小不等的細(xì)胞團(tuán)。三組微囊囊內(nèi)細(xì)胞總數(shù)和活細(xì)胞數(shù)均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增多，囊內(nèi)細(xì)胞存活率均于第3天達(dá)最高，此后B組細(xì)胞存活率高于A、C組。三組細(xì)胞生長(zhǎng)速率均于第7天達(dá)高峰，此后B組細(xì)胞存活率基本保持穩(wěn)定，而A、C兩組持續(xù)降低，并于第35天降至最低點(diǎn)。ELISA法檢測(cè)三組微包囊上清液目的蛋白含量發(fā)現(xiàn)，B、C組第7天釋放ES蛋白量達(dá)最高，分別為21763±2796NGML，17974±1064NGML；B組第7天以后趨于穩(wěn)定，直至第35天；A組在第14天分泌ES蛋白量達(dá)最高，為17537±2623NGML，以后顯著下降，第35天降至最低。三組ACA微囊化HES293細(xì)胞與HUECV細(xì)胞共培養(yǎng)，第24小時(shí)，三組微囊化細(xì)胞對(duì)HUVEC細(xì)胞的增殖均未表現(xiàn)抑制作用，三組OD值分別與空白組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0536，0620，0151，0901，0397，0334）第72小時(shí)，三組OD值均較空白組低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0000，0000，0000），其中，A組低于B、C兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0022，P0006）；第120小時(shí)，三組OD值均較空白組低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0000，0000，0000），其中，B組低于A、C兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0040，P0002）。MTT法對(duì)一周內(nèi)微囊化與非微囊化HES293細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，微囊化細(xì)胞在前3天生長(zhǎng)緩慢，第5天以后生長(zhǎng)速率基本上與非微囊化細(xì)胞相當(dāng)。兩組在1、3、5、7天的OD值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（T10267，P10795；T31923，P30083；T51363，P50203；T71424，P70185）；流式細(xì)胞術(shù)分析微囊化與非微囊化HES293細(xì)胞的S期比例發(fā)現(xiàn)，第1天和第3天，兩組細(xì)胞S期的百分含量差別不大（T11061，P10443；T30676，P30551）；培養(yǎng)至第7天時(shí)，微囊化細(xì)胞S期的百分含量高于非微囊化細(xì)胞，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（T2725，P0034）；第14天微囊化細(xì)胞S期的百分含量仍然高于非微囊細(xì)胞（T2545，P0044）。結(jié)論1不同密度HES293細(xì)胞制作ACA微囊可以影響HES293細(xì)胞存活率，其中1X106CELLSML密度制作的微囊，囊內(nèi)細(xì)胞存活率較高，生長(zhǎng)較穩(wěn)定。2微囊化HES293細(xì)胞可穩(wěn)定釋放ES蛋白，并可抑制HUVEC生長(zhǎng)。3微囊化HES293細(xì)胞比非微囊化HES293細(xì)胞有較高的增殖和代謝活性，且能較長(zhǎng)時(shí)間保持此活性。

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文嗅神經(jīng)鞘細(xì)胞體外生物學(xué)作用的實(shí)驗(yàn)研究及NT3的轉(zhuǎn)染表達(dá)檢測(cè)姓名楊浩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師鞠躬200161PVDFPOLYVINYLIDENDIFHODDEEDTAA02

簡(jiǎn)介：動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)全身性的病理過(guò)程，可導(dǎo)致動(dòng)脈狹窄甚至閉塞，是造成心肌梗死、腦卒中和周圍血管慢性缺血性疾病的首要病因。經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)與支架植入術(shù)是目前治療動(dòng)脈狹窄閉塞性疾病的常用方法，然而，術(shù)后數(shù)月內(nèi)血管往往會(huì)再狹窄甚至再閉塞，因此其遠(yuǎn)期療效仍然未盡如人意。血管平滑肌細(xì)胞VSMC的異常增殖和遷移被認(rèn)為與動(dòng)脈粥樣硬化和支架植入術(shù)后再狹窄有關(guān)，而表型轉(zhuǎn)換是活化的VSMC發(fā)生上述生物學(xué)行為改變的基礎(chǔ)。