簡(jiǎn)介：腫瘤是嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康的重大疾病，免疫功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。隨著對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療的研究，尤其是細(xì)胞與分子水平的研究逐步深入，轉(zhuǎn)染抗瘤相關(guān)細(xì)胞因子基因，已成為探索腫瘤免疫的新熱點(diǎn)。腫瘤免疫主要是細(xì)胞免疫，CD8細(xì)胞毒T細(xì)胞CD8CTL和NK細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主體抗瘤細(xì)胞。IL15是1994年發(fā)現(xiàn)，與IL2有許多重疊生物活性的細(xì)胞因子；是能顯著提高CD8CTL細(xì)胞和NK細(xì)胞增殖和殺瘤活性，而備受關(guān)注的抗瘤細(xì)胞因子。雖然已有一些關(guān)于IL15基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞對(duì)其在動(dòng)物體內(nèi)成瘤影響的報(bào)道，但原型IL15基因轉(zhuǎn)染的研究未達(dá)到預(yù)期的抗瘤效果，曾懷疑是其長(zhǎng)信號(hào)肽影響分泌所致；轉(zhuǎn)染促其分泌信號(hào)肽的改型IL15基因研究也未達(dá)到預(yù)期結(jié)果。由于已知CD8CTL殺瘤識(shí)別的抗原，需要腫瘤細(xì)胞表面的HLAⅠ類(lèi)分子提呈；CD8CTL的殺瘤功能活化，需要腫瘤細(xì)胞表面HLAⅡ類(lèi)分子提呈抗原激活的CD4TH細(xì)胞輔助；NK細(xì)胞殺瘤，需要腫瘤細(xì)胞對(duì)其殺傷敏感；腫瘤細(xì)胞表達(dá)NK細(xì)胞活化性受體NKG2D的配體MICA，可活化NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷；IFNΓ能活化CD8CTL細(xì)胞和NK細(xì)胞，并能促進(jìn)HLAⅠ類(lèi)和Ⅱ類(lèi)分子表達(dá)。為此，本研究在已成功構(gòu)建三種不同IL15基因轉(zhuǎn)染NCIH446細(xì)胞TC模型基礎(chǔ)上，研究不同IL15基因轉(zhuǎn)染，對(duì)NCIH446細(xì)胞的HLAⅠ類(lèi)和Ⅱ類(lèi)分子及MICA基因表達(dá)、NK殺傷敏感性、誘導(dǎo)T細(xì)胞殺瘤和IFNΓ分泌的影響，從基因轉(zhuǎn)染對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫生物學(xué)特性改變的角度，揭示其腫瘤免疫的意義，為IL15基因轉(zhuǎn)染的抗瘤研究提供新的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

簡(jiǎn)介：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文外周T細(xì)胞淋巴瘤的臨床和生物學(xué)特征研究姓名于燕霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師石遠(yuǎn)凱林晨20070501中國(guó)協(xié)和醫(yī)科太學(xué)博士學(xué)位論文PARTISTUDYONCLINICALFEATURESANDTREATMENTOUTCOMESOFPERIPHERALTCEULYMPHOMASUNSPECIFIEDABSTRACTOBJECTIVETOSUMMAL誣CLINICAIFCATURESANDTREATMENTOUTCOMESOFPERIPHERALTCELLLYMPHOMANONSPECIFIEDMETHODSRECORDSOF78PATIENTSWITHPTCLUSTREATEDFROMJAN1994TODEC2004INCANCCRHOSPITALOFCHINESEMEDICALSCIENCEINSTITUTEWERERETROSPECTIVELYANALYZEDALLPATIENTSWERECLASSIFIEDACCORDINGTEALOFWHOCRITERIARESULTSMEDIANAGEOFTHEWHOLEGROUPWAS39YEARSRANGED775YEARS；OF78PETIENTS，20WEREFEMALE58WEREMALE；34437％WERETREATEDWITHCHEMORADIOTHERAPY，4355％WERETREATEDWITHCHEMOTHERAPYALONE；T355S／0PATIENTSTREATEDWITHAUTOLOGOUSBLOODSTEMCELLTRANSPLANTATIONAFTERACHIEVEINGCRORPRW酏AMEDIANFOLLOWUPOFMONTHS，THE5YEARSURVIVALRATESOFTHEWHOLEGROUPWAS41A％，THE5YEARPROGRESSIVEFREESURVIVALRATEWAS338％；THE5YEARSURVIVALRATESOFCR，PR、PD／SDGROUPWERE65I％、219％ANDO％THE5YEAROSFORPATIENTSTREATEDWITHFIRSTLINEAPBSCTWAS615％WHILE523％FORTHOSETREATEDWITHCONVENTIONALDOSETHERAPYALONEPO894INTERNATIONALPROGNOSTICINDEXANDPROGNOSTICINDEXFORPERIPHEMLTCELLLYMPHOMAWERESIGNIFICANTFACTORFORPREDICTINGOVERALLSURVIVALTHE5YEARSURVIVALRATEOFLOWRISKLOWINTERMEDIATERISK，INTERMEDIATEHIGHRISKANDHIGILRISKGROUPWERE6790、350／0、222％、91％。CONCLUSIONPTCLUSARERARELYMPHOMASPRESENTTREATMENTMODILITIESFORTCELLNHLPATIENTSESPECIALLYTHEHIGHRISKPATIENTS枷’TACHIEVESATISFACTORYOUTCOMESNEWTREATMENTMODALITYFORTHESEPATIENTSNEEDTOBE_EXPLOREDKEYWORDSNONHODGKIN’SLYMPHOMA；PROGNOSIS；OVEMUSURVIVAL2

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士研究生畢業(yè)論文DOCTORATEGRADUATLONTHESISHUST靶向SURVIVIN的SIRNA對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及增強(qiáng)絲裂霉素敏感性的實(shí)驗(yàn)研究STUDYOFTHEINFLUENCEOFSIRNATARGETINGSURVIVINGENEONTHEBIOLOGICALBEHAVIORSANDENHANCEMENTOFMITOMYCINEFFECTSTOHEPATOCELLULARCARCINOMACELLS研究生姓名導(dǎo)師姓名學(xué)科專(zhuān)業(yè)指導(dǎo)小組成員盧昕鄭啟昌教授外科學(xué)普通外科毒蛾教授教授教授單位單位單位單位華申科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院研究生部博士學(xué)位論文翮舀正常哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)化形成了～整套精細(xì)的調(diào)節(jié)機(jī)制，如原癌基因的激活和抑癌基因的失活都可導(dǎo)致細(xì)胞的過(guò)度增殖，而細(xì)胞凋亡能降低細(xì)胞的增殖能力，使失控的細(xì)胞增殖得到平衡和抑制。一旦細(xì)胞凋亡途徑受到障礙，就會(huì)打破這種平衡，引起細(xì)胞過(guò)度增殖，繼而癌變IJ“。