簡介：研究背景帕金森病PD是以中腦黑質紋狀體區(qū)多巴胺DA能神經元進行性變性為主要病理特征的一類中樞慢性退行性疾病。統(tǒng)計學資料顯示，在65歲以上老年人群中，PD的發(fā)病率以超過1％，已躍居為僅次子阿爾茨海默病嚴重威脅老年人健康的第二大殺手。臨床上主要表現為靜止性震顫、僵直、運動遲緩和姿勢異常，晚期也將出現自主神經功能紊亂、感覺障礙、精神異常和認知障礙等非運動性癥狀，給患者身心健康、家庭和社會帶來了沉重的負擔。PD臨床運動功能障礙主要是由黑質紋狀體通路中多巴胺的嚴重缺失而造成。目前藥物治療（左旋多巴）能有效恢復多巴胺水平，仍然是早期臨床治療的主旋律，但長期服用會造成嚴重的異動和精神障礙。外科手術（腦深部電刺激術）是晚期PD患者的主要治療選擇，雖然同樣能有效的控制癥狀，但手術費用昂貴，在緩解疾病進展方面也并沒有定論。近年來，細胞替代治療在退行性疾?。ㄈ鏟D）治療逐漸展現出廣闊的前景。許多實驗室和臨床研究也表明替代缺失的DA神經元能改善PD運動癥狀，而干細胞由于其獨特的生物學特性逐漸成為了主要的細胞來源。干細胞體外可被誘導分化為DA神經元的研究結果是細胞移植治療PD的理論基礎。胚胎干細胞ESCS是從發(fā)育早期胚囊內細胞團分離出來的一種未分化細胞，具有利于移植的各種優(yōu)勢，也能被誘導分化為神經干細胞NSCS或神經前體細胞NPCS，隨后進一步分化為DA神經元。盡管如此，ESC在細胞移植方面的應用面臨了巨大的限制，比如倫理束縛、易形成畸胎瘤。誘導多能干細胞IPSCS的發(fā)現雖曾一度帶來了新的希望，但是有研究表明IPSCS比其他類型多能干細胞有更高的基因畸變頻率，意味著更容易誘發(fā)腫瘤。因此，成體干細胞又重新成為了眾多研究者們的焦點。間充質干細胞MSCS可以自我更新，并可分化為不同的細胞譜系，這些均是干細胞移植治療的重要特征和先決條件，在生物醫(yī)學和組織工程中具有巨大的科研價值。迄今為止，盡管在許多不同的成體組織中發(fā)現了MSCS的存在，但大多數實驗室和臨床研究都是在闡述明確且充分的骨髓間充質干細胞BMSCS引導下進行的。然而，由于骨髓的獲取過程有創(chuàng)易出現感染，以及其數量、分化能力和基因穩(wěn)定性均隨年齡的增大而下降。因此，在過去的幾十年，探索新干細胞來源的研究從未停止過。人類胎盤是在妊娠過程中的一個暫時性器官，由分別來自于胎兒和母體的胎膜層和底蛻膜層組成。在哺乳動物妊娠過程中，胎兒被作為半異體移植體，在妊娠期并不會受到母體免疫細胞的攻擊和排斥。胎盤在這個免疫耐受過程中起到重要作用，而發(fā)揮此作用的核心部位是構成母胎界面的母體蛻膜組織。有趣的是，越來越多的研究表明在足月胎盤的兩個組成部分里均含有大量的MSCS。其中，胎膜來源的MSCSFMMSCS由于來自胎兒而被推測具有多向分化潛能。確實，先前研究表明FMMSCS體外可被誘導分化為中胚層的心肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、脂肪細胞，內胚層的胰島細胞、肝細胞以及外胚層的神經元、星形膠質細胞。而且這些結果同樣在體內模型（心肌梗死和PD大鼠模型、糖尿病小鼠模型和脊髓損傷靈長類動物模型）中得到了證實，進一步說明了FMMSCS移植可產生功能性效用。相反，底蛻膜來源的MSCSDECIDUABASALISDERIVEDMSCS，DBMSCS很可能由于其母體來源而極少受到關注。INTANKER等首先描述了DBMSCS的分離和擴增潛能。