簡(jiǎn)介：目的探討磁共振增強(qiáng)劑超順磁性納米鐵顆粒SUPERPARAMAGICIRONOXIDE，SPIOFERIDEX標(biāo)記人FLK1CD31CD34間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANMESENCHYMALSTEMCELLS，HMSCS對(duì)其表型、細(xì)胞活性、增殖能力及向神經(jīng)方向分化能力的影響，為磁共振成像技術(shù)追蹤磁標(biāo)記移植細(xì)胞提供可靠的理論依據(jù)。方法使用轉(zhuǎn)染劑介導(dǎo)法標(biāo)記，以含F(xiàn)ERIDEX50ΜGML及多聚賴氨酸POLYLYSINE，PLL15ΜGML的培養(yǎng)基與HMSCS共同孵育1218小時(shí)。FEFIDEX標(biāo)記后行普魯士藍(lán)染色測(cè)定標(biāo)記率及標(biāo)記效率隨細(xì)胞數(shù)目和時(shí)間產(chǎn)生的變化、透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒分布。通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色、生長(zhǎng)曲線測(cè)定及流式細(xì)胞儀檢測(cè)FERIDEX對(duì)細(xì)胞活性、生長(zhǎng)能力及細(xì)胞表型的影響。采用化學(xué)誘導(dǎo)法10MMOLLΒ巰基乙醇及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)法100NGML堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在體外誘導(dǎo)HMSCS向神經(jīng)方向分化。免疫熒光方法檢測(cè)誘導(dǎo)后對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組HMSCS神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)記物NF、MAP2、GFAP和GALC的表達(dá)，通過(guò)IMAGEPROPLUS60軟件測(cè)定熒光OD值，比較兩組間差異。結(jié)果使用含F(xiàn)ERIDEX50ΜGML及PLL15ΜGML的培養(yǎng)基標(biāo)記HMSCS，標(biāo)記效率可達(dá)96％。電鏡檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞內(nèi)可見(jiàn)黑色顆粒，以胞漿為主，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。標(biāo)記后對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活性均超過(guò)97％；流式細(xì)胞儀檢測(cè)，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞CD44、CD105、FLK1均為陽(yáng)性，CD31、CD34均為陰性。FERIDEX標(biāo)記后1周，細(xì)胞生長(zhǎng)能力及活性與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。FERIDEX標(biāo)記效率隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)目增加而逐步下降?；瘜W(xué)誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后兩組細(xì)胞均表達(dá)NF，MAP2及GFAP均為陰性；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后兩組細(xì)胞NF、GFAP、GALC均為陽(yáng)性。兩種方法誘導(dǎo)HMSCS向神經(jīng)方向分化后，測(cè)定NF、MAP2、GFAP、GALC免疫熒光OD值，二組間OD值無(wú)顯著性差異。結(jié)論1、采用FERIDEX50ΜGML及PLL15ΜGML可有效標(biāo)記HMSCS。2、FERIDEX標(biāo)記效率隨時(shí)間延長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)目增多逐漸下降。3、FERIDEX對(duì)HMSCS增殖能力、細(xì)胞活性、細(xì)胞表型及向神經(jīng)方向分化能力均無(wú)顯著性影響。FERIDEX作為磁共振活體示蹤劑，是安全、高效的。

簡(jiǎn)介：江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文YB1在血液系統(tǒng)腫瘤中的表達(dá)及其對(duì)耐藥白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名周磊磊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師許文林20070609江蘇大學(xué)碩士論文V檢測(cè)白血病細(xì)胞的凋亡程度；采用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后化療藥物的IC50值變化，RTPCR和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中的MDRLMRNA和PGP表達(dá)的變化；采用基因芯片技術(shù)比較陽(yáng)性轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組細(xì)胞的基因表達(dá)的差異。結(jié)果DLBCL組與RLH組的YB1胞漿陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)明顯差異E0763，而DLBCL組的YB1胞核陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于RLH組尸O05；DLBCL臨床III～Ⅳ期、結(jié)外淋巴組織侵犯及骨髓浸潤(rùn)患者的YB1胞核陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于I～I(xiàn)I期、結(jié)內(nèi)病變及無(wú)骨髓浸潤(rùn)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05；DLBCL組與RLH組均出現(xiàn)PGP的表達(dá)，兩組的總體表達(dá)率無(wú)明顯差異∽O05，PGP的表達(dá)強(qiáng)度與DLBCL患者的性別、年齡、臨床分期、結(jié)內(nèi)外浸潤(rùn)及有無(wú)骨髓浸潤(rùn)無(wú)明顯相關(guān)性PO05；YB1的核陽(yáng)性表達(dá)與PGP的表達(dá)強(qiáng)度70950，P0005及PCNA積分尸O930，P0005均呈正相關(guān)；化療有效組的YB1核陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于化療無(wú)效組EO038化療有效組的PGP表達(dá)強(qiáng)度顯著低于化療無(wú)效組PO001。針對(duì)YB1第5B顯子325343、381399和430448位點(diǎn)設(shè)計(jì)的三個(gè)SHRNA片段和隨機(jī)片段HK成功克隆KPGENESIL一1質(zhì)粒中，產(chǎn)生重組質(zhì)粒PGENSIL一1／U6／YBXL1，PGENSIL1FU6／YBXL2，PGENSIL1／U6／YBXL3及PGENSIL1FU6／HK，酶切及Ⅸ蛆測(cè)序分析顯示，重組質(zhì)粒SHRNA編碼序列與設(shè)計(jì)片斷的序列完全一致。成功構(gòu)建了針對(duì)YB1的特異性SHRNA真核表達(dá)載體。通過(guò)脂質(zhì)體法將YB1S樅和HK重組載體轉(zhuǎn)染進(jìn)K562／A02細(xì)IL

簡(jiǎn)介：APRIL2011原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本人的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者氧珈日期年月日＼J學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者氣體復(fù)制手段保留論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作霉昂日期年月日

