簡(jiǎn)介：ATHESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTER。EFFECTOF5AZA2DEOXYCYTIDINEONEC9706CELLWITHANALYSISOFTHEROLEOFTFPI一2GENEBYYABINGDUSUPERVISORPROF．QINGXIAFANONCOLOGYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMAY2011原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者矛彳朗L日期勿，F(xiàn)年G月≯‘日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭卅I大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多再生障礙性貧血患兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其對(duì)造血的影響的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：多囊卵巢綜合征PCOS是生育年齡婦女常見(jiàn)的生殖內(nèi)分泌疾病，中醫(yī)辨證其屬于“痰濕性”不孕癥范圍，其中醫(yī)病因病機(jī)可以簡(jiǎn)單概括為“痰壅胞宮”。現(xiàn)代研究顯示痰濁的主要生物學(xué)基礎(chǔ)是糖脂代謝異常，即胰島素抵抗IR，又稱“選擇性胰島素抵抗”。早期工作顯示PCOS患者卵巢組織及細(xì)胞本身存在IR，表現(xiàn)為胰島素調(diào)節(jié)糖代謝信號(hào)途徑受損，調(diào)節(jié)促分裂途徑放大，卵巢反應(yīng)向性升高。可見(jiàn)PCOS中醫(yī)發(fā)病機(jī)制一“痰壅胞宮”的現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)等同于卵巢局部IR。臨床資料顯示PCOS患者在進(jìn)行輔助生育技術(shù)治療不孕癥時(shí)易于發(fā)生卵巢過(guò)度刺激綜合癥OHSS，是OHSS發(fā)生的高危因素，但在輔助生育技術(shù)治療前預(yù)防性服用二甲雙胍可以顯著降低OHSS的發(fā)生率，提示卵巢局部IR可能與PCOS患者促排卵治療中易于發(fā)生OHSS有關(guān)，其機(jī)制可能是卵巢局部的選擇性IR導(dǎo)致胰島素促分裂途徑放大，卵巢反應(yīng)性升高，顆粒細(xì)胞的增殖效應(yīng)亢進(jìn)，使血管活性因子VEGF等分泌增多引起血管通透性升高。基于此認(rèn)識(shí)，試驗(yàn)選擇豬卵巢顆粒細(xì)胞作為體外研究對(duì)象，用PI3K胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)糖代謝的關(guān)鍵分子特異性阻斷劑渥曼青霉素作用于卵巢顆粒細(xì)胞人工誘導(dǎo)IR的細(xì)胞模型，通過(guò)蛋白印跡、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)及激素測(cè)定等現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，從現(xiàn)代分子生物學(xué)角度研究PCOS“痰壅胞宮”的中醫(yī)病因病機(jī)及其在輔助生育技術(shù)中發(fā)生OHSS的現(xiàn)代分子生物學(xué)基礎(chǔ)。試驗(yàn)結(jié)果顯示在IR的狀態(tài)下，顆粒細(xì)胞的孕激素合成能力顯著降低，雌激素合成能力沒(méi)有明顯變化，芳香化酶P450AROM、促分裂原活化蛋白激酶MAPK、增殖細(xì)胞核抗原PCNA、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGFMRNA表達(dá)亢進(jìn)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在IR的狀態(tài)下，胰島素受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路糖代謝通路受損的同時(shí)，其促分裂通路放大，卵巢反應(yīng)性升高，血管活性因子分泌增加，導(dǎo)致血管通透性升高，這可能是PCOS促排卵治療易于發(fā)生OHSS的原因；同時(shí)在IR的狀態(tài)下，芳香化酶的表達(dá)亢進(jìn)，繼發(fā)于卵泡膜細(xì)胞雄激素合成亢進(jìn)則顆粒細(xì)胞雌激素合成能力亦亢進(jìn)，而雌激素與FSH之間有嚴(yán)格的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，雌激素合成亢進(jìn)抑制垂體產(chǎn)生卵泡生長(zhǎng)必需的FSH，從而導(dǎo)致卵泡發(fā)育過(guò)早停滯引起不排卵可能是PCOS患者不孕的原因；但I(xiàn)R的狀態(tài)下，孕激素合成能力下降，這表明孕激素的合成與’PI3K的激活有關(guān)，IR狀態(tài)下，孕激素的合成能力降低與PCOS患者不孕及妊娠后流產(chǎn)可能有關(guān)。