此外，另有研究表明DBMSCS的生長對缺氧和血清剝奪環(huán)境具有抵抗作用，可能為因局部缺血所造成的細胞凋亡提供更好的替代治療。但迄今為止，對于DBMSCS在遺傳穩(wěn)定性和增殖能力等方面的研究卻鮮有，而這些特性與其移植潛能密切相關。與移植潛能相關的另一重要課題乃是移植后免疫排斥問題。免疫調節(jié)功能是MSCS用作細胞治療的一個極具吸引力的特征。重要的是，中樞神經慢性炎性反應是PD發(fā)生和發(fā)展的主要病理學基礎，許多動物實驗表明緩解黑質紋狀體區(qū)的炎癥反應是減緩DA神經元退化的有效手段。值得注意的是，炎癥雖然長期被認為是大腦修復的阻礙，但同時也可通過分泌趨化因子促使干祖細胞募集和遷移，這也恰巧構成了干細胞移植治療PD的良好微環(huán)境。相反，一氧化氮NO和活性氧ROS等炎癥介質可促使蛋白異常修飾而導致錯折疊和功能缺失，進一步加劇神經退變。MSCS借助于其特有的免疫調節(jié)功能，通過細胞接觸或分泌可溶性細胞因子對有害免疫炎性組分的調控抑制黑質區(qū)微環(huán)境中的免疫活性，進而對DA神經元起到保護作用，為PD細胞移植治療打開了一扇新的窗戶。近年來，FMMSCS由于其低免疫原性（高表達HLAG抗原、低表達HLAⅡ抗原）吸引了眾多學者的目光。另外，通過分裂素或同種異體細胞進行混合淋巴細胞共培養(yǎng)試驗證實FMMSCS具有免疫抑制作用。然而，在母胎免疫中發(fā)揮更重要作用的母體側蛻膜組織中的DBMSCS的免疫學特性尚未見報道。基于上述研究背景，試圖從胎盤母體側底蛻膜組織中分離并鑒定DBMSCS從基因穩(wěn)定性、增殖能力和免疫學特性等角度分析其移植潛能并進一步研究其體外分化為DA神經元的能力，評價其在將來PD治療方面的應用前景。第一章人胎盤底蛻膜間充質干細胞的分離及鑒定目的探索有效的DBMSCS體外分離、純化方法，建立穩(wěn)定的培養(yǎng)體系，并從表型和功能方面進行鑒定。方法通過酶消化法和密度梯度離心法從人足月胎盤（3741孕周，男性胎兒）底蛻膜中獲取間充質干細胞，采用限制性稀釋法純化獲取單細胞來源的克隆團，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)變化和生長特點流式細胞儀檢測細胞周期及表面抗原CD14，CD29，CD31，CD34，CD44，CD45，CD73，CD90，CD105，CD106的表達免疫細胞化學檢測內皮細胞標記血管性血友病因子VWF、間質細胞標記波形蛋白VIMENTIN、成纖維細胞標記D7FIB、成骨細胞標記堿性磷酸酶ALP、成軟骨細胞標記Ⅱ型膠原蛋白COLLAGENⅡ和脂肪細胞標記周脂素PERILIPIN的表達，顯微鏡下隨機選取10個視野200計算陽性率。在特定的誘導條件下，使其向成骨、成脂、成軟骨方向分化，鑒定其多向分化潛能。所有數據采用均數±標準差（X±SD）方式進行統(tǒng)計學描述。結果人足月胎盤底蛻膜中分離的間充質干細胞起初呈現不規(guī)則形態(tài)，僅少量貼壁生長，7天后主要呈現成纖維細胞樣長梭形，細胞生長緩慢，約在第14天形成克隆團，每個克隆團約100200個細胞組成，大約3周后可達融合狀態(tài)傳代后細胞生長速度明顯加快，呈旋渦狀生長經限制性稀釋培養(yǎng)后，單細胞來源的DBMSCS克隆團表現為均一的長梭形。流式細胞儀檢測結果顯示＞70％的細胞處于靜止期（G0G1期），且這些細胞不表達造血細胞標記CD14，CD34，CD45和內皮細胞標記CD31，CD106，而典型的間充質干細胞標記CD29，CD44，CD73，CD90，CD105呈陽性表達。