簡(jiǎn)介：甘露聚糖結(jié)合凝集素MANNANBINDINGLECTIN，MBL是哺乳動(dòng)物C型凝集素超級(jí)家族中膠凝素家族成員，主要由肝細(xì)胞分泌，作為糖蛋白存在于血漿中。通過(guò)其糖識(shí)別域CARBOHYDRATERECOGNITIONDOMAIN，CRD識(shí)別病原體表面糖結(jié)構(gòu)，通過(guò)其膠原樣區(qū)COLLAGENLIKEREGION，CLR與2個(gè)MBL相關(guān)絲氨酸蛋白酶MBLASSOCIATEDSERINEPROTEASE，MASP1，MASP2結(jié)合，以不依賴抗體和C1Q的凝集素途徑激活補(bǔ)體，發(fā)揮溶破和間接調(diào)理功能，還能與吞噬細(xì)胞表面膠凝素受體結(jié)合而起直接調(diào)理作用。MBL的識(shí)別譜廣泛，在天然免疫中發(fā)揮重要作用。MBL基因在人群中突變頻率極高，已知3個(gè)MBL結(jié)構(gòu)基因點(diǎn)突變可導(dǎo)致MBL蛋白空間結(jié)構(gòu)改變，與糖基配體和MASPS結(jié)合的能力降低，補(bǔ)體凝集素激活途徑幾乎完全消失，臨床上表現(xiàn)為各種病原體的急慢性反復(fù)感染。人血漿MBL含量極低，從血漿中大量提取MBL用于科研和臨床，花費(fèi)昂貴。通過(guò)基因工程、細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)，體外大規(guī)模制備MBL，將為進(jìn)一步研究MBL，在免疫系統(tǒng)中的作用以及臨床上MBL缺損的治療提供條件。本課題組曾成功構(gòu)建了兩個(gè)野生型MBL，真核表達(dá)載體，PCDNA31MBL和PCDNA4HISMAXCMBL，并用電穿孔法分別轉(zhuǎn)染入CHO、HEK293和HEPG2細(xì)胞，經(jīng)G418和ZEOCIN選擇轉(zhuǎn)染子并克隆化培養(yǎng)，獲得表達(dá)重組人MBL的細(xì)胞株。通過(guò)RTPCR和ELISA等方法分析比較，發(fā)現(xiàn)PCDNA31MBL在CHO和HEK293細(xì)胞中能夠大量合成RNA，其表達(dá)效率顯著高于其他載體和細(xì)胞的組合。因此，本研究采用本室保存的已轉(zhuǎn)染了PCDNA31MBL真核表達(dá)載體的CHO細(xì)胞株進(jìn)行為期2個(gè)月的篩選，通過(guò)ELISA技術(shù)篩選高表達(dá)單克隆細(xì)胞株，然后擴(kuò)大培養(yǎng)，分離純化其表達(dá)的蛋白產(chǎn)物，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究。一、雙抗夾心ELISA體系的建立用抗MBLCRD單克隆抗體捕獲，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗MBLCLR多克隆抗體檢測(cè)，以丹麥AARHUS大學(xué)JENSCHRJENSENIUS教授贈(zèng)送的重組人MBL蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品，來(lái)篩選細(xì)胞培養(yǎng)上清中目的蛋白含量較高的細(xì)胞株，以獲得高表達(dá)重組人MBL蛋白的細(xì)胞克隆。該檢測(cè)體系靈敏度可達(dá)01MGL。二、篩選穩(wěn)定高效表達(dá)重組人MBL蛋白的細(xì)胞株本課題組已構(gòu)建了含PCDNA31MBL真核表達(dá)載體的CHO細(xì)胞。將其復(fù)蘇后，在96孔板中單克隆化，待細(xì)胞克隆長(zhǎng)至孔底的14后，挑取細(xì)胞株置12孔板內(nèi)培養(yǎng)24H后，以800MGL的G418加壓篩選。隨后的1個(gè)月中，每隔3～5天換液一次，維持G418濃度為800MGL。然后，通過(guò)雙抗夾心ELISA體系篩選得到6株高表達(dá)的單克隆細(xì)胞株，其上清中目的蛋白濃度均在3MGL以上。RTPCR分析表明，這些轉(zhuǎn)染了MBL基因的CHO細(xì)胞能穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄MBLMRNA。三、重組人MBL蛋白的純化及其生物學(xué)特性研究利用硫酸銨沉淀法初步純化表達(dá)產(chǎn)物，鼠抗人MBLCRDMAB親和層析柱進(jìn)一步純化，獲得重組人MBL蛋白。在1L培養(yǎng)上清中可獲得2MG左右目的蛋白。經(jīng)ELISA鑒定，純化后的蛋白產(chǎn)物可與抗MBL單克隆抗體、抗MBLCRD單克隆抗體、抗MBLCIR多克隆抗體結(jié)合。通過(guò)非還原SDSPAGE和WESTERNBLOT分析，重組人MBL分子量多集中在MR200000以上，為三至六聚體形式。結(jié)合實(shí)驗(yàn)證明所純化的重組MBL，蛋白能與甘露聚糖及重組MASP蛋白有效結(jié)合；C4D沉積實(shí)驗(yàn)表明重組人MBL蛋白和血漿來(lái)源MBL均能有效介導(dǎo)補(bǔ)體激活，而這種介導(dǎo)作用可被競(jìng)爭(zhēng)性糖類抑制。另外，用C4D沉積試驗(yàn)檢測(cè)保存于不同溫度下6個(gè)月的重組蛋白介導(dǎo)補(bǔ)體激活的功能，發(fā)現(xiàn)其穩(wěn)定性良好，活化補(bǔ)體活性無(wú)明顯降低。

簡(jiǎn)介：ZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTEREFFECTSOF1，25一OH2D3ONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFPORCINEAMELOBLASTSBYXIANLIZENGSUPERVISORPROFHONGYUZHAOSTOMATOLOGYMEDICALSCHOOLMAY2010原創(chuàng)性聲明㈣㈣IIILL㈣IHILL舢ILIII洲UIIILL㈣11IIIIY1832932本人學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立撰寫并完成的，學(xué)位論文沒(méi)有剽竊、抄襲等違反學(xué)術(shù)道德、學(xué)術(shù)規(guī)范的侵權(quán)行為，否則，本人愿意承擔(dān)由此產(chǎn)生的一切法律責(zé)任和法律后果，特此聲明。學(xué)位論文懈穆鈾?quán)?啪年石月匆日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文憾曾鉑嗍2Ⅲ年∥肌日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R57R57學(xué)校代碼學(xué)校代碼1039210392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100201100201學(xué)號(hào)號(hào)21210032752121003275密級(jí)級(jí)碩士學(xué)位學(xué)位論文論文微小微小RNA423RNA4235P5P調(diào)控三葉因子調(diào)控三葉因子1基因表達(dá)及對(duì)胃黏膜基因表達(dá)及對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞生物學(xué)行為生物學(xué)行為影響影響EFFECTSOFMIRNA4235PONTREFOILFACTOR1EXPRESSIONANDONBIOLOGICALBEHAVIOROFGASTRICMUCOSALEPITHELIALCELLS學(xué)位類型型醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士所在學(xué)院院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院申請(qǐng)人姓名申請(qǐng)人姓名陳國(guó)彬陳國(guó)彬?qū)W科學(xué)科、專業(yè)專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化）內(nèi)科學(xué)（消化）導(dǎo)師師任建林任建林教授教授研究起止日期研究起止日期20132013年7月至月至20152015年4月答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席王小眾王小眾教授教授答辯日期期20152015年0505月1111日二○一五○一五年四月福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文II目錄附錄附錄1中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要4第1章前言前言611三葉因子612MIRNA與TFFS表達(dá)調(diào)控7第2章材料和方法材料和方法1021實(shí)驗(yàn)材料10211組織標(biāo)本10212細(xì)胞株10213引物10214主要實(shí)驗(yàn)試劑10215主要儀器耗材11216主要試劑的制備1122實(shí)驗(yàn)方法13221細(xì)胞培養(yǎng)13222瞬時(shí)轉(zhuǎn)染14223RNA提取與RTPCR15224實(shí)時(shí)熒光定量PCR19225WESTERNBLOT蛋白印跡21226HE染色技術(shù)22227免疫組織化學(xué)技術(shù)23228MTT25229EDU252210集落實(shí)驗(yàn)262211劃痕實(shí)驗(yàn)27