因此，預(yù)防和延緩VSMC的異常增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換，對(duì)防治動(dòng)脈粥樣硬化和支架術(shù)后再狹窄意義重大。臨床上，他汀類藥物和抗氧化藥物常用于防治上述疾病。他汀類藥物通過(guò)抑制VSMC增殖并從誘導(dǎo)其凋亡，可抑制血管成形術(shù)后內(nèi)膜增生，故除用于降低血脂外，已作為一種抑制內(nèi)膜增生的藥物廣泛應(yīng)用于臨床。而普羅布考等抗氧化藥物是一種新型的抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物，與VSMC的生物學(xué)行為的關(guān)系目前仍未完全明確，因此有必要探明他汀類藥物和普羅布考對(duì)其生物學(xué)行為的影響，并比較兩者的異同。本課題將使用氧化低密度脂蛋白OXLDL分別誘導(dǎo)大鼠VSMC發(fā)生增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換，其后給予不同濃度的阿托伐他汀、普羅布考或兩者聯(lián)用，觀察這兩種藥物對(duì)VSMC上述生物學(xué)行為的影響，并比較兩者單用及聯(lián)用時(shí)效應(yīng)的異同和強(qiáng)弱，為今后臨床用藥提供依據(jù)和參考方案。第一部分血管平滑肌細(xì)胞的分離與培養(yǎng)目的從健康雄性SD大鼠胸腹主動(dòng)脈中分離、培養(yǎng)及鑒定中膜VSMC，建立簡(jiǎn)單有效的原代VSMC培養(yǎng)體系。方法無(wú)菌條件下取出健康雄性SD大鼠胸腹主動(dòng)脈，去除外膜及內(nèi)膜后，采用組織貼塊法分離和培養(yǎng)中膜VSMC，并適時(shí)傳代、凍存和復(fù)蘇。通過(guò)倒置顯微鏡連續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力，免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞純度。結(jié)果在貼塊后4D7D，原代細(xì)胞從小組織塊周圍萌出，隨后的10D14D細(xì)胞逐漸遷出和生長(zhǎng)，最終融合成致密的細(xì)胞層，從貼塊到原代細(xì)胞傳代的時(shí)間為2W3W。多數(shù)原代VSMC表現(xiàn)為典型的長(zhǎng)梭形或三角形，胞漿豐富，生長(zhǎng)至融合狀態(tài)時(shí)呈現(xiàn)出“峰谷”樣排列，傳代后的VSMC形態(tài)和排列與原代細(xì)胞保持一致。臺(tái)盼藍(lán)染色示細(xì)胞活力為963％±18％。SMΑACTIN染色陽(yáng)性的VSMC百分比為954％±27％。結(jié)論通過(guò)組織貼塊法，可在體外成功分離獲得正常大鼠主動(dòng)脈中膜VSMC，其中絕大多數(shù)是收縮型細(xì)胞，而且活力好，純度高，可用于研究VSMC的增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換等生物學(xué)行為。第二部分他汀類藥物與抗氧化藥物對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響目的觀察他汀類藥物和抗氧化藥物對(duì)VSMC增殖的影響，評(píng)估兩者單用及聯(lián)用時(shí)的影響程度差異，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定阿托伐他汀和普羅布考的最佳作用濃度。方法用MTT比色法評(píng)估阿托伐他汀在01ΜMOLL10ΜMOLL、普羅布考在1ΜMOLL100ΜMOLL的濃度范圍內(nèi)，分別單用和聯(lián)用時(shí)的細(xì)胞毒性。以O(shè)XLDL刺激VSMC，在上述濃度下分別單用和聯(lián)用阿托伐他汀和普羅布考，比較各組VSMC的吸光值。結(jié)果在上述濃度下，阿托伐他汀P0214、普羅布考（P0547）和兩藥聯(lián)用（P0999）對(duì)VSMC沒有細(xì)胞毒性作用。OXLDL能誘導(dǎo)VSMC增殖，使吸光度升高，而單用普羅布考P＜0001和兩藥聯(lián)用（P0001）可降低VSMC吸光值。阿托伐他汀和普羅布考分別在10ΜMOLL和100ΜMOLL時(shí)，對(duì)VSMC的作用最顯著。結(jié)論單用普羅布考及聯(lián)用阿托伐他汀與普羅布考均可顯著抑制VSMC的增殖，且這一抑制作用是劑量依賴性的。單用阿托伐他汀能否抑制OXLDL誘導(dǎo)的VSMC增殖活動(dòng)，需要更大樣本量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。第三部分他汀類藥物與抗氧化藥物對(duì)血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響目的觀察他汀類藥物和抗氧化藥物對(duì)VSMC遷移的影響，并評(píng)估兩者單用及聯(lián)用時(shí)的影響程度差異。方法以O(shè)XLDL刺激VSMC后，分別單用和聯(lián)用阿托伐他汀10ΜMOLL和普羅布考100ΜMOLL，其后在熒光顯微鏡下觀察對(duì)照組、OXLDL組、阿托伐他汀組、普羅布考組和阿托伐他汀普羅布考組VSMC的遷移情況，并拍照記錄，計(jì)算各照片中VSMC遷移進(jìn)入刮除區(qū)后在刮除區(qū)所占的面積百分比，以進(jìn)行細(xì)胞平面遷移分析。