免疫細胞化學結果顯示僅少量DBMSCS表達公認的內皮細胞標記VWF40±12％，而大多數細胞表達間質細胞標記VIMENTIN（982±24％）和成纖維細胞D7FIB（991±16％），在經誘導前成骨細胞標記ALP、成軟骨細胞標記COLLAGENⅡ和脂肪細胞標記PERILIPIN均未見表達，而經誘導后茜素紅染色、油紅O染色和ALCIANBLUE染色均呈陽性表現。結論人胎盤底蛻膜雖然來源于母體，同樣含有豐富的間充質干細胞，這種細胞具備一般MSCS基本特性，包括呈克隆樣貼壁生長、表達典型的MSCS表面標記以及具有向成骨細胞、成軟骨細胞和脂肪細胞等中胚層分化潛能。第二章人胎盤底蛻膜間充質干細胞移植潛能相關生物學特性目的通過對DBMSCS基因穩(wěn)定性、增殖能力、免疫調節(jié)功能等生物學特性的深入探索，評價其在于細胞移植治療方面的應用潛能。方法將單細胞來源的DBMSCS分兩組，一組連續(xù)培養(yǎng)3周，血球計每周計數兩次，繪制生長曲線另一組連續(xù)長期培養(yǎng)3月，獲取晚期代數細胞。染色體核型分析早、晚期代數DBMSCS的染色體核型變化。原子力顯微鏡AFM、透射電鏡TEM觀察晚期代數DBMSCS細胞骨架結構及亞細胞超微結構。密度梯度離心法體外分離人外周血單核細胞PBMCS，聯合DBMSCS建立混合淋巴細胞共培養(yǎng)MLCS體系，在PBMCS經植物凝血素PHA或同種異體PBMCS刺激后，CCK8法分析DBMSCS對PBMCS增殖抑制作用流失細胞儀分析MLCS中淋巴細胞的凋亡情況及TREG細胞CD4CD25HIGH比例實時熒光定量聚合酶鏈式反應QPCR檢測MLCS中DBMSCS可溶性細胞因子轉化生長因子ΒTGFΒ、白介素10（IL10）、誘導型一氧化氮合酶INOS、環(huán)氧化酶2COX2、吲哚胺2，3雙加氧酶IDO和人類白細胞抗原GHLAG的表達情況。FMMSCS作為對照。所有數據采用均數±標準差（X±SD）方式進行統(tǒng)計學描述多組間比較采用單向方差分析，DBMSCS體外生長動力學分析采用析因設計資料的方差分析，兩個獨立樣本的均數比較采用兩獨立樣本的T檢驗，可溶性細胞因子表達部分采用兩獨立樣本非參數秩和檢驗，P＜005認為差異具有統(tǒng)計學意義。結果通過描繪早期代數DBMSCS生長曲線圖，結果提示DBMSCS在經過11天的潛伏期后進入對數生長期，且自此往后的檢測點D11、D14、D18、D20，其細胞數量明顯高于FMMSCSP＜005整個過程中DBMSCS始終保持上升的生長勢頭，而FMMSCS在末期生長表現為下降的趨勢。經過3個月的長期連續(xù)培養(yǎng)，我們獲取了第1624代晚期DBMSCS。原子力顯微鏡觀察下DBMSCS呈長梭型，部分可見大的扁平狀細胞，可見與細胞長軸平行的微絲束，細胞骨架明顯，由微管、微絲、中間纖維形成立體的網狀結構，邊緣復雜，有觸突狀骨架伸出，對維持細胞的形態(tài)、細胞的運動和物質運輸起著關鍵的作用。細胞核大，核膜清晰，核仁明顯，部分細胞核可見多個核仁。細胞間連接也可見微管及微絲結構，形成細胞間的網狀連接，提示細胞間存在相互通訊和物質交換的可能。透射電鏡顯示細胞呈長梭形，細胞膜完整，在高倍鏡下，細胞表面可見散在的豐富的類似微絨毛結構，可能與胎盤固有的附著能力有關。細胞間的連接以緊密連接為主，部分區(qū)域可見縫隙連接，說明細胞間存在粘合和通訊的交互作用。