簡(jiǎn)介：腦膠質(zhì)瘤是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤之一，在成人和兒童5060％的顱內(nèi)腫瘤都是腦膠質(zhì)瘤，腦膠質(zhì)瘤發(fā)生率大概642例100000。腦膠質(zhì)瘤患者5年存活率不到30％。本研究首次探討了KIF2A基因在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)情況并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究了KIF2A基因在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移，侵襲，增殖和凋亡中的作用及分子機(jī)制最后初步探討了KIF2A基因和在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到非常重要作用的HIF1Α基因的關(guān)系。第一部分KIF2A在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義目的研究KIF2A在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義。方法標(biāo)本收集收集遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2008～2013年間原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本35例，另收集2014年山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)外科住院患者手術(shù)切除的新鮮腦膠質(zhì)瘤組織35例，作為實(shí)驗(yàn)組。且所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療等其他治療，并與患者或監(jiān)護(hù)人簽署實(shí)驗(yàn)知情同意書后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。同時(shí)取20例正常尸檢的腦組織標(biāo)本做為對(duì)照組。所有入組組織標(biāo)本按照WHO2000標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，ⅠⅡ級(jí)15例，ⅢⅣ級(jí)20例男23例，女12例平均年齡（470歲）。1應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)高級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織，不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織KIF2A蛋白的表達(dá)情況。探討在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織及不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織中KIF2A蛋白的表達(dá)情況及相互關(guān)系。2應(yīng)用REALTIMEPCR法檢測(cè)新鮮腦膠質(zhì)瘤組織中KIF2A的MRNA表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。探討在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中KIF2A的MRNA表達(dá)情況及相互關(guān)系。結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示35例高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織和20例正常腦組織中都有KIF2A的陽(yáng)性表達(dá)，與正常腦組織比較，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織表達(dá)率高于正常腦組織，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0001。免疫組化檢測(cè)35例不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織表達(dá)率高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤P0044。KIF2A蛋白主要表達(dá)在胞質(zhì)及胞核，呈棕黃色顆粒，在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿中染色較強(qiáng)，在低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞和正常腦組織細(xì)胞中染色較淺。REALTIMEPCR法檢測(cè)新鮮膠質(zhì)瘤組織中KIF2A的MRNA表達(dá)。KIF2A表達(dá)隨著腦膠質(zhì)瘤級(jí)別增高而增強(qiáng)P0033。結(jié)論KIF2A在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中強(qiáng)表達(dá)，在低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織弱表達(dá)。KIF2A的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)，臨床分期相關(guān)。第二部分KIF2A基因沉默對(duì)腦膠質(zhì)瘤A172增殖、凋亡、侵襲遷移的影響目的探討SIRNA介導(dǎo)的KIF2A基因沉默對(duì)腦膠質(zhì)瘤A172細(xì)胞系細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲遷移能力的影響探討KIF2A基因沉默后抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。方法1人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株篩選腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172和U251細(xì)胞常規(guī)進(jìn)行復(fù)蘇，傳代，獲取細(xì)胞，37℃，5％C02飽和濕度條件下，在含10％胎牛血清和DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，提取A172和U251細(xì)胞的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，確定人腦膠質(zhì)瘤A172細(xì)胞作為研究對(duì)象。2質(zhì)粒干擾率的測(cè)定將細(xì)胞分KIF2ASIRNA組和SCRAMBLEDSIRNA對(duì)照組，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A172細(xì)胞以2105數(shù)目接種于6孔培養(yǎng)板中。用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000分別轉(zhuǎn)染KIF2ASIRNA和SCRAMBLEDSIRNA。轉(zhuǎn)染后48H，收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA和總蛋白，應(yīng)用RTPCR方法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組中KIF2A的基因表達(dá)。