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)研究全氟己烷對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞所分泌的各種細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)表達(dá)、凋亡和細(xì)胞周期以及吞噬功能的影響，探討急性肺損傷時(shí)應(yīng)用PFC治療的分子作用機(jī)理及其對(duì)肺局部防御機(jī)能的影響。方法健康雄性WISTAR大鼠放血處死后全肺灌洗獲取AM，貼壁純化。采用4種方法干預(yù)將AM分為4組1正常對(duì)照C組不做任何干預(yù)；2脂多糖LPS組按10UGML的劑量加入LPS刺激；3全氟己烷PFH組按30％體積比PFH培養(yǎng)液加入的PFH；4脂多糖全氟己烷L(zhǎng)PSPFH組加入PFH和LPS。在預(yù)培養(yǎng)20H后重懸AM，分4組干預(yù)處理4H后，收集AM，與1％雞紅細(xì)胞懸液培育后制片，瑞氏染色觀察并計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)，采用單因素方差分析比較組間差異；提取各組細(xì)胞的蛋白質(zhì)應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)比較組間的蛋白質(zhì)表達(dá)差異；在純化后即用無(wú)血清培養(yǎng)液培養(yǎng)并分為4組干預(yù)24H。收集AM，應(yīng)用透視電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并聯(lián)合流式細(xì)胞技術(shù)采用單因素方差分析比較各組間凋亡率和細(xì)胞周期的差異。結(jié)果1LPS組與C組、PFH組與C組及LPS組和LPSPFH組相比較共發(fā)現(xiàn)有15個(gè)相對(duì)分子量的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，分別為3343DA、4796DA、4968DA、5175DA、5546DA、7600DA、7918DA、9776DA、10934DA、11529DA、14853DA接近14849DA、15257DA、15823DA、13763DA、14001DA。其對(duì)應(yīng)的SWISSPROT蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中共發(fā)現(xiàn)了47種相應(yīng)的蛋白質(zhì)。2LPS組和LPSPFH組的凋亡率分別明顯高于C組和LPS組1006±172％2410±319％VS106±013％1006±172％，P＜001，而PFH組與C組的凋亡率比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義281±041％VS106±013％P＞005；細(xì)胞周期的各指標(biāo)在4組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞005。3AM的吞噬率和吞噬指數(shù)呈線性相關(guān)性關(guān)系，從高到低依次為L(zhǎng)PS組2588±203321±009，LPSPFH組1250±207229±008，C組825±167173±018，PFH組350±120116±019，各組間的差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001。4AM可吞噬雞紅細(xì)胞和PFH，且吞噬后體積增大；C組和PFH組未見(jiàn)明顯的凋亡變化，LPS組和PFHLPS組可見(jiàn)到典型的凋亡細(xì)胞存在；結(jié)論1LPS可活化AM調(diào)節(jié)其蛋白質(zhì)表達(dá)。PFH可能通過(guò)抑制其分泌和基因表達(dá)的雙重作用而調(diào)節(jié)活化AM內(nèi)的蛋白含量。2PFH對(duì)體外培養(yǎng)的AM凋亡并無(wú)明顯影響，而對(duì)于LPS刺激培養(yǎng)的AM凋亡則有誘導(dǎo)作用；AM的細(xì)胞周期不受LPS和PFH的影響。3LPS可增強(qiáng)體外培養(yǎng)AM的吞噬活性；PFH對(duì)AM的吞噬活性有一定的抑制作用；活化的AM在PFH抑制作用下，其吞噬活性較未活化狀態(tài)下AM的吞噬活性為高。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文扉頁(yè)物學(xué)行為的影響研究THEEXPRESSIONOFSIRT4ING鑫VINTESTINALCARCINOMAANDITSEFFECTONHUMANCOLOF，．ALCANCERCELLSTRAINS’BIOLOGICALBEH奄NR、STUDY學(xué)科專業(yè)作者姓名研究生學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師答辯日期普外科黃國(guó)裕0127249285彭志海2015年4月28日上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文學(xué)位英文題名頁(yè)P(yáng)HD，STHESISTHEEXPRESSIONOFSIRT4INGASTROINTESTINALCARCINOMAANDITSEFFECTONHUMANCOLORECTALCANCERCELLSTRAINS’BIOLOGICALBEHAVIORSTUDYAUTHORSUPE陽(yáng)以SOR刪OR“RESE僦HFⅢLDSDEGREE咖TFTI小JDS唧SISDE剛SEGUOYUHUANGZHIHAIPENGSURGERYGENERALSURGERYNEMOLECULARBIOLOGICALMECHANISMOFTHEOCCURRENCEANDDEVELOPMENTOFDIGESTIVESYSTEMNEOPLASMSDOCTORSHANGH面FIRSTPEOPLE’SHOSPITALNATIONALHI曲TECHNOLOGYRESEARCHANDDEVELOPMENTPMGRAMSS2014AA020803．NATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINA81220108021，PROJECTOFSHANGHAI●，一●／1●BCLENCEANDIECLQ_NOLOFFY50MMLSSLON14411950502，JO砒RESEARCHPROJECTSOFSHANGHAIMUNICIPALHOSPITALSHDCL2012105，PROJECTOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYYG2012ZD01．20150428