細胞多為單核，偶見雙核，核漿比例大，核膜清晰，外膜外表面附有核糖體，具有合成蛋白質的功能，核仁一個或多個，由核仁絲纏繞成海綿球體狀，少量的異染色質分布在核周邊區(qū)，常染色質占多數，是間期核處于伸展部位的染色質，電子密度低，利于RNA的復制，部分細胞可見核仁邊集現象，這可以使核仁合成的各種RNA更迅速的釋放在胞質中，表明細胞代謝活躍。胞漿內可見散在的粗面內質網，其上附著豐富的游離核糖體，說明正在大量合成細胞分裂和生長所需的蛋白質，這從側面反應了細胞增殖活躍，細胞分化程度較低。細胞的線粒體為管狀嵴結構，與內分泌細胞的線粒體的超微結構相似。染色體核型分析結果顯示所有受檢的晚期代數DBMSCS樣本均和早期代數細胞一樣保持正常染色體核型46，XX由于所有胎盤樣本均來自與男性胎兒，此結果也側面反應了我們所分離的細胞單純來源于母體組織，而并未受胎兒組織細胞的污染。MLCS實驗結果表明無論細胞細胞接觸方式和TRANSWELL，DBMSCS類似FMMSCS可抑制促細胞分裂素和同種異源誘導的淋巴細胞增殖，并且呈濃度依賴性。流式細胞儀ANNEXINVPI染色檢測細胞凋亡結果顯示MLCS對照和共培養(yǎng)體系中淋巴細胞未見明顯的凋亡，兩者差異無統(tǒng)計學意義（T1340，P0229）。流式細胞儀分析與DBMSCS共培養(yǎng)后CD4CD25HIGH細胞的變化情況，結果顯示MLCS體系中經PHA刺激，與DBMSCS共培養(yǎng)3天后，CD4CD25HIGH細胞比例相比對照組增高了5倍以上。QPCR結果提示除TGFΒZ0289P0773外，IL10Z2309P0021、INOSZ2309P0021、COX2Z2309P0021、IDOZ2309P0021和HLAGZ2309P0021等抗炎因子的表達量相比未處理DBMSCS明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義。結論人胎盤底蛻膜間充質干細胞具有較強的增殖活性，體外長期連續(xù)培養(yǎng)可保持穩(wěn)定正常的染色體核型，且具有明顯的免疫抑制作用，是干細胞移植治療良好的細胞種子來源。第三章人胎盤底蛻膜間充質干細胞向多巴胺能樣神經元分化目的探討人胎盤底蛻膜間充質干細胞體外分化為多巴胺能樣神經元的潛能，并分析這種潛能是否受長期培養(yǎng)影響進而評價其在PD治療方面的應用前景。方法采用早期第3代和經長期培養(yǎng)3個月后第19代單細胞來源DBMSCS依照兩步法進行誘導。第一步神經球NSS誘導，細胞換新鮮基礎培養(yǎng)基孵育過夜，胰蛋白酶消化后用含表皮生長因子EGF、堿性成纖維細胞生長因子BFGF和B27等細胞因子的誘導培養(yǎng)基進行誘導。同時，通過光學顯微鏡下分別計數兩種不同代數細胞的成球率來評價他們的成球能力。第二步DA神經元誘導，將NSS消化成單個細胞后，用含音猬因子SHH、成纖維細胞生長因子8FGF8、腦源性生長因子BDNF和毛猴素的誘導培養(yǎng)基重懸后接種于層粘連蛋白包被的培養(yǎng)板中連續(xù)誘導710天。第一步誘導后光學顯微鏡下觀察NSS形態(tài)和生長特點，免疫細胞化學和WESTERNBLOT檢測神經干細胞NSC標記NESTIN和CD133的表達第二部誘導后光學顯微鏡下觀察DA神經元細胞形態(tài)改變，免疫細胞化學和WESTERNBLOT檢測成熟神經元標記神經特異性的烯醇化酶NSE、神經膠質細胞標記膠質纖維酸性蛋白GFAP和DA神經元特異性標記酪胺酸羥化酶TH的表達情況。采用圖像分析軟件分析WESTERNBLOT條帶灰度，以ΒACTIN作為標準化內參。電化學高效液相色譜法分析誘導前后培養(yǎng)上清中DA含量變化。