應(yīng)用WESTERNBLOT方法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組中KIF2A的蛋白表達(dá)。分析不同實(shí)驗(yàn)組中A172細(xì)胞KIF2A的基因、蛋白表達(dá)情況。評(píng)價(jià)KIF2ASIRNA組干擾效率。3利用CCK8檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)腦人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞增殖能力的影響分別將指數(shù)生長(zhǎng)期A172KIF2ASIRNA組和對(duì)照組細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后按1104個(gè)孔接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)3天，于第0、24、48和72H，采用CCK8方法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況。4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞的凋亡率變化取各組細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后按2105孔接種于12孔板中，待細(xì)胞融合至約80％，收集細(xì)胞，ANNEXINⅤ和PI染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率變化。5TRANSWELL小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。取各組無(wú)血清A172細(xì)胞懸液100ΜL加入小室的上室，下室加入600ΜL含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)16H。光鏡下計(jì)數(shù)侵襲到濾膜背面的穿膜細(xì)胞數(shù)，評(píng)價(jià)細(xì)胞的侵襲遷移能力。6明膠酶譜法檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞A172細(xì)胞MMP2、MMP9的表達(dá)的影響。7WESTERNBLOT檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞PI3KAKT和MAPKERK信號(hào)通路的影響。8WESTERNBLOT檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤A172細(xì)胞MMP2、MMP9蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果1KIF2ASIRNA能夠有效下調(diào)KIF2A的表達(dá)。QRTPCR檢測(cè)KIF2ASIRNA敲除24H，48H時(shí)A172細(xì)胞中KIF2A的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)48H的敲除效率高P0003。WESTERNBLOT進(jìn)一步驗(yàn)證A172細(xì)胞中KIF2ASIRNA較對(duì)照組敲除48H時(shí)的效率高。2CCK8法檢測(cè)KIF2A敲除對(duì)A172細(xì)胞增殖的影響。發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間延長(zhǎng)，A172細(xì)胞KIF2ASIRNA敲除組增殖率顯著低于對(duì)照組。3ANNEXINⅤPI法檢測(cè)KIF2ASIRNA及SCRAMBLEDSIRNA兩組敲除48H時(shí)A172細(xì)胞凋亡率。發(fā)現(xiàn)KIF2A敲除組較對(duì)照組相比，KIF2A敲除組顯著上調(diào)A172的凋亡率P＜00001。4TANSWELL小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示KIF2ASIRNA敲除組A172細(xì)胞侵襲遷移顯著低于對(duì)照組。5明膠酶譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)KIF2ASIRNA敲除組上清中MMP2、MMP9的活性顯著低于SCRAMBLEDSIRNA組。6WESTERNBLOT分析發(fā)現(xiàn)KIF2ASIRNA敲除組中，與膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、遷移相關(guān)的AKT磷酸化水平下調(diào)MMP2蛋白表達(dá)水平下調(diào)。與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖相關(guān)的P38MAPK磷酸化水平下調(diào)。結(jié)論1KIF2ASIRNA能夠有效的抑制A172細(xì)胞中KIF2A的表達(dá)，KIF2A基因沉默后A172細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力明顯降低，凋亡水平升高。2KIF2A通過(guò)PI3KAKT和MAPKERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為中起著重要的作用。3KIF2A通過(guò)MMP調(diào)控人腦膠質(zhì)瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力。第三部分HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和意義及和KIF2A的關(guān)系目的研究HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義，并分析其與KIF2A之間的關(guān)系。方法收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)外科20132014年住院患者手術(shù)切除的新鮮腦膠質(zhì)瘤組織35例，所有標(biāo)本病理證實(shí)是人腦膠質(zhì)瘤組織并制備成石蠟切片，所有患者均為原發(fā)性，術(shù)前未行放療、化療和其他治療，所有患者及監(jiān)護(hù)人被告知進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有患者組織標(biāo)本診斷按照WHO2000標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，ⅠⅡ級(jí)15例，ⅢⅣ級(jí)20例男23例，女12例平均年齡（470歲）。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織HIF1Α蛋白的表達(dá)情況。檢測(cè)在不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織中HIF1Α蛋白的表達(dá)情況，并探討KIF2A與HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果1HIF1Α蛋白表達(dá)與臨床資料之間的關(guān)系。免疫組化結(jié)果顯示HIF1Α蛋白主要在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中染色。35例腦膠質(zhì)瘤組織中HIF1Α蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率是686％，20例ⅢⅣ腦膠質(zhì)瘤切片中，17853％例表達(dá)陽(yáng)性，3147％例陰性表達(dá)。15例ⅠⅡ腦膠質(zhì)瘤切片中，7467％例表達(dá)陽(yáng)性，8533％例陰性表達(dá)。HIF1Α蛋白在Ⅱ低級(jí)別和ⅢⅣ高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤表達(dá)有差異性P0027。HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)隨著腫瘤級(jí)別增高而成上升趨勢(shì)P＜005，HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤表達(dá)與患者年齡，性別、腫瘤大小及發(fā)生部位無(wú)關(guān)。2KIF2A和HIF1Α蛋白在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)相關(guān)性。免疫組化檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤中KIF2A和HIF1Α蛋白表達(dá)無(wú)差異性P033。結(jié)論HIF1Α蛋白在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中強(qiáng)表達(dá)，在低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤弱表達(dá)。HIF1Α的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)，臨床分期相關(guān)。HIF1Α蛋白可作為評(píng)價(jià)腦膠質(zhì)瘤臨床指標(biāo)的一個(gè)重要因子。KIF2A和HIF1Α蛋白在腦膠質(zhì)瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中均可能化起到正調(diào)控作用，但兩者之間可能不存在相關(guān)性，其機(jī)制尚待進(jìn)一步研究明確