結(jié)果對(duì)照組遷移VSMC占細(xì)胞刮除區(qū)內(nèi)面積的百分比為580％±285％，OXLDL組為1742％±997％，阿托伐他汀組為968％±265％，普羅布考組為1184％±514％，阿托伐他汀普羅布考組為528％±224％。對(duì)照組與OXLDL組之間（P0004）及阿托伐他汀普羅布考組與OXLDL組之間P0002有顯著性差異，其余各對(duì)比較無(wú)顯著性差異。結(jié)論聯(lián)用阿托伐他汀和普羅布考可顯著抑制OXLDL誘導(dǎo)的VSMC的遷移行為。大樣本量的研究或可證明單用阿托伐他汀和單用普羅布考是否確能抑制VSMC發(fā)生遷移。第四部分他汀類藥物與抗氧化藥物對(duì)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換的影響目的觀察他汀類藥物和抗氧化藥物對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)換的影響，并評(píng)估兩者單用及聯(lián)用時(shí)的影響程度差異。方法以O(shè)XLDL刺激VSMC，其后分別使用10ΜMOLL阿托伐他汀、100ΜMOLL普羅布考和10ΜMOLL阿托伐他汀100ΜMOLL普羅布考，通過(guò)透射電子顯微鏡觀察各組VSMC的形態(tài)，免疫組織化學(xué)、WESTERNBLOT和REALTIMEPCR法檢測(cè)各組細(xì)胞的VSMC表型蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果與對(duì)照組相比，OXLDL組VSMC肌絲大量減少甚至消失，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器增多和擴(kuò)張，線粒體也增多阿托伐他汀組、普羅布考組和阿托伐他汀普羅布考組VSMC的肌絲多于OXLDL組但少于對(duì)照組，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)則少于OXLDL組VSMC。OXLDL組VSMC的SMΑACTIN、SMMHC和SMOOTHELIN的表達(dá)量在蛋白水平和MRNA水平上均顯著降低，而OPN水平顯著增高，膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ也顯著增多。阿托伐他汀組和普羅布考組的收縮型標(biāo)志物表達(dá)水平高于OXLDL組但低于對(duì)照組，OPN和膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ的水平則低于OXLDL組。阿托伐他汀普羅布考組VSMC的收縮型標(biāo)志物表達(dá)水平比阿托伐他汀組和普羅布考組更高，OPN和膠原蛋白水平則比之更低。結(jié)論阿托伐他汀和普羅布考單用時(shí)可抑制VSMC發(fā)生表型轉(zhuǎn)換，而聯(lián)用兩藥時(shí)其抑制效應(yīng)更為明顯。

簡(jiǎn)介：目的電子起搏器的局限性促使人們?cè)诰徛孕穆墒С５闹委熤袑ふ倚碌耐緩胶头椒ǎw外重新構(gòu)建具有竇房結(jié)功能的細(xì)胞便是嘗試之一。目前主要以HCN4基因轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，其雖能分化成心肌樣細(xì)胞，但由于缺乏竇房結(jié)標(biāo)記基因，功能上與竇房結(jié)細(xì)胞仍有差距。TBX3基因在胚胎發(fā)育成熟晚期存在于竇房結(jié)前體細(xì)胞中使之保留起搏功能并抑制竇房結(jié)前體細(xì)胞向心房肌細(xì)胞分化。同時(shí)TBX3與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)乳腺癌、膀胱癌、肝癌等惡性腫瘤都存在TBX3基因的過(guò)表達(dá)。本研究擬構(gòu)建同時(shí)攜帶有人。HCN4基因、TBX3基因及增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因EGFP的慢病毒顆粒，并研究HCN4和TBX3對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞EMBRYONICSTEMCELL，ES細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，為進(jìn)一步通過(guò)HCN4、TBX3共表達(dá)重建竇房結(jié)細(xì)胞功能奠定基礎(chǔ)。方法1、慢病毒包裝及滴度測(cè)定用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000分別包裹攜帶有目的基因的HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP四種目的質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，分別產(chǎn)生含有表達(dá)HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP基因的四種慢病毒顆粒，計(jì)數(shù)熒光克隆數(shù)目，并計(jì)算病毒滴度。