所有數據采用均數±標準差（X±SD）方式進行統(tǒng)計學描述早、晚期代數來源的NSS成球能力及DA神經元神經遞質分泌量比較采用兩個獨立樣本的T檢驗，早、晚期代數DBMSCS來源的DA神經元標記表達率比較采用兩獨立樣本非參數秩和檢驗，P＜005認為具有統(tǒng)計學意義。結果當DBMSCS經過第一步NSS誘導后，起初幾天大多數細胞仍呈貼壁生長，在第3天開始出現小的細胞團，這些細胞團（并非所有）體積逐漸增大，約810天形成漂浮生長的細胞球，第3代和第19代細胞來源的NSS光學顯微鏡下觀察形態(tài)學上無差異，免疫細胞化學檢測提示兩種不同來源的NSS均高表達神經干細胞標記NESTIN和CD133，WESTERNBLOT結果與免疫細胞化學結果相符。而晚期代數DBMSCS來源的NSS形成數量明顯低于早期代數來源的NSS（3889±0674VS6778±0752），差異具有統(tǒng)計學意義T4958，P0000。當NSS經過第二步DA神經元誘導后，細胞呈現出長梭形分枝狀的神經元樣形態(tài)，兩種代數來源的神經元祥細胞均表達成熟神經元標記NSE（62250±4935VS56650±6890％，Z1441，P0180）、神經膠質細胞標記GFAP42800±6160VS40867±10686％，Z0641，P0589和DA神經元特異性標記TH（19050±5585VS17233±2680％，Z0320，P0818）。WESTERNBLOT結果同樣證實了TH蛋白的表達，且電化學高效液相結果顯示相比誘導前，兩種不同來源細胞誘導后培養(yǎng)上清DA含量均有升高P3T23002，P0000P19T15756，P0000，差異具有統(tǒng)計學意義。此外，兩種不同代數細胞誘導前后DA分泌量（P3VSP19156033±8206VS144640±12435PGML，T1325，P0256）無明顯區(qū)別，差異均無統(tǒng)計學意義。結論人胎盤底蛻膜間充質干細胞體外可分化為多巴胺能樣神經元，且這種分化能力不受體外長期培養(yǎng)的影響，可能成為PD干細胞移植治療的有效細胞來源。

簡介：南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文改良HBSS液對體外培養(yǎng)人牙周膜細胞生物學活性的影響EFFECTOFMODIFIEDHBSSSOLUTIONONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANPERIODONTALLIGAMENTCELLSINVITRO課題來源國家自然科學基金30900860學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院李鑫段建民主任醫(yī)師口腔臨床醫(yī)學科研型碩士研究生學院2013年5月2日廣州中文摘要的牙齒發(fā)生了置換性吸收【5】，而造成再植牙失敗的主要原因是牙根的炎癥性吸收INFLAMMATORYRESORPTION，IR和置換性吸收REPLACEMENTRESORPTION，RR。ANDREASENJO對影響再植牙形成FH的因素進行分析后發(fā)現，對形成FH有影響的因素由強至弱依次為牙根發(fā)育階段、體外干燥放置時間、即刻再植和體外濕保存時問16J。再有，許多研究結果顯示與縮短口外放置時間比較，用保存介質保存PDLC活性來預防脫位牙再植后的RR和IR貝TJ更為關鍵【71。理想的脫位牙保存介質應具有生理性滲透壓和PH值、能保存PDLC的活性、粘附力和增殖能力、以及容易獲得且保質期長等特性。