就已經(jīng)惡變的細(xì)胞而言，抑制細(xì)胞凋亡一方面有助于維系腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖的特性，另一方面也很可能成為抗腫瘤藥物殺傷腫瘤細(xì)胞的障礙。由于大多數(shù)抗腫瘤藥物殺瘤效應(yīng)是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的，所以從某種意義上而言，細(xì)胞凋亡障礙可能是腫瘤細(xì)胞耐藥的重要機(jī)制之一【12】131。外部觸發(fā)因子能否誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，不僅取決于凋亡信號(hào)傳遞是否完整或通暢，而且還取決于維系細(xì)胞生存的信號(hào)傳遞系統(tǒng)是否存在缺陷或阻滯。最近與腫瘤生存密切相關(guān)的SURVIVIN基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中的作用正成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。SURVIVIN是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因家族成員，在胎兒組織中廣泛表達(dá)，在正常成人組織中不表達(dá)，而特異性表達(dá)于人類(lèi)多種常見(jiàn)腫瘤中，包括肺癌、乳腺瘸、結(jié)腸癌、前列腺癌、胰腺癌、晚期淋巴瘤、成神經(jīng)纖維瘤和胃癌等【”J。SURVIVIN蛋白與細(xì)胞有絲分裂裝置微管結(jié)合，參與細(xì)胞周期調(diào)控，在G2／M期表達(dá)水平達(dá)到高峰，可能具有選擇性的細(xì)胞分裂中抗凋亡作用，以使轉(zhuǎn)化細(xì)胞通過(guò)有絲分裂進(jìn)行惡變【L。SURVIVIN的高度表達(dá)會(huì)抑制多種因素引起的凋亡，如腫瘤壞死因子TNF、FAS、2甲基萘醌、星形孢菌素、ETOPOSIDEVPL6和生長(zhǎng)因子撤除等17US】。目前在國(guó)內(nèi)外SURVIVIN基因與肝癌的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的研究為數(shù)尚不多。已有的研究報(bào)告表明SURVIVIN通過(guò)與CDK4相互作用釋放P21而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖19J，在臨床研究中，SURVIVIN的表達(dá)與較差的預(yù)后指標(biāo)如組織分級(jí)、微血管侵潤(rùn)、局部復(fù)發(fā)及短期無(wú)瘤生存期相關(guān)剛J。另外，有研究表明SURVIVIN基因在肝癌耐藥過(guò)程中發(fā)揮作用，作者通過(guò)反義技術(shù)降低SURVIVIN的表達(dá)后增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物5一FU的敏感性【2IJ。SURVIVIN基因在肝癌細(xì)胞對(duì)其它化療藥物產(chǎn)生耐藥過(guò)程中的表達(dá)變化是否具有普遍性，如何克服反義技術(shù)相關(guān)缺陷以有效降低SURVIVIN的表達(dá)，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。

簡(jiǎn)介：研究背景骨缺損是指由于外傷、感染、腫瘤切除等因素造成骨質(zhì)喪失，從而在骨組織中形成間隙。較小范圍的骨缺損可以由機(jī)體自身的再生得到修復(fù)，而較大間隙的骨缺損則由于成骨細(xì)胞難以越過(guò)而不能正常愈合，若不采用適當(dāng)治療則最終僅由纖維組織充填，形成骨不連。有研究表明，當(dāng)長(zhǎng)骨骨干缺損長(zhǎng)度超過(guò)其直徑的15～25倍時(shí)，機(jī)體便難以自行愈合，因而造成永久性骨不連。骨缺損的病人在骨科患者中占有很高的比例，大約有10～15％的病人需要進(jìn)行骨移植治療。在美國(guó)，每年涉及骨移植的病例已超過(guò)100萬(wàn)，而在我國(guó)這樣一個(gè)人口眾多的發(fā)展中國(guó)家，需要進(jìn)行骨移植治療的病例數(shù)目巨大更是不言而喻的，并且隨著社會(huì)的發(fā)展，交通事故的增多，骨缺損病人數(shù)目更是在不斷地逐年攀升，現(xiàn)今已經(jīng)發(fā)展成為嚴(yán)重威脅人們生活質(zhì)量的主要病癥之一。目前，主要應(yīng)用于臨床骨缺損修復(fù)的方法有自體骨移植和異體骨移植等，但自體骨移植存在材料來(lái)源有限、供骨部位的損傷以及塑形困難等問(wèn)題異體骨移植也有潛在的疾病傳播隱患以及移植排斥反應(yīng)等嚴(yán)重后果，因此無(wú)論自體骨移植還是異體骨移植均無(wú)法完全滿(mǎn)足需求，臨床急需尋找一種安全有效的骨移植替代材料。近年來(lái)隨著組織工程化人工骨的誕生，骨移植治療中材料短缺的問(wèn)題將有望得到成功的解決。組織工程骨是由可吸收的支架材料、種子細(xì)胞和／或成骨促進(jìn)因子構(gòu)成的。近年來(lái)，將細(xì)胞與特定支架材料聯(lián)合培養(yǎng)，形成具有生命的活性組織工程化復(fù)合材料用于修復(fù)骨缺損已經(jīng)取得了初步成效，但毫無(wú)疑問(wèn)，如何構(gòu)建更理想的組織工程化人工骨仍舊是一個(gè)值得被重視的熱點(diǎn)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS）作為組織工程的優(yōu)秀種子細(xì)胞之一，具有很強(qiáng)的成骨分化潛力，在特定的環(huán)境中能夠被誘導(dǎo)分化成為成骨細(xì)胞，促進(jìn)骨修復(fù)過(guò)程，因此被廣泛應(yīng)用與骨組織工程領(lǐng)域；另外，很多國(guó)內(nèi)外的研究也發(fā)現(xiàn)，有許多成骨分化因子以及血管誘導(dǎo)因子局部使用均有促進(jìn)骨再生的作用。但單純的MSCS與材料的復(fù)合物誘導(dǎo)骨化過(guò)程很慢，而細(xì)胞因子局部給藥持續(xù)時(shí)間短、需反復(fù)給藥，并且價(jià)格非常昂貴?；诮陙?lái)提出的內(nèi)源性骨生長(zhǎng)因子治療骨折的新理論，基因治療的手段被逐漸應(yīng)用到骨組織工程領(lǐng)域中，并充分展現(xiàn)出了巨大的潛力，它使我們能夠?qū)⒕幋a各種細(xì)胞因子的基因?qū)氲組SCS中，復(fù)合適當(dāng)材料后植入骨缺損部，這樣就能夠在局部持續(xù)高效地產(chǎn)生細(xì)胞因子，以自分泌和旁分泌地方式誘導(dǎo)MSCS和組織中間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化，促進(jìn)骨缺損的修復(fù)。本實(shí)驗(yàn)中，我們以大鼠MSCS作為轉(zhuǎn)基因的靶細(xì)胞，分別將骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BONEMPHOGEICPROTEIN2，BMP2）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（BASICFIBROBLASTGROWTHFACTBFGF）和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF）的基因分別導(dǎo)入MSCS中，并且首次將BMP2、BFGF基因以及BMP2、VEGF基因共同導(dǎo)入MSCS中，分別在體內(nèi)和體外觀察對(duì)比了這幾種基因單獨(dú)修飾和共同修飾對(duì)RMSCS細(xì)胞活性的影響以及誘導(dǎo)異位成骨的情況，為構(gòu)建更優(yōu)化的骨組織工程種子細(xì)胞和組織工程化骨提供了重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1BMP2，VEGF165，BFGF基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建提取腦組織和骨髓組織RNA，反轉(zhuǎn)錄成EDNA，通過(guò)PCR方法自CDNA庫(kù)中獲取全長(zhǎng)BMP2、VEGF165及BFGF基因，酶切連接克隆入真核表達(dá)載體PCDNA30，測(cè)序并與GENEBANK中序列進(jìn)行比較分析。