2、干細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和篩選將獲得的四種慢病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞，48小時(shí)后于熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果。將轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增并進(jìn)行挑克隆純化，RTPCR進(jìn)一步檢測(cè)目的基因表達(dá)情況。3、ES細(xì)胞生物學(xué)活性的評(píng)價(jià)觀察獲得的四種轉(zhuǎn)基因小鼠ES細(xì)胞的形態(tài)、熒光表達(dá)強(qiáng)度。MTT法測(cè)定各組ES細(xì)胞OD值，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率。結(jié)果1、HHCN4HTBX3慢病毒顆粒的構(gòu)建四質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞后，根據(jù)熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明成功構(gòu)建HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP四種慢病毒顆粒。病毒滴度測(cè)定結(jié)果分別為47107TUML、52107TUML、45107TUML、67107TUML。2、轉(zhuǎn)基因ES細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)檢測(cè)四種慢病毒轉(zhuǎn)染后的ES細(xì)胞挑克隆純化后熒光表達(dá)正常，RTPCR示目的基因表達(dá)良好。3、ES細(xì)胞形態(tài)、凋亡等變化四種轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞中，含HHCN4EGFP及EGFP細(xì)胞形態(tài)良好，熒光率較高，含HTBX3EGFP和HHCN4HTBX3EGFP細(xì)胞狀態(tài)相對(duì)差，熒光雖然明顯，但表達(dá)不強(qiáng)，培養(yǎng)上清可見漂浮的死細(xì)胞。進(jìn)一步的MTT和流式細(xì)胞儀ANNEXINVPE檢測(cè)示HTBX3EGFP、HHCN4HTBX3兩組細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯減慢，凋亡率顯著增高P結(jié)論1成功構(gòu)建出HCN4TBX3基因的慢病毒顆粒。2HCN4及TBX3基因成功在干細(xì)胞中過(guò)表達(dá)。3TBX3對(duì)干細(xì)胞增殖無(wú)促進(jìn)作用。

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)2002級(jí)碩士學(xué)位論女818728釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白影響牙周膜細(xì)胞生物學(xué)功能的研究INVESTIGATIONOFPDLCS’BIOLOGYFUNCTIONBYEMPSANDBMP2課題來(lái)源自選專業(yè)名稱學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員口腔臨床醫(yī)學(xué)口腔內(nèi)科學(xué)劉蘭寧劉宏偉教授金巖教授章錦才教授程斌教授阮毅副教授才曉慧副教授李少萍副教授論文評(píng)閱人徐平平主任醫(yī)師李若蘭副教授2005年5月10日廣州摘要織工程學(xué)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一門新學(xué)科，其基本方法是將體外培養(yǎng)的高濃度的功能相關(guān)的活細(xì)胞種植到具有一定空間結(jié)構(gòu)的三維支架上，再將此細(xì)胞支架復(fù)合物植入體內(nèi)或在體外繼續(xù)培養(yǎng)，通過(guò)細(xì)胞之間的相互粘附、生長(zhǎng)繁殖分泌細(xì)胞外基質(zhì)，從而形成具有一定結(jié)構(gòu)和功能的組織或器官，以達(dá)到修復(fù)創(chuàng)傷和重建功能的目的。因此，研究釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白對(duì)牙周膜細(xì)胞功能的影響將有助于我們了解牙周組織再生的機(jī)理，為組織工程在牙周疾病治療方面的應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?