TLBSS液HANK’SBALANCEDSALTSOLUTION是美國牙髓醫(yī)師學會推薦的最佳牙齒保存液，含有細胞生存所必需的營養(yǎng)物質，滲透壓290320MOSRRDL，PH值72，適宜細胞生長【8I。但是因為在藥店里無售而一直沒有被廣泛使用。牛奶因為含細菌量低，并且含有少量細胞生長所需的營養(yǎng)物質和生長因子而被廣泛接受，但是它的效果是否與HBSS液樣還存在爭議，有報道認為它只能在3H內保存細胞活性【9】。器官保存液VIASPAN也被研究用做PDLC的保存介質，它能有效保存唇成纖維細胞活性至168H，且在VIASPAN中保存6H和12H的狗牙再植后既未發(fā)生IR，也未發(fā)生RRLL0，111。雖然VIASPAN能長時間地保存細胞活性，但因價格昂貴而不適于普遍使用。BUTTKETMNVIASPAN含有的還原型谷胱甘肽GLUTATHIONE，GSH能分解過氧化氫，保護PDLC免受氧化損傷他的研究也證實在添加了100U／ML過氧化氫酶的HBSS液中保存過的狗脫位牙，再植后的根面吸收率顯著低于未添加過氧化氫酶的HBSS液組【3L。德匡DENTOSAFE公司生產了一種名為牙科急救箱的脫位牙齒保存液，被瑞士和澳洲引進放在易發(fā)生牙外傷的高風險區(qū)中小學校，體外實驗表明這種牙齒保存液能在室溫下保存PDLC活性和增殖能力至48H【12】。有報道對使用了牙科急救箱的6顆脫位牙做了長期隨訪，保存時間為1～53H，這些牙齒再植后全部形成了牙周膜愈合【1。由此可見，選擇適當的保存介質濕保存脫位牙，對于保存牙根面PDLC的活性，提高再植牙的FH是非常重要的。目前我國對脫位牙齒保存液的研究甚少，也沒有商業(yè)化的脫位牙齒保存液U

簡介：點擊查看更多體外培養(yǎng)人創(chuàng)面肉芽組織成纖維細胞生物學特性研究.pdf精彩內容。

簡介：後旦大學復旦大學碩士研究生學位論文SMOOTHENED介導的GPCR樣信號對腫瘤多藥耐藥細胞生物學特性的影響及作用機制研究院系所專業(yè)姓名指導教師完成日期藥學院藥理學L目爭白霞譚文福副研究員2013年5月20目復旦大學碩士學位論文縮略詞表縮略符外文全稱中文全稱

簡介：目的瘦素信號通路缺失瘦素抵抗是二型糖尿病的并發(fā)癥之一現有的研宄顯示中樞和外周途徑的瘦素信號對骨量、脂肪含量都有較為明顯的影響。但瘦素信號對于兩種不同來源的間充質干細胞作用是否相同與之相關的作用靶點是什么卻不甚了解。本研宄旨在對瘦素信號在不同來源間充質干細胞中的具體作用方式及靶點進行探索為解釋兩種不同靶器官對于瘦素信號的應答提供依據。方法實驗一對瘦素缺失小鼠組OBOB瘦素受體缺失小鼠組DBDB正常野生型小鼠組WT重組瘦素恢復瘦素缺失小鼠瘦素信號組OBOB1印TIN進行骨形態(tài)學、成骨和破骨細胞功能、體內白色脂肪含量、攝食量的測定。確定瘦素信號缺失對于兩種器官組織生理功能的影響。實驗二以酶消化法和全骨髓法培養(yǎng)脂肪來源和骨髓來源的間充質干細胞MSCS經流式細胞術鑒定表面分子分組同前。MTT、克隆形成能力試驗CFUASSAY檢測細胞增殖能力成骨、成脂分化實驗檢測細胞相關分化能力。PCR與WESTERNBLOT檢測相關基因與蛋白水平的變化。實驗三對細胞體外進行PPARY信號與AMPK信號的激活觀察細胞成脂成骨能力的變化及相關基因和蛋白表達的變化。結果實驗一、MICROCT通過股骨遠端骨密度BMD、骨量組織量BVTV、骨小梁粗細TRTH、骨小梁數量TRN骨小梁間距TRS等骨形態(tài)學指標檢測提示OBOB小鼠均明顯高于WT小鼠且WT小鼠高于DBDB小鼠。