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文DLC1基因結(jié)構(gòu)域?qū)Y(jié)腸癌HT29細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的研究姓名吳鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)；病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師黃培林20110512東南大學(xué)碩士學(xué)位論文PCDNA3．1．△SAM．DLC．1、PCDNA3．1．△STAI汀．DLCL亞克隆重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染HT29細(xì)胞。2．MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、NANSWEN侵襲實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，PCDNA3．1．△I地OGAP．HT29亞克隆轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖能力、侵襲能力及凋亡細(xì)胞比例與對(duì)照組及空載組相比均無(wú)明顯差別，而高于DLC．1基因全長(zhǎng)轉(zhuǎn)染組。并且，PCDNA3．1．△RHOGAP。HT29亞克隆轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的RHOA蛋白活性和ROCK活性較DLC．1基因全長(zhǎng)轉(zhuǎn)染組明顯增強(qiáng)，與對(duì)照組及空載組相比無(wú)明顯差別。3．PCDNA3．1．△SAM．HT29亞克隆轉(zhuǎn)染相對(duì)于DLC．1基因全長(zhǎng)轉(zhuǎn)染組更顯著的抑制了細(xì)胞增殖及RHOA蛋白的活性，增強(qiáng)凋亡，但該組細(xì)胞侵襲、ROCK活性與全長(zhǎng)轉(zhuǎn)染組相比無(wú)明顯差異。4．PCDNA3．1．△START．HT29亞克隆轉(zhuǎn)染相對(duì)于DLC．1基因全長(zhǎng)轉(zhuǎn)染組，細(xì)胞增殖、侵襲能力增強(qiáng)，凋亡細(xì)胞減少，且‰A蛋白活性、ROCK活性均升高。【結(jié)論J1．DLC一1基因在HT29細(xì)胞中發(fā)揮抑癌作用具有RHOGAP依賴性，RHOGAP結(jié)構(gòu)域可能通過(guò)抑制RHO刖ROCK通路發(fā)揮抑癌基因作用。2．SAM結(jié)構(gòu)域可能是內(nèi)源性RH0GAP活性的自身抑制區(qū)域，同時(shí)，SAM結(jié)構(gòu)域可能通過(guò)與其他蛋白、對(duì)蛆或DNA的相互作用而影響ROCK活性及細(xì)胞侵襲。3．START結(jié)構(gòu)域可能協(xié)助RHOGAP結(jié)構(gòu)域而起作用，具體作用途徑尚需進(jìn)一步研究明確?！娟P(guān)鍵詞1肝癌缺失基因．1；基因轉(zhuǎn)染；結(jié)直腸癌；RHOGAP結(jié)構(gòu)域；SAM結(jié)構(gòu)域；START結(jié)構(gòu)域1本課題受國(guó)家自然科學(xué)基金30471937和高等學(xué)校博士學(xué)科專項(xiàng)科研基金200802860040資助ⅡI

簡(jiǎn)介：目的探究大鼠外周血間充質(zhì)干細(xì)胞（PBMSC）有效的富集方法，并評(píng)價(jià)其表型特征、生長(zhǎng)曲線、集落形成率以及體外培養(yǎng)向中胚層多系分化能力，為PBMSC作為間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的種子細(xì)胞新來(lái)源用于治療難治性組織損傷性疾病提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法①選用4周齡SD大鼠，按100GKGDAY的劑量每日一次連續(xù)5天皮下注射粒細(xì)胞集落刺激因子（GCSF）進(jìn)行干細(xì)胞動(dòng)員；經(jīng)左心腔采血，用密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞，繼而用貼壁培養(yǎng)法得到成纖維樣集落生長(zhǎng)細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)至第2代，用流式細(xì)胞術(shù)（CD90、CD44、CD29、CD45、CD11B和CD79A）和免疫細(xì)胞化學(xué)染色法（CD73、CD105、CD34和HLADR）分析分離、培養(yǎng)的PBMSC的表型特征。②MTS檢測(cè)繪制第2代（P2）PBMSC的生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間；采用龍膽紫染色法分析比較GCSF動(dòng)員和未動(dòng)員的SD大鼠外周血CFUF的集落形成率（CFE）。③取生長(zhǎng)良好的P2代PBMSC，用商品化誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)其向成骨、成軟骨以及成脂細(xì)胞分化，于誘導(dǎo)21天后，分別采用茜素紅、阿利新藍(lán)和油紅O染色分析誘導(dǎo)效果。