2不同基因遺傳修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的建立（1）采用PERCOLL分離液密度梯度離心和差速貼壁傳代篩選法相結(jié)合，分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。（2）以脂質(zhì)體介導(dǎo)分別將真核表達(dá)質(zhì)粒PEDNA30BMP2、PCDNA30VEGF和PCDNA30BFGF單獨(dú)轉(zhuǎn)染MSCS，PCDNA30BMP2和PCDNA30VEGF以及PEDNA30BMP2和PCDNA30BFGF共同轉(zhuǎn)染MSCS，G418壓力篩選穩(wěn)定表達(dá)株。（3）RTPCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中目的基因MRNA表達(dá)情況；WESTERNBLOT、細(xì)胞免疫化學(xué)檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞胞漿中目的蛋白表達(dá)情況；ELISA檢測(cè)各各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞培養(yǎng)上清中目的蛋白的分泌情況。3不同基因修飾的RMSCS細(xì)胞生物學(xué)特性分析將外源基因修飾的MSCS分為6組進(jìn)行AMSCS對(duì)照組；BBMP2基因修飾組；CVEGF165基因修飾組；DBFGF基因修飾組；EBMP2和VEGF基因聯(lián)合修飾組；FBMP2和BFGF基因聯(lián)合修飾組。（1）采用MTT方法測(cè)定各組細(xì)胞增殖能力；（2）酶促反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞堿性磷酸酶活性；（3）放射免疫法檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中骨鈣素含量。4不同基因轉(zhuǎn)染的RMSCS成骨活性的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)共分為6組進(jìn)行ARMSCSAWGC對(duì)照組；BBMP2基因修飾RMSCSAWGC組；CVEGF基因修飾RMSCSAWGC組；DBFGF基因修飾RMSCSAWGC組；EBMP2和VEGF基因聯(lián)合修飾RMSCS＋AWGC組FBMP2和BFGF基因聯(lián)合修飾RMSCSAWGC組。（1）在體外分別將不同種基因轉(zhuǎn)染的RMSCS接種于多孔支架材料AWGC上。（2）將不同種細(xì)胞材料復(fù)合物植入裸鼠后腿肌袋。（3）每組分別于植入后1、2、3月取材，石蠟包埋，組織病理學(xué)切片，HE、MASSON染色分析新骨形成情況；（4）免疫組織化學(xué)CD31染色，分析新骨形成區(qū)域內(nèi)新生血管密度。結(jié)果1RTPCR自腦組織CDNA庫(kù)中擴(kuò)增出了VEGF165及BFGF基因，自骨髓組織EDNA庫(kù)中擴(kuò)增出了BMP2全長(zhǎng)基因；2成功將BMP2全長(zhǎng)基因、VEGF165基因及BFGF基因分別克隆入真核表達(dá)載體PCDNA30中，構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA30BMP2、PCDNA30VEGF和PEDNA30BFGF。DNA測(cè)序證明，所克隆目的基因序列與GENEBANK收錄一致。3各種真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染了大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，經(jīng)抗生素壓力篩選獲得了具有G418抗性的細(xì)胞克隆。4RTPCR結(jié)果顯示抗性細(xì)胞克隆中均有大量目的基因MRNA轉(zhuǎn)錄，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中目的蛋白表達(dá)陽(yáng)性，WESTERNBLOT、免疫組化結(jié)果顯示胞漿中有目的蛋白的表達(dá)。5不同基因修飾后的MSCS增殖能力均得到不同程度的增強(qiáng)，其中BFGF和BMP2基因的修飾以及BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因的共同修飾對(duì)MSCS的增殖能力促進(jìn)最為明顯。6體外結(jié)果顯示BMP2基因的單獨(dú)修飾明顯上調(diào)了MSCS的堿性磷酸酶活性并促進(jìn)了骨鈣素的分泌；VEGF基因的單獨(dú)修飾對(duì)堿性磷酸酶活性有一定程度的提高，但與對(duì)照組相比骨鈣素分泌量減少BFGF基因的單獨(dú)修飾抑制了細(xì)胞堿性磷酸酶的活性卻能夠促進(jìn)骨鈣素的大量分泌；BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因的共同修飾使得MSCS堿性磷酸酶活性成倍增加，骨鈣素分泌明顯上調(diào)。7裸鼠肌袋異位誘導(dǎo)成骨實(shí)驗(yàn)顯示各基因修飾MSCS組與單純MSCS對(duì)照組相比，材料降解和替代的速度均明顯提高，有大面積新骨形成。植入一個(gè)月后就有大量軟骨細(xì)胞和成骨樣細(xì)胞產(chǎn)生，細(xì)胞外基質(zhì)堆積，新生血管形成并深入支架材料。BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因共同修飾的MSCS組在各階段均有比其他組更明顯的材料替換速度，擁有更高的相對(duì)骨面積和更豐富的新生毛細(xì)血管網(wǎng)。結(jié)論1人BMP2、VEGF165和BFGF基因可以通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)有效地導(dǎo)入大鼠MSCS中并得到表達(dá)。2BMP2、VEGF165、BFGF基因?qū)MSCS單獨(dú)修飾，BMP2基因與BFGF基因或VEGF基因?qū)MSCS聯(lián)合修飾后，能夠有效改變RMSCS的部分生物學(xué)特性細(xì)胞外形發(fā)生改變，增殖能力明顯提高；細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性發(fā)生不同程度的改變；骨鈣素分泌水平變化顯著。3以能夠啟動(dòng)或誘導(dǎo)MSCS成骨方向分化的基因（BMP2、BFGF）和能夠促進(jìn)新生血管形成的基因（BFGF、VEGF）對(duì)RMSCS進(jìn)行修飾后，能夠在裸鼠體內(nèi)有效地促進(jìn)異位骨的形成和血管化。4BMP2BFGF基因和BMP2VEGF基因的聯(lián)合修飾，對(duì)于體外培養(yǎng)的RMSCS增殖及成骨分化能力有著較單獨(dú)基因修飾更加明顯的促進(jìn)作用，并且能夠在裸鼠肌袋內(nèi)誘導(dǎo)形成擁有更大的相對(duì)骨面積和更高的血管密度的新生骨組織。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專(zhuān)利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名燃師簽鼉≥夠刑1二級(jí)學(xué)河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名癯嬲翮麟砂弓年3R15B中文摘要MIRNA449A在肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究摘要目的MICRORNAMIRNA、是一類(lèi)長(zhǎng)度為20～23NT的在多種真核生物中可以調(diào)控基因表達(dá)的高度保守非編碼小RNA【L，2】。