HE染色、新骨形成率BFR、抗酒石酸酸性磷酸酶活性TRAP、血清成骨破骨標志物檢測提示相同趨勢。骨髓腔油紅0染色提示瘦素信號缺失IEP小鼠的骨髓腔內有較多脂滴形成。骨長度、皮質骨密度檢測提不IEP小鼠較WT小鼠有明顯的下降。IEP小鼠的體重和相關白色脂肪、攝食量均較WT小鼠有明顯的增加瘦素信號的恢復對體重的改變是明顯的。實驗二、分離的脂肪與骨髓來源的間充質干細胞經流式表面分子鑒定符合干細胞特征。MTT實驗、克隆形成能力提示瘦素信號的缺失方式不同會影響骨髓來源間充質干細胞BMSCS增殖能力克隆形成集落骨向分化能力實驗CFUO提示三種來源細胞無明顯差異而克隆形成集落脂向分化能力實驗CFUA顯示1印小鼠明顯強于WT小鼠。而脂肪來源間充質干細胞ADSCS方面增殖分化相關實驗結果提示I印來源的ADSCS增殖能力較強、成骨分化能力較弱而成脂分化能力較強。相關基因蛋白的結果與染色結果一致。重組瘦素可以恢復瘦素缺失的MSCS的生物學行為異常。實驗三PPARY激活劑羅格列酮可明顯增強WT來源ADSCS的脂向分化能力卻對瘦素信號缺失的ADSCS作用甚微AMPK激活劑二甲雙胍對不同來源的BMSCS增強成骨分化能力的作用一致。重組瘦素可扭轉羅格列酮對MSCS成脂分化過程影響的差異卻對二甲雙胍造成的成骨能力上升無明顯作用。結論1、瘦素信號通路的缺失對小鼠長骨的骨量有明顯的影響但瘦素缺失與其受體缺失所起的作用不完全相同提示除外周循環(huán)條件下瘦素的直接作用以外可能存在瘦素于中樞交感神經的信號對骨量存在作用且是主要作用的可能。且瘦素對發(fā)育期的骨形成有較為明顯的影響。瘦素對小鼠體內白色脂肪生成的刺激作用兩種不同的信號缺失方式較一致。2、OBOB小鼠的骨量上升是一種高成骨和高破骨的高轉換型骨量上升DBDB小鼠的骨質疏松是一種低成骨和低破骨共同作用的低轉換型骨質疏松。3、瘦素信號對BMSCS的增殖能力、成脂分化能力影響明顯而對成骨分化能力影響不大。瘦素信號對ADSCS的增殖、分化能力均具有明顯影響。4、瘦素信號可能通過抑制PPARY的活化來抑制ADSCS的成脂分化能力。而對BMSCS的成骨分化能力的影響應該在AMPK信號的上游。

簡介：南方醫(yī)科大學博士學位論文RNAI抑制G250基因以及對腎癌7860細胞生物學特性影響的實驗研究姓名趙俊峰申請學位級別博士專業(yè)泌尿外科指導教師鄭少斌20080421中文摘要隨著對G250的研究不斷深入以及其顯示出來的良好的腫瘤特異性，其在腎癌的診斷、篩選以及生物治療方面具有非常好的應用前景。比如G250單克隆抗體G250MAB可以直接攻擊表達G250蛋白的腎癌細胞，腎癌細胞表面的G250抗原可以增強抗體依賴的細胞介導的細胞毒反應ANTIBODYDEPENDENTCELLMEDIATEDCYTOTOXICITY，ADCC，利用核素標記的G250MAB進行腫瘤放射免疫顯像、放射免疫治療以及利用G250的特異性和免疫原性進行腫瘤疫苗的研究等。而最近的研究發(fā)現G250可能是一種癌基因，與腎癌的發(fā)生、發(fā)展有關，在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中具有不可忽視的作用，所以有必要對G250在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中的真正作用進一步認識，并在此基礎之上，開展腎癌診斷和治療方面的研究。