結(jié)果①外周血單個(gè)核細(xì)胞原代培養(yǎng)至6～7天可見(jiàn)明顯的成纖維樣細(xì)胞的集落樣生長(zhǎng)，培養(yǎng)至21天細(xì)胞生長(zhǎng)匯合度可達(dá)80％；傳代細(xì)胞貼壁能力強(qiáng)，形態(tài)均一，呈梭形漩渦狀生長(zhǎng)。②FCM和免疫組化結(jié)果表明，富集的PBMSC高表達(dá)CD90、CD44、CD29、CD73及CD105，不表達(dá)CD45、CD11B、CD79A、CD34和HLADR。③生長(zhǎng)曲線顯示，傳代培養(yǎng)的PBMSC增殖能力強(qiáng)，于培養(yǎng)次日即可進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞倍增時(shí)間為392H；CFUF集落形成率的結(jié)果表明，動(dòng)員后的大鼠PBMSC的集落形成率為1567±207106，而未動(dòng)員組僅為033±058106，兩者比較差異顯著（P﹤001）。④PBMSC的中胚層系分化能力誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)果表明，經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化21天后，茜素紅染色有明顯的鈣結(jié)節(jié)形成；經(jīng)軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化21天后，阿利新藍(lán)染色誘導(dǎo)細(xì)胞胞漿內(nèi)有大量糖胺聚糖形成；經(jīng)成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化21天后，油紅O染色顯示細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴形成。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)從大鼠外周血中分離富集到高豐度、高純度的PBMSC，其具備MSC的表型特征、生長(zhǎng)特點(diǎn)和向中胚層多系的分化能力，進(jìn)一步確證了大鼠PBMSC的存在和應(yīng)用潛力。

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文MIF基因在膀胱癌組織中的表達(dá)及其反義表達(dá)載體對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究姓名劉玉明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)泌尿外科學(xué)指導(dǎo)教師蔣先鎮(zhèn)20070501鱒士學(xué)位論文串文嫡要后的關(guān)系。3MIF與MMP9的關(guān)系。鵑果免疫組化結(jié)果圭膀胱癌組織中MIF器自高表達(dá)；兩正常膀胱上皮組織無(wú)表達(dá)。2MIF蛋自的表達(dá)水平隨臨床分期的增高而顯著增強(qiáng)PO05。3MIF的嵩表達(dá)是患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。圣膀胱癌組織中基質(zhì)金屬蛋自酶9MATRIXMETALLOPROTEINASE9，MMP9蛋患高表達(dá)；兩正常膀胱上皮組織無(wú)表達(dá)。RTPCR結(jié)果1所有膀胱癌組織中MIFMRNA均有表達(dá)，而正常膀胱癌組織中無(wú)L例表達(dá)。2MIFMRNA的表達(dá)水平隨臨床分期的增高麗顯著增強(qiáng)P005。3膀胱癌組織中MMPMRNA的表達(dá)異常增高；麗蘢常膀胱上皮組織無(wú)表達(dá)。3BTCC中MIFMRNA的表達(dá)與刪P9MRNA的表達(dá)具有相關(guān)性PEARSON系數(shù)0。470，PO018，MIF可能從轉(zhuǎn)錄水平鍵進(jìn)MMP9的表達(dá)。【緒論MIF基因MRNA水平和蛋白水平均表明MIF在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)異常增強(qiáng)，其表達(dá)在BTCC侵襲進(jìn)展過(guò)程中起重要作用；MIF可能是評(píng)估患者預(yù)后一個(gè)有用指標(biāo)。MMP9在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)增強(qiáng)。膀胱移行細(xì)胞癌中MIF與MMP9的表達(dá)具有楱關(guān)性，高表達(dá)的MIF可能從轉(zhuǎn)錄水平促進(jìn)刪P9的表達(dá)。關(guān)鍵詞膀虢移行細(xì)胞癌，MIF，1愚4P9，臨床意義第二章MIF反義黼真核表達(dá)載體的鑒定及其抑制BIU87細(xì)胞MIF表達(dá)【匿的】為研究MIF反義RNA對(duì)膀胱癌細(xì)胞體外生物學(xué)的影響，建立并鑒定巍穩(wěn)定表達(dá)MIF反義RNA的膀胱癌細(xì)胞株，探討其對(duì)MIF表達(dá)的影響。方法將PSECTAGMIF、PCDNANTIMIF和空載體PSECTAG、PCDNA。質(zhì)粒及熒光質(zhì)粒PN3EGFP分別轉(zhuǎn)化細(xì)菌、擴(kuò)增提取純化屠，應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法，PCDNA3ANTIMIF、空載體PCDNA。分別轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的膀胱癌細(xì)胞株BIU一87，G418篩選抗性克隆并擴(kuò)大培養(yǎng)傳代，利用RTPCR，WESTERBLOTING和細(xì)胞免疫組化法分別分析其對(duì)冒的基因MIF在MRNA和蛋囪水平靛表達(dá)的影喃。LL