；谝陨显颍菊撐倪M(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)一、釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖的影響本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)、MTT比色法，檢測(cè)了不同濃度的釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人PDLCS增殖的影響，測(cè)因子作用后第3、7天OD值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以進(jìn)一步觀察分析釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白促人PDLCS增殖的作用及其可能作用機(jī)理。結(jié)果表明3天內(nèi)、7天內(nèi)以及3_7天時(shí)間段內(nèi)結(jié)果基本相似，釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白單獨(dú)應(yīng)用均可促進(jìn)人PDLCS增殖，兩者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用。釉基質(zhì)蛋白和骨形成蛋白的促增殖作用里劑量依賴性，骨形成蛋白以LOOUG／L作用較佳，釉基質(zhì)蛋白以LOOMG／L，作用較佳。且釉基質(zhì)蛋白對(duì)人PDLCS促增殖作用不如骨形成蛋白。二、不同誘導(dǎo)條件對(duì)人牙周膜細(xì)胞堿性磷酸酶活性及形成礦化結(jié)節(jié)的影響本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)、堿性磷酸酶活性檢測(cè)法，檢測(cè)了LOOUG／L骨形成蛋白和LOOMG／L釉基質(zhì)蛋白對(duì)人牙周膜細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響，測(cè)因子作用后第3、7天OD值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并與傳統(tǒng)的礦化誘導(dǎo)液進(jìn)行對(duì)比，觀察因子作用后細(xì)胞堿性磷酸酶活性變化。結(jié)果表明；堿性磷酸酶活性均明顯升高，礦化誘導(dǎo)作用最強(qiáng)；骨形成蛋白基本與礦化誘導(dǎo)保持持平；釉基質(zhì)蛋白組3天點(diǎn)時(shí)，堿性磷酸酶活性與對(duì)照組相比，明顯升高，與礦化誘導(dǎo)組差異不顯著。但7天點(diǎn)與37天時(shí)間段內(nèi)與對(duì)照組相比，細(xì)胞堿性磷酸酶活性升高不明顯。II

簡(jiǎn)介：HE4蛋白對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制研究INFLUENCEOFRECOMBINANTHE4PROTEINONTHEBIOLOGICALBEHAVIORSOFSKOV3OVARIANCANCERCELLSANDTHEPOTENTIALMECHANISMS研究生王歡導(dǎo)二級(jí)學(xué)科論文課題起止時(shí)間至Q蘭生Z旦二2Q壘生壘旦論文完成時(shí)間2Q壘生壘旦中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧2014年5月目錄一、摘要中文論著摘要1英文論著摘要4二、英文縮略語(yǔ)8三、論文論文一1￡JL一日U舌9材料與方法10實(shí)驗(yàn)結(jié)果17討侖21結(jié)侖21論文二1LL、日U吾一22材料與方法22實(shí)驗(yàn)結(jié)果26討論34結(jié)論37四、本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)38五、參考文獻(xiàn)39六、附錄綜述42在學(xué)期間科研成績(jī)50致謝51個(gè)人簡(jiǎn)介52

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文17Β雌二醇對(duì)涎腺粘液表皮樣癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞MC3轉(zhuǎn)移相關(guān)生物學(xué)特性的影響姓名溫德升申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師吳軍正20040501第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文縮略語(yǔ)E2ERMC3FNMMPSVEGFPBSMCFCSDABSPBSATEMED縮略語(yǔ)表英文全稱17BETAESTRADIOLESTROGENRECEPTORMUCOEPIDERMOIDCARCINOMACELLLINEFIBRONECTINMATRIXMETALLOPROTEINASESVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTORPHOSPHATEBUFFEREDSALINEIMMUNOHISTOCHEMISTRYFETALCALFSERUM33一DIAMINODENZIDINETETRAHYDROCHLORIDESTREPTAVIDIN／PEROXIDASEBOVINESERTLNLALBUMINNNN’NTETRAMETHYLENEDIAMINE中文全稱17B一雌二醇雌激素受體粘液表皮樣癌細(xì)胞系纖維粘連蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子磷酸鹽緩沖液免疫組織化學(xué)胎牛血清3二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵自索牛血清白蛋白四甲基乙二胺