MIRNA可以通過(guò)與一個(gè)或多個(gè)MRNA的部分序列互補(bǔ)而調(diào)控基因表達(dá)進(jìn)而影響生命活動(dòng)，它的功能失調(diào)常常會(huì)引起重要過(guò)程出現(xiàn)紊亂，包括器官變化、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、細(xì)胞存活等【34】。而在腫瘤的發(fā)生過(guò)程中，不同的MIRNA可能起著癌基因或者抑癌基因的作用。目前，肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一，其病理類(lèi)型主要為兩種，一是進(jìn)展性較快的小細(xì)胞癌，占總體比例的13～15％左右，二是非小細(xì)胞癌，包括腺癌，鱗狀細(xì)胞癌，大細(xì)胞癌，大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌等，占總體比例的85％左右【56】。肺癌預(yù)后較差的原因有多方面，轉(zhuǎn)移是影響肺癌患者療效和生存時(shí)間的關(guān)鍵問(wèn)題之一，明確的轉(zhuǎn)移機(jī)制目前仍然不清楚，因此缺乏有效的治療手段。目前研究發(fā)現(xiàn)，MIRNA449A在胃癌、膀胱癌、前列腺癌等癌癥中均有抑癌作用，而MIRNA一449A對(duì)于肺癌的生物學(xué)功能影響尚不清楚，在本研究中我們?cè)噲D通過(guò)對(duì)MIRNA449A在肺癌中的生物學(xué)作用進(jìn)行研究，探討肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的內(nèi)在機(jī)制，為提高肺癌的早期診斷、特異性治療及預(yù)后判斷水平提供新的思路，同時(shí)探索肺癌的特異性新靶標(biāo)。方法1基因芯片分析分別提取高、低不同轉(zhuǎn)移潛能人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株95D／95C的總RNA，應(yīng)用MICRORNA芯片技術(shù)檢測(cè)95C／95D中MIRNA一449A的差異性表達(dá)水平；2使用REALTIMEPCR技術(shù)對(duì)差異表達(dá)的MIRNA449A進(jìn)行驗(yàn)證首先提取人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞株95C／95D的總RNA，然后設(shè)計(jì)MIRNA449A的反轉(zhuǎn)錄引物及上游引物和下游引物，設(shè)置內(nèi)參U6為對(duì)照，反轉(zhuǎn)錄RNA檢測(cè)MIRNA449A在95C／95D細(xì)胞株中的表達(dá)水平，同時(shí)使用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)REALTIMEPCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。3構(gòu)建過(guò)表達(dá)MIRNA一449A的真核表達(dá)載體PCDNA31一MIR449A首先根據(jù)MIRBASE數(shù)據(jù)庫(kù)確定MIRNA449A的序列，設(shè)計(jì)MIRNA449A的擴(kuò)增引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增目的基因并進(jìn)行鑒定后構(gòu)建真核表達(dá)載體PCDNA31MIR449A，通過(guò)酶切及基因測(cè)序再次鑒定。4建立過(guò)表達(dá)

簡(jiǎn)介：V905800分婁號(hào)亙壘8土單位代碼10159學(xué)號(hào)2M316264⑨審回罄封夫拳博士學(xué)位論文題目剛A干擾凋亡抑制基因SURVIIN表達(dá)及對(duì)骨吶瘟細(xì)胞系U一20S相關(guān)生物學(xué)特性的影響KNOKDOⅦAOFSUZVIVINE‘P2I∞BYSMALLULERFETINGRN‘TINDUCEAPOPTOSISINHUMAN0SLEOSEOMACELLH叫1520S研究生至壁一導(dǎo)師墨墮學(xué)科專(zhuān)業(yè)￡鹽生做課翹起止時(shí)間墊堅(jiān)主旦堂生月論文完成耐同她主墨RNA干擾凋亡抑制基因SURVIVIN表達(dá)及對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系U一20S相關(guān)生物學(xué)特性的影響背景骨肉瘤是人類(lèi)最常見(jiàn)的原發(fā)惡性骨腫瘤，最常見(jiàn)于20～30歲的年輕人。單純截肢治療患者常常在一年內(nèi)死于肺轉(zhuǎn)移。隨著外科技術(shù)，影像學(xué)、化療放療的發(fā)展，患者長(zhǎng)期生存率從1020％上升到6070％。但是諸如腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等問(wèn)題仍然沒(méi)有得到完全解決。隨著腫瘤的研究已進(jìn)入到基因與分子水平，人們認(rèn)識(shí)到腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素參與、多種途徑、多階段的復(fù)雜過(guò)程，許多基因與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、演變相關(guān)，包括癌基因、抑癌基因、細(xì)胞凋亡基因、凋亡抑制基因、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因等，其中細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)基因，如癌基因、凋亡抑制基因、細(xì)胞凋亡基因等的異常表達(dá)是腫瘤發(fā)生的重要原因之一，它能引起細(xì)胞的某些生物學(xué)特性的變化，導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)限制繁殖和癌變。腫瘤細(xì)胞凋亡抑制因子活性的增強(qiáng)，能抵抗細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的激活，使腫瘤細(xì)胞逃避體內(nèi)免疫系統(tǒng)的識(shí)別和清除，最后導(dǎo)致腫瘤的形成忙’。因此，特異性抑制細(xì)胞內(nèi)凋亡抑制因子的表達(dá)己成為腫瘤治療新途徑。細(xì)胞凋亡抑制因子INHIBITOROFAPOPTOSIS，IAP家族是一類(lèi)分布廣泛的抗凋亡蛋白，存在于病毒、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等生物中，家族成員在結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是具有一個(gè)或多個(gè)高度保守的約70個(gè)氨基酸重復(fù)序列，稱(chēng)為桿狀病毒IAP重復(fù)序列BACULOVIRALIAPREPEAT，BIR，在功能上具有抑制細(xì)胞凋亡的作用。1997年耶魯大學(xué)的AMBROSINI等用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體IEF_FECTORCELLPROTEASERECEPTORI，EPRICDNA在人類(lèi)基因文庫(kù)中進(jìn)行篩選，克隆出的一個(gè)新基因，命名為SURVIVIN。SURVIVIN結(jié)構(gòu)較獨(dú)特，只有單一BIR，羧基末端不含環(huán)指結(jié)構(gòu)，其基因定位于染色體17Q25，有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，基因全長(zhǎng)147KB，編碼產(chǎn)生一個(gè)由142個(gè)氨基酸組成的分子量為165KDA的胞漿蛋白，為IAPS中分子量最小的成員“1。SURVIVIN表達(dá)于