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7基因轉(zhuǎn)染對(duì)原代培養(yǎng)兔髓核細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文TIO2納米管對(duì)牙周膜干細(xì)胞和頜骨間充質(zhì)納米管對(duì)牙周膜干細(xì)胞和頜骨間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究干細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究高暉培養(yǎng)類別全日制學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位一級(jí)學(xué)科專業(yè)類口腔醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科專業(yè)口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究方向牙周組織再生指導(dǎo)教師金巖教授培養(yǎng)單位口腔醫(yī)院二O一五年五月第四軍醫(yī)大學(xué)THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY分類號(hào)R7802UDC61631密級(jí)公開(kāi)第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文目錄縮略語(yǔ)表1中文摘要3英文摘要8前言14文獻(xiàn)回顧16一、牙周組織再生的研究進(jìn)展16二、TIO2納米管形貌對(duì)不同類型細(xì)胞生物學(xué)功能的影響23三、TIO2納米管的體內(nèi)研究32正文34實(shí)驗(yàn)一TIO2納米管微觀形貌的制備3411材料3412方法3513結(jié)果3514討論3615結(jié)論37實(shí)驗(yàn)二TIO2納米管對(duì)牙周膜干細(xì)胞成牙周組織的影響3821材料3822方法3923結(jié)果4424討論5225結(jié)論54實(shí)驗(yàn)三TIO2納米管對(duì)頜骨間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響5531材料5532方法5533結(jié)果57

簡(jiǎn)介：目錄一、摘要中文摘要胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學(xué)意義及分子調(diào)控機(jī)制（1）英文摘要BIOLOGICALSIGNIFICANCEMOLECULARREGULATYMECHANISMOFFILAGGRINGENEMUTATIONINGASTRICCANCERCELLLINES（3）二、論文胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學(xué)意義及分子調(diào)控機(jī)制前言（5）第一部分胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學(xué)意義材料和方法（7）結(jié)果（13）討論（20）結(jié)論（23）第二部分胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的分子調(diào)控機(jī)制材料和方法（25）結(jié)果（26）討論（28）結(jié)論（28）本研究的創(chuàng)新性與自我評(píng)價(jià)（29）三、參考文獻(xiàn)（30）四、附錄附錄英文縮略詞表（36）五、綜述FILAGGRIN基因及聚角蛋白微絲蛋白的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展（37）六、攻讀碩士期間發(fā)表文章情況（47）七、個(gè)人簡(jiǎn)歷（49）八、致謝（50）基金資助內(nèi)蒙古自治區(qū)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目資助KJT2013北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院腫瘤防治研究所分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

簡(jiǎn)介：天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)用組織芯片和細(xì)胞芯片技術(shù)研究肺癌中FHIT和相關(guān)蛋白的表達(dá)及其生物學(xué)意義姓名袁玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師王新允20070501天律醫(yī)科大學(xué)碩士研究生論文和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中失表達(dá)率分別為L(zhǎng)O％、333％、517％和500％，原發(fā)性肺癌組MSI2蛋白的失表達(dá)率高于正常組P005；正常組與癌前病變組、正常組與轉(zhuǎn)移癌組、原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌、原發(fā)癌與癌前病交、癌前病變與轉(zhuǎn)移癌之間FHIT表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05且惦12的表達(dá)與分化程度有關(guān)。