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文NNMT過(guò)表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及意義研究姓名張鈞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師何超20100408浙江大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要方法1．通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX．4T2／NNMT和真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA3．1／NNMT。2．利用基因工程制備NNMT蛋白，并作為免疫原免疫小鼠制備NNMT單克隆抗體，并建立基于此單克隆抗體的WESTERN．BLOT、免疫組化等實(shí)驗(yàn)方法。3．采用RTPCR和WESTERN．BLOT分析多株結(jié)直腸癌細(xì)胞系的NNMT表達(dá)，篩選NNMT無(wú)／低表達(dá)和高表達(dá)株。4．把PCDNA3．1／NNMT轉(zhuǎn)入COLO320和SW480細(xì)胞株，用G418來(lái)篩選轉(zhuǎn)入目的基因的細(xì)胞，建立相應(yīng)的NNMT高表達(dá)腫瘤細(xì)胞模型和空質(zhì)粒PCDNA3．1轉(zhuǎn)染的對(duì)照模型。5．通過(guò)NNMT高表達(dá)腫瘤細(xì)胞模型，結(jié)合RNA干擾技術(shù)，MTT法分析NNMT對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和化療藥物敏感試驗(yàn)、流式細(xì)胞儀分析凋亡和細(xì)胞周期、用TRANSWELL細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和MATRIGEL基質(zhì)浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)研究NNMT對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移和侵潤(rùn)等生物學(xué)功能的影響。6．用AFFIMETRIXGENEEXPRESSION芯片比較NNMT基因?qū)肭昂蟠竽c癌細(xì)胞的基因表達(dá)差異，分析NNMT下游效應(yīng)分子和作用機(jī)制。7．采用免疫組化檢測(cè)組織NNMT與結(jié)直腸癌的臨床病理的關(guān)系。結(jié)果1．構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX．4T2／NNMT和真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA3．1／NNMT,并通過(guò)了酶切和測(cè)序驗(yàn)證。2．50用基因工程制備的NNMT蛋白作為免疫原免疫小鼠制備了能穩(wěn)定分泌抗NNMT單克隆抗體的4個(gè)細(xì)胞株，該NNMT單克隆抗體具有很好的特異性和反應(yīng)性，并建立了基于此單克隆抗體的WESTERN．BLOT、免疫組化等實(shí)驗(yàn)方法。3．對(duì)多株大腸癌細(xì)胞系HT29、SW480、COLO320、SW620、HCTLL6、HCE8693的NNMT的MRNA和蛋白表達(dá)進(jìn)行了分析，RTPCR結(jié)果顯示除SW480外，其余細(xì)胞均能檢測(cè)到MRNA，其中COLO320表達(dá)水平最高。WESTERNIII

簡(jiǎn)介：本文應(yīng)用膽總管結(jié)扎法建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型，檢測(cè)腎上腺素受體各亞型的表達(dá)與肝纖維化發(fā)展的關(guān)系；進(jìn)一步在細(xì)胞水平分別給予去甲腎上腺素Α受體及Β受體的阻滯劑，檢測(cè)其對(duì)HSCS增殖、凋亡以及膠原代謝的作用，并探討交感神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)控HSCS生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，旨在闡明交感神經(jīng)系統(tǒng)在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制，從而尋求有效的預(yù)防和治療肝纖維化的新思路、新策略。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下四部分第一部分肝纖維化過(guò)程中去甲腎上腺素各受體亞型表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化目的研究肝纖維化過(guò)程中去甲腎上腺素各受體亞型表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。方法膽總管結(jié)扎法建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型，HE、MASSON染色觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HSCS活化指標(biāo)ΑSMA的表達(dá)，WESTERNBLOT和REALTIMEQPCR檢測(cè)ΑAR、Β1AR、Β2AR蛋白和MRNA的表達(dá)。結(jié)果①術(shù)后大鼠一般情況觀察大鼠膽總管結(jié)扎后1H～2H恢復(fù)活動(dòng)，48H左右尿液變黃，3～4天后皮膚毛發(fā)開(kāi)始轉(zhuǎn)黃，精神逐漸變差，進(jìn)食量少于對(duì)照組，體重增加不明顯或稍有下降。5～6天一般狀況漸差，嗜睡，反應(yīng)遲緩，活動(dòng)減少，黃疸明顯，鼠糞呈灰白色。20天后進(jìn)食量明顯減少，體重與對(duì)照組相比明顯降低，并且部分大鼠逐漸出現(xiàn)腹部隆起。②肝組織病理組織學(xué)變化模型大鼠肝臟肉眼觀呈褐綠色或棕色，表面略呈細(xì)顆粒狀，質(zhì)地變硬。HE及MASSON三色染色顯示，假手術(shù)對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝板排列整齊，肝細(xì)胞無(wú)腫脹，無(wú)膽管增生，無(wú)淤膽及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，核仁清晰，少量結(jié)締組織局限于門管區(qū)。造模1WK后，模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)散在變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域出現(xiàn)小片狀壞死，門管區(qū)小膽管樣上皮細(xì)胞增生。造模2WK后，模型組肝板正常排列消失，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，門管區(qū)小膽管廣泛增生，并向小葉內(nèi)延伸、肝小葉呈花環(huán)狀；新生小膽管周圍纖維組織增生，門管區(qū)面積擴(kuò)大，肝小葉內(nèi)亦有纖維組織增生。造模3WK～4WK后，模型組肝臟廣泛纖維結(jié)締組織增生，增生的纖維間隔互相連接、包繞、分割，改建原來(lái)的肝小葉甚至形成假小葉。MASSON三色染色膠原面積密度測(cè)定結(jié)果顯示模型組1WK、2WK、3WK、4WK膠原面積密度1011％±114％，2114％±122％，2887％±205％，3744％±317％均顯著高于假手術(shù)對(duì)照組322％±077％，P001。