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)午I初大學(xué)CENTRALSOUTHUNIVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目盎咽疸紫杉醒耐葒細(xì)胞丕的生物堂繾眭區(qū)墨藥耐藥性撿測(cè)專(zhuān)業(yè)方向互皇噬頭頸窆I科研究生姓名塞』理導(dǎo)師姓名及其專(zhuān)業(yè)技術(shù)職稱(chēng)逢國(guó)撻熬援中南大學(xué)二。一。年五月分類(lèi)號(hào)VDC碩士學(xué)位論文密級(jí)㈣M刪『『JF『刪刪舢Ⅲ＼1721486鼻咽癌紫杉醇耐藥細(xì)胞系的生物學(xué)特性及多藥耐藥性檢測(cè)THESTUDYOFBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDMULTIPLEDRUGRESISTANCEOFTAXOLRESISTANTNASOPHARYNGEALCARCINOMACELLS一●LINES研究生姓名學(xué)科專(zhuān)業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師劉理耳鼻喉頭頸外科湘雅三醫(yī)院譚國(guó)林答辯委員會(huì)中南大學(xué)二。一O年五月

簡(jiǎn)介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文S100A14基因轉(zhuǎn)染人食管鱗癌細(xì)胞系的生物學(xué)觀察姓名王云海申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)外科學(xué)（胸心外）指導(dǎo)教師于在誠(chéng)劉芝華20040601安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文S100A14基因轉(zhuǎn)染人食管鱗癌細(xì)胞系的生物學(xué)觀察中文摘要目的了解S100A14對(duì)人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系KYSE2生物學(xué)特征的影響。方法分別構(gòu)建PCDNA31一S100A14正義、反義真核表達(dá)載體，將其分別轉(zhuǎn)染人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系KYSE2，隨后觀察KYSE一2的生長(zhǎng)情況。應(yīng)用MTT比色法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；克隆形成實(shí)驗(yàn)了解細(xì)胞增殖情況；流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞周期。結(jié)果MTT比色法顯示轉(zhuǎn)染正義S100A14、反義S100A14和KYSE2細(xì)胞的吸光度在每一天都有轉(zhuǎn)染正義S100A14的細(xì)胞KYSE2和轉(zhuǎn)染反義S100A14的細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示轉(zhuǎn)染正義S100A14的細(xì)胞生長(zhǎng)最快，而KYSE2與轉(zhuǎn)染反義S100A14的細(xì)胞之間差別不大?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)顯示與轉(zhuǎn)染正義S100A14的細(xì)胞相比，KYSE一2細(xì)胞和轉(zhuǎn)染反義S100A14細(xì)胞形成的克隆數(shù)較少，并且體積較小轉(zhuǎn)染反義S100A14的細(xì)胞與KYSE2細(xì)胞之間無(wú)明顯差別。流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞周期的結(jié)果顯示與轉(zhuǎn)染反義S100A14的KYSE2及KYSE2相比，轉(zhuǎn)染J下義S100A14者細(xì)胞周期發(fā)生改變。結(jié)論S100A14可加快人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系KYSE。2的增殖速率，KYSE一2的惡性程度可能有所增加。關(guān)鍵詞S100A14基因；食管鱗癌細(xì)胞系KYSE2；細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；克隆形成率；細(xì)胞周期2

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞的分離、鑒定以及生物學(xué)特性研究姓名莊惠文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師文衛(wèi)平20100521中IL】大學(xué)博J學(xué)位論文鼻咽癌腫瘤于細(xì)胞的分離、鑒定以及生物學(xué)特性研究中文摘要癌腫瘤干細(xì)胞足以一種以LINESACD44CD24AOW為特異性表面標(biāo)志的細(xì)胞【101。SINGH等也以CDL33為特征性膜蛋白標(biāo)志，在腦腫瘤中分離出了腫瘤干細(xì)胞【L。在于細(xì)胞研究熱潮的帶動(dòng)下，科研人員用各種不同的方法分別得到并鑒定了前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、肝癌、肺癌等部位的實(shí)體腫瘤干細(xì)胞【B1引。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果使學(xué)者們相信實(shí)體瘤組織中確實(shí)存在少數(shù)具有自我更新和分化能力，增殖速度明顯高于其他腫瘤細(xì)胞的干細(xì)胞。對(duì)這群特殊細(xì)胞的深入研究有可能為人類(lèi)更全面地理解腫瘤的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律并探索靶向治療腫瘤疾病的方向開(kāi)辟一條新的道路。腫瘤干細(xì)胞理論的出現(xiàn)，從新的視角為鼻咽癌發(fā)生和復(fù)發(fā)機(jī)制提供了合理的解釋。近年來(lái)，鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞的研究也逐步展開(kāi)。如ZHANG等發(fā)現(xiàn)，小鼠鼻咽粘膜基底部存在一群具有正常干細(xì)胞特性的標(biāo)記滯留細(xì)胞LRC。隨后以同樣的方法研究鼻咽癌細(xì)胞株。證實(shí)在裸鼠體內(nèi)，人體鼻咽癌細(xì)胞種植形成的瘤體中，也可以找到約占總數(shù)03％的標(biāo)記滯留細(xì)胞P。WANG等利用HOECHST33342在從5種鼻咽癌細(xì)胞株中檢測(cè)到側(cè)群細(xì)胞SP細(xì)胞，其中來(lái)自細(xì)胞株CNE2的SP細(xì)胞具有極強(qiáng)的致瘤能力，而且對(duì)放化療表現(xiàn)出一定的耐受能力。進(jìn)一步的研究認(rèn)為，CKL9可能是鼻咽癌干細(xì)胞的潛在標(biāo)志物13列。雖然實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示了鼻咽癌中存在腫瘤干細(xì)胞的可能，但迄今為止還沒(méi)有系統(tǒng)的試驗(yàn)去探索鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞理想的表面標(biāo)記物。因此，如何選擇合適的候選特異性表面標(biāo)記物，探索有效的腫瘤干細(xì)胞分離和鑒定方法是目前鼻咽癌研究的迫切任務(wù)之一。干細(xì)胞研究的發(fā)展很大程度上依賴(lài)特異性細(xì)胞表面標(biāo)志物的研究進(jìn)展。一旦確定這些標(biāo)志，就可以通過(guò)細(xì)胞分選和功能測(cè)定的方式來(lái)純化并鑒定腫瘤干細(xì)胞。近年來(lái)，已經(jīng)在多種實(shí)體腫瘤中鑒定出各種特異的干細(xì)胞表面標(biāo)記物。其中CD34、CD44和CDL33是得到廣泛認(rèn)可的代表標(biāo)記之一。CD34抗原屬I(mǎi)型跨膜蛋白，無(wú)種屬特異性。在早期造血系統(tǒng)的調(diào)控以及呼吸系統(tǒng)的修復(fù)方面起著重要的作用【52】。它不但在定向祖細(xì)胞、造血干細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)，而且是首先被證實(shí)的血液系統(tǒng)腫瘤干細(xì)胞【81；CD44抗原屬于黏附分子家族透明質(zhì)酸受體，可表達(dá)于淋巴細(xì)胞、問(wèn)質(zhì)細(xì)胞或特定的腫瘤細(xì)胞表面。是腫瘤細(xì)胞侵襲、黏附和轉(zhuǎn)移過(guò)程中重要的參照物。近年文獻(xiàn)報(bào)道CD44也是乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、直腸癌、肝癌等腫瘤干細(xì)胞特異性表面標(biāo)記物之一【105457】。參與了這些腫