而與性別、年齡、肉眼類型、臨床分期及是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)PO053P21蛋白陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于胞漿或核，在各組中的陽(yáng)性率分別為正常組90096，癌前病變組75096，原發(fā)性肺癌組“9％，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性肺癌組25096；正常組和癌前病變組陽(yáng)性率顯著高于原發(fā)性肺癌組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性肺癌組JDO054經(jīng)SPEARMAN等級(jí)相關(guān)分析，三種蛋白在組織芯片中表達(dá)的相關(guān)關(guān)系結(jié)果為FHIT與IIS12的表達(dá)呈明顯正相關(guān)R產(chǎn)0345，P005。5用我們的方法制作出的細(xì)胞芯片排列整齊，分布均勻，無(wú)掉片，符合觀察需要。HE染色鏡下每點(diǎn)均可見(jiàn)具有診斷意義的腫瘤細(xì)胞，基本無(wú)重疊現(xiàn)象。檢測(cè)結(jié)果與同時(shí)制作的相應(yīng)涂片進(jìn)行比較，結(jié)果完全一致。對(duì)細(xì)胞芯片進(jìn)行了FHIT，MSH2，P21免疫組化染色后，細(xì)胞無(wú)明顯減少，胞漿或胞核呈棕黃色顆粒狀。所得陽(yáng)性結(jié)果與各例相應(yīng)涂片檢測(cè)結(jié)果完全一致。將細(xì)胞芯片檢測(cè)結(jié)果與進(jìn)行FHIT，MSH2，P21免疫組化染色的組織芯片中ⅢⅣ期肺癌的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005N

簡(jiǎn)介：EB病毒BARFL原型和變異型基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響中文摘要背景和目的EB病毒EPSTEINBARRVIRUS，EBV編碼早期基因BARFL是新近確立的EBV致癌基因之一，其轉(zhuǎn)化作用已在多種細(xì)胞系中得到證實(shí)。由于BARFL在多數(shù)鼻咽癌NASOPHARYNGEALCARCINOMA，NPC和EBV相關(guān)胃癌組織中表達(dá)，推測(cè)其可能在NPC、胃癌等上皮細(xì)胞性腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期在檢測(cè)BARFL基因多態(tài)性時(shí)發(fā)現(xiàn)V29A變異型在NPC中的檢出率高于健康人群。本研究旨在探討B(tài)ARFL基因?qū)PC細(xì)胞系腫瘤原性的影響以及BARFL基因變異型對(duì)其致癌潛能的影響，為研究BARFL參與NPC的作用及機(jī)制提供依據(jù)。方法構(gòu)建BARFL基因原型B958和變異型V29A慢病毒表達(dá)載體，分別轉(zhuǎn)染EBV陰性NPC細(xì)胞系CNE，殺稻瘟菌素篩選，RTPCR和QRTPCR鑒定目的基因表達(dá)獲得BARFL原型和變異型基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。以對(duì)照病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞為對(duì)照，進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期檢測(cè)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、凋亡誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)BARFL原型和變異型基因?qū)NE細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。結(jié)果1成功構(gòu)建BARFL基因原型和變異型基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，2種基因在EBV陰性NPC細(xì)胞系中均能有效表達(dá)。2細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)BARFL原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞及對(duì)照病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞MTT吸光度值、平板克隆形成率和細(xì)胞周期細(xì)胞增殖指數(shù)均無(wú)顯著性差異P均大于O05。3凋亡誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)順鉑299／M1誘導(dǎo)48H，感染BARFL原型和變異型慢病毒細(xì)胞的存活率均高于對(duì)照病毒感染細(xì)胞，差異有顯著性P均小于005，而細(xì)胞凋亡率低于對(duì)照病毒感染細(xì)胞，差異有顯著性P均小于005，變異型與原型之間細(xì)胞存活率和凋亡率均無(wú)顯著性差異P均大于005。4細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)BARFL原型和變異型慢病毒感染細(xì)胞的遷移能力高于對(duì)照病毒感染細(xì)胞，差異有顯著性氏005，變異型與原型之間細(xì)胞遷移無(wú)顯著性差異尸005。結(jié)論1BARFL基因?qū)BV陰性NPC細(xì)胞系CNE無(wú)明顯促增殖作用，但可提高其抗凋亡能力和遷移能力，從而增強(qiáng)CNE細(xì)胞腫瘤原性，在NPC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起重要作用。2BARFLV29A變異型對(duì)BARFL致癌潛能無(wú)明顯影響。