③ΑSMA免疫組織化學(xué)染色顯示正常大鼠肝組織中僅在血管壁平滑肌細(xì)胞有弱陽(yáng)性表達(dá)；隨著肝纖維化的發(fā)展，大鼠肝組織中ΑSMA陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔、肝竇周圍及增生的膽管周圍細(xì)胞，造模1WK～4WK大鼠肝組織ΑSMA的陽(yáng)性面積1058％±175％，2414％±202％，2974％±259％，3428％±201％均顯著高于假手術(shù)組412％±151％，P001。即肝纖維化程度越重ΑSMA染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量亦越多。④WESTERNBLOT檢測(cè)結(jié)果顯示，分別在大約57KD、50KD、47KD位置出現(xiàn)ΑAR、Β1AR、Β2AR特異性條帶，在43KD位置可見(jiàn)ΒACTIN條帶。假手術(shù)組有少量腎上腺素受體蛋白表達(dá)，隨著肝纖維化進(jìn)展其表達(dá)逐漸增加，造模1WK～4WK大鼠肝組織ΑAR、Β1AR、Β2AR蛋白表達(dá)量明顯升高154±008，187±015，272±009，284±018VS085±012，P005；157±018，192±011，251±017，289±019VS098±015，P005；184±020，197±009，285±014，387±018VS124±018，P005。⑤REALTIMEQPCR共擴(kuò)增檢測(cè)ΑAR、Β1AR、Β2AR和內(nèi)參照GAPDH基因表達(dá)，根據(jù)△CT實(shí)驗(yàn)組CT目的基因CTGAPDH，ACT對(duì)照組CT目的基因CTGAPDH，△△CT△CT實(shí)驗(yàn)組△CT對(duì)照組，目的基因的相對(duì)表達(dá)量FOLDS2△△CT計(jì)算ΑAR、Β1AR、Β2ARMRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果證實(shí)，隨著肝纖維化的發(fā)展，ΑAR、Β1AR、Β2ARMRNA表達(dá)逐漸上調(diào)，造模4WK表達(dá)最多154±008，298±009，323±011，394±013VS100±007，P001；147±010，213±009，254±012，281±010VS100±010，P001；124±O07，278±010，354±014，424±015VS100±008，P001。⑥ΑSMA與ΑAR、Β1AR、Β2AR的多元相關(guān)分析顯示，ΑSMA與ΑAR、Β1AR及Β2AR呈正相關(guān)，R值分別為0564、0753和0606。結(jié)論膽總管結(jié)扎法成功建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型，肝纖維化形成過(guò)程中HSCS大量活化、增殖，ΑSMA表達(dá)增加。隨著肝纖維化進(jìn)展，ΑAR、Β1AR、Β2AR蛋白及MRNA含量明顯增加，與ΑSMA呈明顯的正相關(guān)。第二部分交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)HSCS生物學(xué)行為的影響目的探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素對(duì)體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及膠原代謝的影響。方法體外培養(yǎng)HSCS，用四甲基偶氮唑鹽MTT法檢測(cè)NE對(duì)HSCS增殖的影響；原位雜交凋亡檢測(cè)TUNEL法觀察NE對(duì)HSCS凋亡的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞凋亡調(diào)控基因BCL2和BAX的蛋白表達(dá)情況；倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；用REALTIMEQPCR檢測(cè)I型膠原MRNA的表達(dá)；并用WESTERNBLOT和REALTIMEQPCR檢測(cè)MMP13和TIMP1蛋白和MRNA的表達(dá)。結(jié)論交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)體外活化的HSCS具有促進(jìn)增殖和抑制凋亡的作用，并引起凋亡調(diào)控基因BAX表達(dá)下降，而BCL2表達(dá)增加。NE還可以使HSCSMMP13表達(dá)降低，TIMP1表達(dá)升高，進(jìn)而降低MMP13TIMP1比值，從而減少其對(duì)肝臟膠原降解的作用，使HSCSⅠ型膠原表達(dá)量增加，從而加速肝纖維化的進(jìn)展。第三部分去甲腎上腺素各受體亞型對(duì)HSCS生物學(xué)行為的調(diào)控作用目的探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素各受體亞型對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法體外培養(yǎng)HSCS，WESTERNBLOT檢測(cè)HSCS腎上腺素受體ΑAR、Β1AR及Β2AR蛋白的表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)腎上腺素受體亞型在HSCS的分布與定位；REALTIMEQPCR檢測(cè)HSCS腎上腺素受體ΑAR、Β1AR及Β2ARMRNA的表達(dá)。細(xì)胞干預(yù)分為以下6組①空白對(duì)照組，為單純HSCS培養(yǎng)；②交感興奮組NE；③ΑAR阻滯組酚妥拉明；④Β1AR阻滯組CGP20712A；⑤Β2AR阻滯組ICI118551；⑥交感抑制組酚妥拉明普萘洛爾。MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖；TUNEL法觀察HSCS凋亡狀況；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及凋亡調(diào)控基因BAX和BCL2的變化；REALTIMEQPCR檢測(cè)Ⅰ型膠原MRNA的表達(dá)；并用WESTERNBLOT和REALTIMEQPCR檢測(cè)MMP13和TIMP1蛋白和MRNA的表達(dá)。結(jié)論HSCS可以表達(dá)ΑAR、Β1AR和Β2AR腎上腺素受體蛋白和MRNA，主要分布于HSCS的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。ΑAR、Β1AR和Β2AR特異性阻滯劑均可以抑制HSCS增殖、誘導(dǎo)其凋亡。并可以拮抗NE引起的凋亡基因的變化，使BAX表達(dá)下降，BCL2表達(dá)升高。其中，ΑAR阻滯劑酚妥拉明和Β2AR阻滯劑ICI118551效果最明顯。NE受體阻滯劑促進(jìn)HSCSMMP13表達(dá)，顯著降低TIMP1表達(dá)，MMP13TIMP1比值回升；Ⅰ型膠原MRNA表達(dá)亦明顯降低。第四部分NE調(diào)控HSCS生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制目的探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為影響的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。方法體外培養(yǎng)HSCS，加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002，用四甲基偶氮唑鹽MTT法檢測(cè)NE對(duì)HSCS增殖的影響；TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡情況；WESTERNBLOT檢測(cè)PI3K蛋白表達(dá)的變化情況。結(jié)果①NE促進(jìn)HSCS增殖，加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后細(xì)胞增殖受抑制；②NE作用于HSCS24H，TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)均證實(shí)HSCS凋亡率顯著低于對(duì)照組，加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后HSCS凋亡率升高1440％±451％VS660％±305％BYTUNEL，P＜005；504％±144％VS229％±022％BYFCM，P＜005；③加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后，WESTERNBLOT證實(shí)PI3K蛋白表達(dá)減少。