簡(jiǎn)介：目的1構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體MIGR1ICAM1，探討細(xì)胞間粘附分子1INTERCELLULARCELLADHESIONMOLECULE1，ICAM1基因轉(zhuǎn)染對(duì)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS生物學(xué)特性的影響。為進(jìn)一步研究ICAM1是否影響MSCS對(duì)自身免疫性甲狀腺炎AUTOIMMUNETHYROIDITIS，AIT體內(nèi)治療效果提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2利用外源性甲狀腺球蛋白免疫C57BL6小鼠建立AIT的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎EXPERIMENTALAUTOIMMUNETHYROIDITIS，EAT，為下一步開展大規(guī)模體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供穩(wěn)定可靠的動(dòng)物模型。方法1通過(guò)RTPCR方法擴(kuò)增獲得小鼠脾細(xì)胞ICAM1基因全長(zhǎng)DNA，將其克隆至中間載體PMD19T，行雙酶切及DNA測(cè)序鑒定后，將ICAM1基因連接至逆轉(zhuǎn)錄病毒載體MIGR1上，對(duì)重組載體MIGR1ICAM1進(jìn)行雙酶切、RTPCR及DNA測(cè)序分析。2將獲得的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒MIGR1ICAM1及空質(zhì)粒MIGR1均加入包裝質(zhì)粒ECOS后分別轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞T293細(xì)胞，將獲得攜帶ICAM1基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒MIGR1ICAM1及空載體逆轉(zhuǎn)錄病毒MIGR1，分別感染C3H10T12細(xì)胞，熒光倒置顯微鏡下觀察熒光蛋白的表達(dá)，REALTIMEPCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ICAM1在基因水平和蛋白水平的表達(dá)。同時(shí)檢測(cè)三種細(xì)胞的形態(tài)、表型、生長(zhǎng)特點(diǎn)及成脂成骨分化等一般生物學(xué)特性并通過(guò)淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)LYMPHOCYTETRANSFMATIONTEST，LTT及混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)MIXEDLYMPHOCYTEREACTION，MLR檢測(cè)三種細(xì)胞的免疫學(xué)特性。3建立EAT動(dòng)物模型，將5周齡雌性C57BL6小鼠于第0D和第14D用豬甲狀腺免疫球蛋白PCINETHYROGLOBULI，PTG及弗氏佐劑FREUNDSADJUVANT，F(xiàn)A進(jìn)行兩次免疫于實(shí)驗(yàn)第28D眼球取血，測(cè)血清甲狀腺球蛋白抗體THYROGLOBULINANTIBODY，TGAB、甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體ANTITHYROIDPEROXIDASEANTIBODIES，TPOAB、甲狀腺微粒體抗體THYROIDMICROSOMALAUTOANTIBODY，TMAB水平，并分離甲狀腺組織行HE染色及組織病分析。結(jié)果1對(duì)重組載體MIGR1ICAM1雙酶切和RTPCR電泳均顯示獲得1700BPICAM1目的基因片段DNA測(cè)序結(jié)果顯示與基因文庫(kù)中的小鼠ICAM1基因序列完全相同，且插入方向正確，從而證實(shí)成功構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體MIGR1ICAM1。2逆轉(zhuǎn)錄病毒感染C3H10T12細(xì)胞后，熒光倒置顯微鏡下可見絕大部分細(xì)胞表達(dá)綠色熒光REALTIMEPCR和流式細(xì)胞術(shù)分別在轉(zhuǎn)錄水平相對(duì)表達(dá)量162582±11942和蛋白水平（表達(dá)量903％）證實(shí)ICAM1在C3H10T12細(xì)胞中均有高表達(dá)，從而證明獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)ICAM1的間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T12C3H10T12MIGR1ICAM1MSC。