碩士研究生楊穎病原生物學(xué)指導(dǎo)老師羅兵教授關(guān)鍵詞EB病毒；BARFL；鼻咽癌；細(xì)胞生物學(xué)行為BETWEENPROTOTYPEANDVARIANTBARF1一EXPRESSINGCELLSWASNOTSIGNIFICANTINCELLVIABILITYANDAPOPTOSISRATE胗0054THEPROTOTYPEBARF1一EXPRESSINGCELLSANDVARIANTBARF1EXPRESSINGCELLSLEDTOSTRONGERMIGRATIONCAPABILITYTHANTHENONEXPRESSINGCELLS尸005CONCLUSION1BARFLGENEHASNOSIGNIFICANTEFFECTONTHEPROLIFERATIONOFEBVNEGATIVENPCCELLLINECNE，BUTITCANINCREASEITSANTIAPOPTOSISANDMIGRATIONABILITIES，SUGGESTINGBARF1ENHANCETHEONCOGENICABILITYINCNECELLSANDMAYPLAYIMPORTANTROLESINTHEDEVELOPMENTANDPROGRESSOFNPC2THEV29AVARIANTOFBARF1HASNOSIGNIFICANTEFFECTONCARCINOGENICABILITYOFBARF1GENEPOSTGRADUATESTUDENTYINGYANGPATHOGENBIOLOGYDIRECTEDBYPROFBINGLUOKEYWORDSEPSTEINBARRVIRUS；BARFL；NASOPHARYNGEALCARCINOMA；CELLBIOLOGICALBEHAVIOR

簡(jiǎn)介：甲氧滴滴涕（METHOXYCHLMXC）是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的一種，化學(xué)名為二甲二苯三氯乙烷，作為滴滴涕的替代物廣泛使用，在土壤、河流、動(dòng)植物體內(nèi)、人體體液，甚至孕婦血液、胎盤(pán)、臍血、新生兒體內(nèi)都檢測(cè)到了甲氧滴滴涕。滋養(yǎng)細(xì)胞（CYTOTROPHOBLASTCT）是構(gòu)成胎盤(pán)的主要細(xì)胞，包括絨毛外和絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞兩個(gè)亞型，其侵襲、免疫耐受、增殖分化、激素合成、物質(zhì)代謝等生物學(xué)功能是妊娠發(fā)生、維持的必要條件。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲氧滴滴涕可以造成不孕、流產(chǎn)率增加，因此研究甲氧滴滴涕對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響具有重要意義。本研究為滋養(yǎng)細(xì)胞亞型的原代培養(yǎng)、鑒定后用侵襲小室、RTPCR、WESTERNBLOT、放射免疫等方法研究甲氧滴滴涕對(duì)其侵襲能力、免疫耐受以及激素合成等生物學(xué)功能的影響。研究目的1研究MXC對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響；2研究MXC對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞免疫耐受功能的影響；3研究MXC對(duì)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞HCG、P合成的影響。研究方法1用胰蛋白酶消化法得到單細(xì)胞懸液后流式細(xì)胞儀分選出滋養(yǎng)細(xì)胞亞型。光鏡，激光共聚焦，透射電鏡鑒定。2使用侵襲小室檢測(cè)空白對(duì)照組與1ΜMOLL甲氧滴滴涕處理組培養(yǎng)24H后絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力變化。3WESTERNBLOT檢測(cè)空白對(duì)照組與1ΜMOLL甲氧滴滴涕處理組培養(yǎng)24H后絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞MMP2、MMP9、HLAG蛋白表達(dá)。4RTPCR法檢測(cè)空白對(duì)照組與1ΜMOLL甲氧滴滴涕處理組培養(yǎng)24H絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞HLAGMRNA表達(dá)。5用放射免疫法檢測(cè)空白對(duì)照組與1ΜMOLL甲氧滴滴涕處理組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)48H后HCG、P值。結(jié)果1胰蛋白酶消化法加流式細(xì)胞儀分選出的細(xì)胞經(jīng)鑒定為絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞與絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞。2甲氧滴滴涕處理組絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組相比減少，侵襲能力下降（T3509，P001），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3甲氧滴滴涕處理組絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞與空白對(duì)照組相比MMP9、MMP2蛋白表達(dá)下降。4甲氧滴滴涕處理組絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞與空白對(duì)照組相比HLAG蛋白和MRNA表達(dá)下降。