結(jié)論交感神經(jīng)遞質(zhì)NE可以促進(jìn)HSCS增殖，抑制HSCS凋亡，與PI3K信號(hào)通路相關(guān)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多HBV X基因?qū)02肝細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及阿霉素干預(yù)HBx調(diào)控L02肝細(xì)胞凋亡的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：很多研究表明，骨質(zhì)疏松導(dǎo)致的頜骨骨量減少是口腔種植失敗的重要原因之一，因此，有效的防治骨質(zhì)疏松成為口腔醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。全身用藥雖然可以增加頜骨的骨密度，從而提高種植體成功率，但弊端也很大。為此，劉洪臣提出的人工種植牙給藥系統(tǒng)為防治骨質(zhì)疏松和提高種植體成功率提供了很好的途徑。在治療骨質(zhì)疏松藥物中，雌二醇及依普黃酮聯(lián)合應(yīng)用有望成為理想的治療藥物，所以本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究骨質(zhì)疏松患者種植體周圍靶細(xì)胞骨質(zhì)疏松頜骨成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的變化和雌二醇及依普黃酮對(duì)其的影響，為人工種植牙給藥系統(tǒng)提供一定的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。第一部分、骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的建立和頜骨與全身骨質(zhì)疏松的關(guān)系。目的建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，研究頜骨骨質(zhì)疏松與全身的關(guān)系。方法采用摘除大鼠雙側(cè)卵巢的方法建立動(dòng)物骨質(zhì)疏松模型，通過(guò)檢測(cè)體重、股骨腰椎骨密度、血清指標(biāo)的方法確定骨質(zhì)疏松模型是否建立。通過(guò)檢測(cè)頜骨骨密度和組織切片判斷頜骨骨質(zhì)疏松的情況。結(jié)果在術(shù)后4W時(shí)，OVX組的大鼠體重比SHAM組顯著增加，腰椎和股骨出現(xiàn)骨密度下降，血清中鈣出現(xiàn)降低，而堿性磷酸酶和骨鈣素出現(xiàn)了升高。下頜骨在術(shù)后4W先出現(xiàn)升高，上頜骨在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未出現(xiàn)顯著的骨密度變化，但是兩者在術(shù)后均呈現(xiàn)了降低的趨勢(shì)。HE組織切片顯示下頜骨OVX組骨小梁明顯減少，排列稀疏。結(jié)論骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型成功建立，頜骨的變化與全身骨質(zhì)疏松有關(guān)。第二部分、去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞增殖分化能力的變化。目的探討大鼠術(shù)后4W和12W下頜骨成骨細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及增殖分化礦化能力的變化。方法采用酶消法和組織塊法聯(lián)合培養(yǎng)成骨細(xì)胞，用堿性磷酸酶染色、Ⅰ型膠原染色和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色鑒定成骨細(xì)胞。通過(guò)檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖、堿性磷酸酶、骨鈣素、鈣磷鎂的吸收和鈣結(jié)節(jié)比較增殖分化能力的變化。采用RTPCR和WESTERNBLOT的方法檢測(cè)PCNA基因蛋白的表達(dá)。用透射電鏡觀察成骨細(xì)胞微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果所培養(yǎng)細(xì)胞堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色均為陽(yáng)性。術(shù)后4WOVX組成骨細(xì)胞增殖能力和堿性磷酸酶活性就出現(xiàn)了明顯的升高；術(shù)后12W時(shí)OVX組成骨細(xì)胞增殖能力、堿性磷酸酶活性、骨鈣素、PCNA基因蛋白的表達(dá)均比SHAM組高。透射電鏡的結(jié)果顯示12W的OVX組成骨細(xì)胞線粒體和異染色質(zhì)明顯增多，而SHAM組溶酶體等黑色顆粒和白色小泡較多。結(jié)論大鼠去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞的增殖分化能力出現(xiàn)了明顯增加。第三部分、去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞職和UCP2表達(dá)的變化目的探討術(shù)后4W和12W下頜骨成骨細(xì)胞ER和UCP2的表達(dá)。方法采用RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)ER和UCP2的表達(dá)變化。結(jié)果成骨細(xì)胞表達(dá)了UCP2，且OVX組表達(dá)的UCP2比SHAM組明顯減少。ER在OVX組的基因表達(dá)高于SHAM組。結(jié)論成骨細(xì)胞ER和UCP2表達(dá)的改變可能與骨質(zhì)疏松增殖分化能力變化的機(jī)制有關(guān)。第四部分、依普黃酮及雌二醇對(duì)骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。目的探討雌二醇及依普黃酮聯(lián)合作用對(duì)骨質(zhì)疏松性成骨細(xì)胞增殖分化的影響和相關(guān)基因蛋白的表達(dá)。方法檢測(cè)不同藥物濃度對(duì)于骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞的增殖能力和堿性磷酸酶的影響，確定最大促進(jìn)作用的藥物濃度，用RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測(cè)藥物對(duì)于UCP2、PCNA和ER表達(dá)的影響。結(jié)果所選濃度的雌二醇和依普黃酮均可以增加骨質(zhì)疏松性成骨細(xì)胞的增殖分化能力，未見(jiàn)抑制現(xiàn)象。并且兩種藥物均促進(jìn)UCP2和PCNA的表達(dá)，但聯(lián)合用藥時(shí)表達(dá)并沒(méi)有相互加強(qiáng)。依普黃酮抑制ERΑ表達(dá)，促進(jìn)ERΒ表達(dá)，兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)ER的表達(dá)無(wú)明顯作用。結(jié)論所選濃度的雌二醇及依普黃酮均起到促進(jìn)骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞增殖分化的作用，未見(jiàn)抑制作用。并且藥物對(duì)PCNA、UCP2和ER的表達(dá)也有影響，兩藥之間具體的作用機(jī)制并不清楚。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文RHOA在胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為和氧化應(yīng)激促進(jìn)凋亡中的作用姓名蔡軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師易靜20070501上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文2NFKB的激活在胃癌SGC7901細(xì)胞發(fā)揮促生存抗凋亡的作用；活化RHOA促進(jìn)NFKB與DNA的特異結(jié)合，加強(qiáng)NFKB的促轉(zhuǎn)錄活性，ROCK抑制劑Y27632部分逆轉(zhuǎn)這一作用。砷劑聯(lián)用大黃素引起的氧化應(yīng)激抑制NFKB與DNA的特異結(jié)合，阻止NFKB促進(jìn)下游基因的表達(dá)。3活化的RHOA通過(guò)對(duì)ACTIN的裝配和VINCULIN的分布的影響，使細(xì)胞具有抗ANOIKIS的作用，砷劑聯(lián)用大黃素作用后，抑制了RHOA的活性，引起細(xì)胞黏附復(fù)合體的崩解，使腫瘤細(xì)胞形態(tài)改變，黏附減弱，凋亡明顯增加。結(jié)論RHOA促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖，具有抗凋亡作用，其機(jī)制通過(guò)促進(jìn)NFKB的激活和抗ANOIKIS的作用，活化RHOA促進(jìn)黏附斑復(fù)合體的穩(wěn)定性。其中，促進(jìn)NFKB的激活途徑部分依賴于RHOA下游效應(yīng)分子ROCK。砷劑聯(lián)用大黃素引起氧化應(yīng)激促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制涉及對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性RHOA的抑制，繼而引起細(xì)胞黏附斑復(fù)合體的崩解。關(guān)鍵詞RHOA，氧化應(yīng)激，ANOIKIS，NFKB，胃癌細(xì)胞