3進(jìn)一步對(duì)過(guò)表達(dá)ICAM1的C3H10T12細(xì)胞的生長(zhǎng)特性、誘導(dǎo)分化能力及免疫學(xué)功能進(jìn)行研究，結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)ICAM1可使C3H10T12細(xì)胞2918±247％處于S期，且倍增時(shí)間縮短。在成脂誘導(dǎo)分化中，C3H10T12MIGR1ICAM1MSC獲得脂肪細(xì)胞數(shù)顯著降低1218±383孔，且脂滴變小REALTIMEPCR檢測(cè)成脂分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子CEBPΑ和PPARΓ的表達(dá)均顯著下調(diào)同樣，在成骨分化中，過(guò)表達(dá)ICAM1可使C3H10T12成骨分化的堿性磷酸酶活性及礦化骨結(jié)節(jié)形成能力顯著下降，關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子RUNX2和OSTEOCALCIN在MRNA表達(dá)水平亦顯著降低，提示過(guò)表達(dá)ICAM1可顯著降低MSCS的成脂和成骨分化能力。4利用淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)LYMPHOCYTETRANSFMATIONTEST，LTT和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MIXEDLYMPHOCYTEREACTION，MLR對(duì)過(guò)表達(dá)ICAM1的MSCS進(jìn)行免疫功能檢測(cè)，結(jié)果顯示，在LTT體系中，當(dāng)MSCS∶T細(xì)胞分別為1∶40和1∶5時(shí)，C3H10T12MIGR1ICAM1MSC與對(duì)照組C3H10T12MIGR1MSC的CPM值分別為195525±29260、228533±3036781200±2117、133500±20918同樣，在MSCS作為滋養(yǎng)層的MLR反應(yīng)體系中，當(dāng)刺激細(xì)胞∶效應(yīng)細(xì)胞為1∶1和1∶25時(shí)，C3H10T12MIGR1ICAM1MSC與對(duì)照組C3H10T12MIGR1MSC的CPM值分別為159850±11074、185900±11125114750±5591、149300±9833。提示過(guò)表達(dá)ICAM1的MSCS具有顯著抑制T細(xì)胞增殖的能力，且具有劑量依賴性，隨著MSCS數(shù)量的增加，其抑制能力逐漸增強(qiáng)。5C57BL6小鼠經(jīng)外源性甲狀腺球蛋白皮下免疫誘導(dǎo)后，結(jié)果顯示，模型組小鼠血清中TPOAB、TMAB、TGAB的水平6036±453、6747±625、6567±535均顯著高于對(duì)照組小鼠2145±466、768±276、759±223甲狀腺病理顯示濾泡間質(zhì)存在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況，具有典型EAT特征。結(jié)論1本研究通過(guò)構(gòu)建ICAM1的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體MIGR1ICAM1，成功獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)ICAM1的間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T12MIGR1ICAM1MSC。2對(duì)過(guò)表達(dá)ICAM1的MSCS生物學(xué)特性研究表明，過(guò)表達(dá)ICAM1可使MSCS增殖能力增強(qiáng)、成脂成骨分化能力減弱最為關(guān)鍵的是，過(guò)表達(dá)ICAM1可顯著增強(qiáng)MSCS的免疫抑制作用，為進(jìn)一步研究ICAM1是否影響MSCS對(duì)AIT體內(nèi)治療效果提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3同時(shí)本研究利用外源性甲狀腺自身抗原免疫方法成功建立EAT，從而證實(shí)該實(shí)驗(yàn)方法建模成功率高、可行性強(qiáng)并且可重復(fù)性高。為下一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了穩(wěn)定可靠的動(dòng)物模型。