5甲氧滴滴涕處理組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞合成HCG與空白對(duì)照相組比減少（T3079，P001），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；甲氧滴滴涕處理組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞合成P與空白對(duì)照相組比減少（T2159，P001），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1胰蛋白酶消化法加流式細(xì)胞儀可以分選出滋養(yǎng)細(xì)胞亞型。2甲氧滴滴涕可以抑制絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力，其機(jī)制可能是減少絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞合成MMP2、MMP9。3甲氧滴滴涕降低絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞HLAG蛋白和MRNA表達(dá)。4甲氧滴滴涕可以抑制絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞合成HCG、P。

簡(jiǎn)介：極低頻（EXTREMELYLOWFREQUENCY，ELF）電磁場(chǎng)指頻率在300HZ以下的電磁場(chǎng)，與我們?nèi)粘Ｉ铌P(guān)系極為密切，高壓輸電線以及工業(yè)生產(chǎn)、日常生活中電器所產(chǎn)生的電磁場(chǎng)（5060HZ）都屬于此范圍。近二十多年來(lái)大量流行病學(xué)調(diào)查表明，ELF電磁場(chǎng)暴露可能與兒童白血病、腦部腫瘤與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。ELF電磁場(chǎng)與癌癥發(fā)生的關(guān)系已成為目前國(guó)內(nèi)外生物磁學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。干細(xì)胞是研究發(fā)育生物學(xué)與腫瘤發(fā)生最有效的工具，間充質(zhì)干細(xì)胞（MESENCHYMALSTEMCELLSMSCS）是骨髓組織中除造血干細(xì)胞以外的另一種干細(xì)胞，具有極強(qiáng)的分化潛能，任何對(duì)MSCS生物學(xué)特性上的影響都有可能對(duì)人體發(fā)育產(chǎn)生無(wú)法估量的后果。ELF電磁場(chǎng)引起宏觀生物效應(yīng)需要時(shí)間的積累，我們此項(xiàng)研究的目的正在于衡量ELF電磁場(chǎng)的累積效應(yīng)對(duì)MSCS的影響。本文以人間充質(zhì)干細(xì)胞（HUAMNMSCSHMSCS）為研究對(duì)象，研究了50HZ，20MT電磁場(chǎng)對(duì)HMSCS生長(zhǎng)、代謝與分化的影響。本文的創(chuàng)新點(diǎn)在于第一次使用HMSCS作為研究對(duì)象，較為系統(tǒng)的分析了電磁場(chǎng)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的作用，指出了其中的部分關(guān)聯(lián)性，并初步探索了電磁場(chǎng)對(duì)HMSCS分化的可能影響。此外，本文還以肝癌細(xì)胞SKHEP1和早幼白血病細(xì)胞HL60作為研究對(duì)象，考察了50HZ，20MT電磁場(chǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響，以期揭示其可能的治療作用。本實(shí)驗(yàn)中HMSCS在50HZ，20MT電磁場(chǎng)下每天照射12H，照射23D，期間以MTT法檢測(cè)細(xì)胞數(shù)目，以葡萄糖乳酸、谷氨酰胺谷氨酸代謝及NAK濃度和滲透壓分析法檢測(cè)細(xì)胞代謝狀況，以堿性磷酸酶及茜素紅染色，堿性磷酸酶和鈣的定量分析來(lái)判斷HMSCS的成骨分化能力。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)腫瘤細(xì)胞SKHEP1和HL60均采用連續(xù)照射法，除上述部分檢測(cè)外，另用DNA梯度電泳，HOECHST33258染色和AOEB染法對(duì)電磁場(chǎng)照射后細(xì)胞的壞死與凋亡狀況進(jìn)行分析。本文表明，HMSCS在50HZ，20MT電磁場(chǎng)作用下，生長(zhǎng)18D后細(xì)胞數(shù)目比同期對(duì)照組中的要低245％，指數(shù)生長(zhǎng)期的比生長(zhǎng)速率比對(duì)照組低222％，細(xì)胞需要更多的時(shí)間（34D）用于擴(kuò)增。照射組的葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和谷氨酸的平均比代謝率分別為7981010GCELLDAY、165109GCELLDAY、491109MMOLCELLDAY和692109MMOLCELLDAY，均比相應(yīng)的對(duì)照組要低。電磁場(chǎng)直接作用于細(xì)胞，促使細(xì)胞的NAK從NAK通道中流出，最終導(dǎo)致細(xì)胞外NAK濃度增加，滲透壓也隨之增加。但本實(shí)驗(yàn)對(duì)HMSCS的分化研究表明，電磁場(chǎng)的照射對(duì)于HMSCS的成骨分化未表現(xiàn)出顯著影響。本文研究同時(shí)表明，50HZ，20MT電磁場(chǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞SKHEP1和HL60的生長(zhǎng)和代謝具有抑制作用，并引起滲透壓的改變，在一定程度上還可引發(fā)腫瘤細(xì)胞的凋亡。