簡(jiǎn)介：MIR一520B對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制研究論文作者簽指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1評(píng)閱人2評(píng)閱人3評(píng)閱人4評(píng)閱人5匿名評(píng)閱匿名評(píng)閱匿名評(píng)閱匿名評(píng)閱答辯委員會(huì)主席陵昭典教援逝江太堂醫(yī)堂院附屬箍二醫(yī)院蠆員1昌伯壅教援逝塹生醫(yī)藥太堂附屬箍三醫(yī)院委員2杜佳堊主任醫(yī)婭浙江太堂醫(yī)堂隨附屬筮三醫(yī)院委員3撻耋送主任醫(yī)匝蟲國(guó)厶民鯉趑至箍二二土醫(yī)院委員4選拍垡主任醫(yī)婭逝江太堂匡堂院附屬箍二醫(yī)院委員5汪朔主任醫(yī)埡浙、江太堂醫(yī)堂院附屬箍二醫(yī)院委員6金曉丕主任醫(yī)婭逝江太堂醫(yī)堂院隘屬箍二醫(yī)院答辯日期2014年11月27日HOSPITAL，COLLEGEOFMEDICAL，ZHEJIANGUNIVERSITYCOMMITTEEMAN5WANGSHUOCHIEFCONSULTANTTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITAL，COLLEGEOFMEDICAL，ZHANGUNIVERSITYCOMMITTEEMAN6JINXIAODONGCHIEFCONSULTANTTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITAL，COLLEGEOFMEDICAL，ZHANGUNIVERSITYDATEOFORALDEFENCE27NOV2014

簡(jiǎn)介：天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ARF缺失與腫瘤細(xì)胞MDMX異常調(diào)控的分子生物學(xué)機(jī)制姓名李小龍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)；腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師郝希山201205天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ABSTRACTMDMXISAHETERODIMERICPARTNEROFMDM2ANDACRITICALREGULATOROFP53THEMDMXLEVELISGENERALLYELEVATEDINTUMORSWITHWILDTYPEP53ANDCONTRIBUTESTOP53INACTIVATIONMDMDDEGRADATIONISCONTROLLEDINPARTBVMDM2MEDIATEDUBIQUITINATIONHEREWESHOWTHATⅣIDⅣⅨTURNOVERISHIGHLYRESPONSIVETOCHANGESINMDM2LEVELINNONTRANSFORMEDCELLSBUTNOTINTMNORCELLSWEFOUNDTHAT10SSOFALTEMATEREADINGFRAMEARFEXPRESSION，WHICHOCCURSINMOSTTUMORS謝THWILDTYPEP53SIGNIFICANTLYREDUCESMDMXSENSITIVITYTOMDM2RESTORATIONOFAI江EXPRESSIONINTUMORCELLSENABLESMDM2TODEGRADEMDMXINADOSEDEPENDENTMANNERARFBINDSTOMDⅣ【2ANDSTIMULATESASECONDSITEINTERACTIONBETWEENTHECENTRALREGIONOFMDM2ANDMDMXANDTHUSINCREASESMDMX_】ⅥDM2BINDINGANDMDMXUBIQUITINATIONTHESERESULTSREVEALANIMPORTANTABNORMALITYINTHEP53REGULATORYPATHWAYASACONSEQUENCEOFAI邛DEFICIENCYLOSSOFARFDURINGTUMORDEVELOPMENTNOTONLYPREVENTSP53STABILIZATIONBYPROLIFERATIVESTRESSBUTALSOCAUSESACCUMULATIONOFMDⅣTHATCOMPROMISESP53ACTIVITYTHISPHENOMENONMAYREDUCETHECLINICALEFFICACYOFMDM2一SPECIFICINHIBITORSBYPREVENTINGMDMXDOWNREGULATIONKEYWORDSMDM2MDMXARFP53UBIQUITINATIONNUTLINII

簡(jiǎn)介：本文聚焦空間結(jié)構(gòu)對(duì)成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響，探討真皮替代物減少瘢痕形成的機(jī)制。方法取清潔級(jí)SD大鼠30只，把松質(zhì)骨和密質(zhì)骨植入大鼠背部皮下和肉膜層之間，進(jìn)行HE染色，同時(shí)檢測(cè)ΑSMA的表達(dá)，動(dòng)態(tài)觀察有無(wú)三維結(jié)構(gòu)和三維結(jié)構(gòu)是否均勻?qū)Τ衫w維細(xì)胞的影響。另外9只大鼠將整塊絲素膜和絲素膜碎片，分別植入背部皮下和肉膜層之間，進(jìn)行HE染色，檢測(cè)ΑSMA的表達(dá)，觀察三維結(jié)構(gòu)的完整性和連續(xù)性對(duì)成纖維細(xì)胞的影響；其余12只大鼠在背部皮下和肉膜層之間，觀察術(shù)后1周、2周和3周成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，同時(shí)檢測(cè)ΑSMA、BFGF、PCNA的表達(dá)及細(xì)胞凋亡，觀察不同三維結(jié)構(gòu)對(duì)成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，把來(lái)源于人包皮的成纖維細(xì)胞接種至孔徑分別為200UM和1000UM的膠原膜內(nèi)，于1周和2周取材，進(jìn)行動(dòng)態(tài)組織學(xué)觀察。結(jié)論1空間形態(tài)結(jié)構(gòu)的存在能夠影響成纖維細(xì)胞的形態(tài)及其功能；2完整、連續(xù)和均勻的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)有利于調(diào)控成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為，從而減少瘢痕的形成；3太小和太大的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)都不利于成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的正常調(diào)控，只有比較適合成纖維細(xì)胞的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)，才能使其生物學(xué)行為沿著有利于減少瘢痕增生的方向發(fā)展；4在創(chuàng)面愈合過(guò)程中，通過(guò)完整的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)來(lái)影響成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為，可能是真皮模板抑制瘢痕形成、改善愈合質(zhì)量的機(jī)制之一。