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文大蒜素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用姓名吳更申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師謝曉莉20090501七年制碩士學(xué)位論文中文摘要3不同濃度大蒜素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)有不同程度的損傷，10MG／1，102MG／1，103MG／L組的損傷作用明顯。結(jié)論I大蒜素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖和蛋白合成起抑制作用，呈劑量．效應(yīng)依賴關(guān)系。在本實(shí)驗(yàn)條件下半數(shù)抑制率濃度為22MG／L。2大蒜素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)有不同程度的損傷。關(guān)鍵詞大蒜素，人牙周膜成纖維細(xì)胞，細(xì)胞增殖，總蛋白含量，超微結(jié)構(gòu)II

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多TM-TNF-α正向與反向信號(hào)對(duì)單核細(xì)胞系U937生物學(xué)功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)學(xué)號(hào)M201175513學(xué)校代碼10487密級(jí)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文神經(jīng)母細(xì)胞瘤高表達(dá)基因1（NHEG1）的生物學(xué)功能及其機(jī)制研究神經(jīng)母細(xì)胞瘤高表達(dá)基因1（NHEG1）的生物學(xué)功能及其機(jī)制研究學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人楊德華楊德華學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)小兒外科小兒外科指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師童強(qiáng)松童強(qiáng)松教授教授答辯日期答辯日期2014年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月

簡(jiǎn)介：中圖分類號(hào)密級(jí)共相關(guān)蛋白ANXA7／GAL3／SRI在小鼠肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響計(jì)學(xué)位論文43頁(yè)表格2個(gè)插圖14幅宋琳指導(dǎo)教師唐建武教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)位學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學(xué)完成時(shí)間二O一四年五月基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院答辯委員會(huì)主席關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請(qǐng)?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”1保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。2不保密口。作者簽名導(dǎo)師簽名日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：非典型趨化因子受體CCRLL對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)特性的影響THEIMPACTOFATYPICALCHEMOKINERECEPTORCCRL1ONBIOLOGICALBEHAVIORSOFHEPATOCELLULARCARCINOMA博士研究生施杰毅導(dǎo)師指導(dǎo)組成員樊嘉教授湯其群教授周儉教授高強(qiáng)博士課題基金資助國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目NO81030038國(guó)家重點(diǎn)科技項(xiàng)目2012ZXL0002011002致謝。109論文聲明封二

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多雙特異性抗體通過(guò)FcαR介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng).pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：同等學(xué)力人員碩士學(xué)位論文論文題目LGR5在宮頸癌組織表達(dá)的臨床意義及其對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究生姓名鄧云指導(dǎo)教師姓名居頌光專業(yè)名稱免疫學(xué)研究方向腫瘤免疫論文提交日期2014年4月