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文RECK基因在胃癌中的表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響的研究姓名張勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師鄭啟昌20050401華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博L畢業(yè)論文目的克隆人RECKREVERSIONINDUCINGCYSTEINERIOHPROTEINWITHKAZALMOTIFS基因，并構(gòu)建RECK基因的真核表達(dá)載體PEDNA3RECK。方法從人的胎盤(pán)組織中提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR擴(kuò)增出人RECK基因；將RECK基因克隆入載體PBLUESCRIPTIISK中，陽(yáng)性克隆經(jīng)酶切、電泳鑒定并測(cè)定RECK基因序列確認(rèn)后將PBLUESCRIPTIISK一RECK酶切所得RECK基因片段插入真核表達(dá)載體PCDNA3中，構(gòu)建RECK基因的真核表達(dá)載體PCDNA3一RECK并經(jīng)酶切鑒定。結(jié)果PCR擴(kuò)增得到了特異性的44KB基因片段?；蚱蔚拇笮∨c預(yù)期一致。所獲得的RECK基因測(cè)序及BLAST分析證明克隆的人RECK基因序列正確，PCDNA3RECK經(jīng)酶切后得到54KB和44KB兩個(gè)片段。結(jié)論成功的克隆了人RECK基因并正確構(gòu)建了其真核表達(dá)載體PCDNA3一RECK。關(guān)鍵詞R醒K原核表達(dá)載體；克隆與表達(dá)；PBLUESCRIPTSKPCDNA3第三部分RECK基因?qū)θ宋赴┘?xì)胞株MKN一45生物學(xué)行為的影響的研究目的探討轉(zhuǎn)染外源性的RECK基因?qū)EN一45胃癌細(xì)胞體外及體內(nèi)生物學(xué)活性的影響。方法采用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000介導(dǎo)將真核表達(dá)載體PCDNA3一RECK導(dǎo)入體外培養(yǎng)的MKN45細(xì)胞，RTPCR及WESTERNBLOT檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MEN一45細(xì)胞中RECKMRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。明膠酶譜試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中刪P一9的活性。細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制各組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線以觀察RECK基因?qū)?xì)胞增殖能力的影響；利用流式細(xì)胞儀方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞凋亡率；BOYDEN小室實(shí)驗(yàn)計(jì)算各組穿膜的細(xì)胞數(shù)以比較轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)?xì)胞侵襲能力的變化；比較裸鼠成瘤大小及腫瘤轉(zhuǎn)移的比例；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)裸鼠腫瘤組織中血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性第Ⅷ因子相關(guān)抗原FⅧRAG和各組細(xì)胞ICAML的表達(dá)，依據(jù)FⅧRAG的表達(dá)評(píng)價(jià)腫瘤組織內(nèi)微血管密度MVD。結(jié)果轉(zhuǎn)染PCDNA3一RECK真核表達(dá)載體后MKN一45細(xì)胞能穩(wěn)定高表達(dá)RECKMRNA

簡(jiǎn)介：【研究背景】大面積深度燒傷后，由于供皮區(qū)缺乏，導(dǎo)致創(chuàng)面修復(fù)困難1，給患者留下了嚴(yán)重的傷殘。為此，人們?cè)诮鉀Q大面積燒傷后皮源短缺的問(wèn)題上已經(jīng)探索了很長(zhǎng)時(shí)間，然而傳統(tǒng)的方法，比如自體網(wǎng)狀皮、大張異種皮開(kāi)窗嵌入自體微型皮片、微粒皮以及自體表皮細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增后移植等雖然一定程度上解決了一些問(wèn)題，但是這些方法面臨著一個(gè)共同的不足不同程度的瘢痕形成致外觀不佳、畸形嚴(yán)重致功能障礙等25。對(duì)此，近年來(lái)人們開(kāi)始構(gòu)建組織工程學(xué)皮膚以期望解決這個(gè)問(wèn)題，從最初由BURK和YANNAS設(shè)計(jì)的人工真皮到現(xiàn)在美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于臨床的含有人體活細(xì)胞皮膚替代品APLIGRAF的發(fā)展，證明了構(gòu)建組織工程皮膚的可行性，雖然這些產(chǎn)品還面臨一些缺點(diǎn)缺少汗腺及毛囊等皮膚附屬器官（附件）而難以獲得正常皮膚所應(yīng)具有的外觀及生理功能6。大面積深度燒傷病人修復(fù)創(chuàng)面無(wú)毛發(fā)，尤其是無(wú)汗腺，則不僅影響美觀，更嚴(yán)重地影響創(chuàng)面愈合后的生活質(zhì)量；因此，重建皮膚附件已成為皮膚組織修復(fù)領(lǐng)域的重要課題。本課題以表皮干細(xì)胞（ESC）為種子細(xì)胞，鼠尾膠原作為支架材料，借助對(duì)皮膚附件汗腺及毛囊形成有重要誘導(dǎo)效應(yīng)的表皮生長(zhǎng)因子（由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的HEGF基因轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞分泌）及真皮成纖維細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞，作為ESC增殖分化的因子，構(gòu)建組織工程皮膚。以探索人體ESC分化為皮膚附件汗腺、毛囊的可能性，并分析探討其分化機(jī)制?！狙芯磕康摹?、觀察本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒PCDNA31HEGF轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、增殖、分泌EGF免疫表型等生物學(xué)特性。2、探索高效分離和培養(yǎng)人ESC方法，觀察其生物學(xué)特性，并行形態(tài)學(xué)、免疫表型等鑒定。3、探索不同方法、條件對(duì)構(gòu)建以ESC為種子細(xì)胞的組織工程皮膚生物學(xué)影響。4、利用表皮（干）細(xì)胞復(fù)合細(xì)胞化真皮的體外培養(yǎng)模型，對(duì)皮膚附件的體外表型轉(zhuǎn)化進(jìn)行探索性研究。【研究?jī)?nèi)容】1、對(duì)本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建的HEGF基因轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)、增殖、分子表型等生物學(xué)特性。2、分離、培養(yǎng)表皮干細(xì)胞，觀察其形態(tài)學(xué)特征、測(cè)定其增殖曲線及分子表型鑒定。3、分離、培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞，觀察形態(tài)學(xué)特征，成骨、成脂誘導(dǎo)分化，流式細(xì)胞儀分子表型鑒定。4、建立穩(wěn)定的三維立體組織工程皮膚，觀察EGF對(duì)其生物學(xué)影響。5、觀察外源性EGF誘導(dǎo)ESC復(fù)合組織工程真皮向汗腺轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)?！狙芯拷Y(jié)果】1、HEGF轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞具有高分泌EGF，HACAT細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染EGF基因后，經(jīng)分子表型鑒定，K19、整合素Β1表達(dá)量升高。2、利用改良方法可獲得大量活性較高的ESC。分子表型鑒定其高表達(dá)K19、整合素Β1。3、分離、培養(yǎng)ADSCS。流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD29、CD90、CD105陽(yáng)性表達(dá)；CD31、CD43、CD45陰性表達(dá)。成骨、成脂誘導(dǎo)分化后，ADSCS分別呈現(xiàn)骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞的表性特征。4、以ESC作為種子細(xì)胞，鼠尾膠原為支架，EGF作為生長(zhǎng)因子構(gòu)建三維組織工程皮膚，組織切片顯示其分為三層，具有皮膚組織的基本特點(diǎn)。5、構(gòu)建組織工程皮膚經(jīng)RTPCR檢測(cè)，其汗腺細(xì)胞表面抗原CK19、CEA的MRNA水平上升?！狙芯拷Y(jié)論】1、HEGF轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞具有高效穩(wěn)定分泌EGF，分子表型鑒定HEGF轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞具有表皮細(xì)胞的一般生物學(xué)特性。2、利用改良、分離培養(yǎng)方法可獲得大量活性較高的ESC，具有ESC的一般生物學(xué)特性。3、酶消化法可有效分離純化人ADSCS細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定、增殖能力活躍，具有ADSCS的一般生物學(xué)特性。4、以ESC作為種子細(xì)胞，鼠尾膠原為支架，EGF作為生長(zhǎng)因子可穩(wěn)定構(gòu)建三維組織工程皮膚，其結(jié)構(gòu)接近生理皮膚構(gòu)造。5、EGF可能誘導(dǎo)ESC復(fù)合組織工程真皮向皮膚附件（汗腺）轉(zhuǎn)化，并起著決定性的作用。

簡(jiǎn)介：南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文VEGF真核表達(dá)載體在HACAT細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)活性的研究姓名周乃慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師范衛(wèi)新20050420南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文VEGF真核表達(dá)裁體在HACAT細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)活性的研究研究背景研究生周乃慧導(dǎo)師范衛(wèi)新教授摘要毛囊是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的皮膚附屬器官，始終處于生長(zhǎng)期、退行期和休止期的周期性循環(huán)中，許多激素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子及其受體等相互作用，形成網(wǎng)絡(luò)，共同調(diào)控著毛囊的周期性循環(huán)和毛發(fā)生長(zhǎng)‘11。雄激素性脫發(fā)和斑禿是皮膚科臨床中的常見(jiàn)病，不僅影響美觀，而且給患者的心理帶來(lái)很大的壓力。因此，進(jìn)一步深入地探討其發(fā)病機(jī)理和防治措施便成為毛發(fā)研究中急待解決的難題。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR，VEGF又稱(chēng)血管滲透因子VASCULARPERMEABILITYFACTOR，VPF或血管調(diào)理素VASCULOTROPIN，是新近發(fā)現(xiàn)的一種作用于毛囊的生長(zhǎng)因子。VEGF至少存在五種亞型，分別為VEGFL2L、VEGFL45、VEGFL65、VEGFL89和VEGF206。其中VEGFJ2L和VEGFL65由于缺少第6個(gè)外顯子而以游離形式存在，因此容易達(dá)到靶細(xì)胞發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)I。研究發(fā)現(xiàn)，人生長(zhǎng)期毛囊的毛乳頭細(xì)胞、真皮鞘細(xì)胞、外毛根鞘細(xì)胞和皮膚的角質(zhì)形成細(xì)胞等均可以合成與分泌VEGF，而退行期和休止期

簡(jiǎn)介：X90S241西咪替丁對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響EFFECTSOFCIMETIDINEONBIOLOGICALBEHAVIORSOFHUMANGASTRICCANCERCELLSGC7901碩士研究生姜成鋼指導(dǎo)教師僚意綿中國(guó)醫(yī)科大學(xué)沈陽(yáng)110001中國(guó)二零零六年五月C∞D(zhuǎn)岫FORM雒TORDEGREEJIANGCHENGGANGSUPERVISORXUHUIMLANC|脅住MEDK坦JUNLVEM夥GRADUATESCHOOLNORTH2NDROAD92，HEPLNGWARD，SHENYANG110001，CHINEMAY2006，一～～、L一中塞娑黃攛摹，西咪替丁對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響刖吾西咪替丁是一種H受體阻斷劑，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)西咪替丁對(duì)消化系統(tǒng)腫瘤的治療有良好的輔助作用。但其作用機(jī)制尚不明確6本研究以人胃癌細(xì)胞株SGC一7901作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察西咪替丁對(duì)SGC一7901細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、粘附、侵襲及裸鼠體內(nèi)成瘤性的影響，以期為西瞇替丁用于胃癌的臨床治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法用MIT法檢測(cè)不同濃度西咪替丁對(duì)胃癌SGC一7901細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡；用吖啶橙AO染色后熒光顯微鏡觀察藥物作用后細(xì)胞的形態(tài)變化；透射電鏡觀察用藥后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；以MATRIGEL為對(duì)象，檢測(cè)西咪替丁對(duì)胃癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)粘附作用的影響；利用MILLICELL小室檢測(cè)西咪替丁對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲人工基底膜能力的影響。并分別向裸鼠腹腔內(nèi)注射胃癌細(xì)胞和西咪替丁，觀察裸鼠體內(nèi)成瘤性。結(jié)果在055MMOVL濃度內(nèi)，西咪替丁對(duì)SGC一7901的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用，并呈時(shí)間和劑量依懶性；O5一LOMMOL／L西咪替丁作用后，可觀察到典型細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞儀檢測(cè)可見(jiàn)凋亡峰，GO／G1期細(xì)胞明顯增多；00625025MMOL／L西咪替丁可抑制胃癌細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的粘附及對(duì)重組基底膜的侵襲。西咪替丁在50MG／KG／DAY，200RAG／KG／DAY，劑量下可使裸鼠體內(nèi)成瘤性受到抑制。1

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專(zhuān)利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。僦虢懈刪蓋軍謠㈣河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名、絮唧斗?章鷺琶導(dǎo)師簽章∞歹謹(jǐn)J20孵’多月硼中文摘要共刺激分子B7．H3在食管癌中的表達(dá)及對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響摘要惡性腫瘤嚴(yán)重威脅全球人類(lèi)健康。由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有多元性及復(fù)雜性，認(rèn)識(shí)腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制和尋找治療腫瘤方法成為遏制腫瘤面臨的巨大挑戰(zhàn)。腫瘤免疫療法是繼手術(shù)、化療、放療后第四大有效的抗腫瘤療法。近年來(lái)，作為B7免疫球蛋白超家族的新成員，共刺激分子B7H3在多種腫瘤組織異常高表達(dá)，并與腫瘤的生物學(xué)特性密切相關(guān)，被認(rèn)為可能是一種新的腫瘤標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)。目的本課題旨在通過(guò)檢測(cè)人食管鱗癌組織、相應(yīng)癌旁正常組織及食管鱗狀上皮不典型增生組織中B7．H3分子的表達(dá)，分析其與患者I臨床病理因素以及術(shù)后生存時(shí)間之間的關(guān)系。檢測(cè)食管癌細(xì)胞株TE．1、TE．13、ETA．109細(xì)胞中B7．113的表達(dá)，并通過(guò)靶向干擾B7．H3基因表達(dá)來(lái)研究B7．H3對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、侵襲等生物學(xué)行為的影響。方法L用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)食管鱗癌組織、癌旁正常組織及食管鱗狀上皮不典型增生組織中B7H3蛋白的表達(dá)以及CD8T淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)程度。2用RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION方法檢測(cè)食管癌細(xì)胞株TE．1、TE．13、ECA109中B7．H3的表達(dá)情況。3用RTPCR、WESTERNBLOT等方法檢測(cè)B7．H3SIRNA基因沉默后ECA．109細(xì)胞中B7．H3的M_RNA和蛋白表達(dá)情況。4通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)分析沉默B7．H3后食管癌細(xì)胞的增殖活性。5通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)分析沉默B7一H3后食管癌細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力。6通過(guò)TRANSWELL實(shí)驗(yàn)分析沉默B7H3后食管癌細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果L免疫組化結(jié)果顯示，B7．H3陽(yáng)性著色主要定位在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。在82例ESCC患者中，B7．H3陽(yáng)性率為98．8％。癌旁正常組

簡(jiǎn)介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS存在于成人體內(nèi)許多組織內(nèi)，可以通過(guò)其貼壁能力分離出來(lái)。間充質(zhì)干細(xì)胞有很強(qiáng)的克隆形成和擴(kuò)增能力，并且具有向成骨，脂肪，軟骨，神經(jīng)和內(nèi)皮等多向分化潛能。MSCS已經(jīng)應(yīng)用于很多疾病的臨床治療，包括急性心梗，自身免疫，輔助骨髓移植，神經(jīng)系統(tǒng)損傷等。本文的第一部分對(duì)骨髓和脂肪來(lái)源的MSCS骨髓MSCS簡(jiǎn)稱(chēng)BMSCS，脂肪MSCS簡(jiǎn)稱(chēng)ADAS在生物學(xué)特性上的比較。我們的結(jié)果顯示，BMSCS和ADAS細(xì)胞在細(xì)胞表型上類(lèi)似，只有CD106的表達(dá)有差異，而且兩種來(lái)源的細(xì)胞都能向成骨，成脂肪，成軟骨分化，證明了其干細(xì)胞的特性。在增殖速率上，ADAS細(xì)胞比BMSCS要快群體倍增時(shí)間28HVS39H。干細(xì)胞的應(yīng)用中細(xì)胞來(lái)源和豐度的問(wèn)題是一個(gè)決定其應(yīng)用前景的因素，我們的結(jié)果顯示，在相同體積的脂肪組織能夠得到的干細(xì)胞前體細(xì)胞CFUF的數(shù)量是骨髓的10倍以上。這個(gè)結(jié)果提示，在BMSCS和ADAS細(xì)胞具有相同功能的前提下，脂肪組織是一個(gè)更有應(yīng)用前景的干細(xì)胞來(lái)源。第二部分中，我們研究了ADAS細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的能力。ADAS細(xì)胞在體外經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)之后，表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的一系列標(biāo)志和功能，而利用下肢缺血?jiǎng)游锬Ｐ鸵沧C明，ADAS細(xì)胞在缺血下肢分化成內(nèi)皮細(xì)胞，并且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的下肢缺血狀況得到改善。利用信號(hào)通路特異性抑制劑抑制實(shí)驗(yàn)，提示PI3K在ADAS細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化中本論文的第三部分我們對(duì)MSCS在急性肝損傷中的作用進(jìn)行了檢驗(yàn)。MSCS的輸注能夠減少實(shí)驗(yàn)小鼠的肝臟損傷，而且這種效果是細(xì)胞劑量和治療時(shí)間依賴(lài)的。我們?cè)?4H時(shí)檢測(cè)到MSCS在肝臟組織的定位，提示組織損傷對(duì)MSCS有趨化作用。我們證明，MSCS的給予，降低了肝內(nèi)NKT細(xì)胞的活化，但這種免疫抑制作用不僅僅局限于肝臟組織，是全身性的。這些結(jié)果提示，MSCS的免疫調(diào)節(jié)能力在各種疾病的MSCS細(xì)胞治療中可能發(fā)揮重要作用。