RNA干擾技術是近年來發(fā)展起來的新的生物工程技術。人工誘導RNA干擾技術的建立，為基因功能研究和人類基因治療開辟了一個全新的領域，取得了令人振奮的研究成果。利用人工誘導RNA干擾技術使所研究的目的基因沉默從而進一步研究目的細胞的生物學特性及功能是目前分子生物學領域常用的實驗方法。應用該技術使G250基因沉默，觀察腎癌細胞生物學特性的變化，來研究G250基因對腎癌的發(fā)生、發(fā)展的影響，該方法簡便、易行，結果可靠，目前國內外尚無類似研究報道。本研究旨在探討能否在腎癌細胞系中利用人工誘導RNA干擾技術，抑制G250基因表達，通過體內、外試驗研究G250基因沉默對腎癌細胞系7860細胞生物學特性的影響，進而了解G250基因對腎癌的發(fā)生及發(fā)展的影響，為闡明腎癌的發(fā)生機制提供理論依據并為進一步探索腎癌的基因治療奠定基礎。方法第一章G250基因特異性SIRNA的設計、合成及表達載體的構建和鑒定利用NCBI的基因庫GCNEBANK及計算機輔助設計軟件設計4條內含不同G250基因特異性序列的寡核苷酸干擾片斷命名G250SIRNA1～G250SIRNA4，并設計另一條無意義序列命名G250SIRNAN作對照，寡核苷酸鏈退火后用T4DNA連接酶連接到線性化的PRNATU61／NEO載體中，構建成重組質粒載體H

簡介：分類號分類號R73R733737學校代碼學校代碼1039210392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼071010071010學號號2110101598110101598福建醫(yī)科大學碩士研究生畢業(yè)論文ATF3ATF3在腸癌細胞腸癌細胞HCT116HCT116中生物學生物學作用作用及蛋白酶體抑及蛋白酶體抑制劑制劑CARFILZOMIBCARFILZOMIB對ATF3ATF3的調節(jié)調節(jié)EFFECTOFACTIVATINGTRANIONFACT3ATF3ONTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFCOLONCANCERCELLHCT116ATF3ISUPREGULATEDUPONPROTEASOMEINHIBITCARFILZOMIB學位類型型科研型碩士科研型碩士所在學院院基礎醫(yī)學院基礎醫(yī)學院研究生生廖錦容廖錦容學科、?？啤I(yè)業(yè)生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學導師師葉韻斌葉韻斌教授教授研究起止日期研究起止日期2012年7月至月至2014年4月答辯日期期2014年5月日二○一四年五月一四年五月目錄英文縮略詞表3中文摘要中文摘要4ABSTRACTABSTRACT6前言9第一部分第一部分ATF3ATF3過表達對過表達對HCT116HCT116細胞增殖，腫瘤起始能力以及相關信號通路的細胞增殖，腫瘤起始能力以及相關信號通路的影響影響11材料與方法11結果23討論31小結34第二部分第二部分ATF3ATF3過表達對過表達對HCT116HCT116細胞轉移侵襲能力、細胞轉移侵襲能力、EMTEMT以及相關信號通路的影響以及相關信號通路的影響35材料與方法35結果38討論42小結44第三部分第三部分蛋白酶體抑制劑蛋白酶體抑制劑CARFILZOMIBCARFILZOMIB對ATF3ATF3的調節(jié)的調節(jié)45材料與方法45結果47討論51小結53結論54參考文獻參考文獻55致謝59綜述綜述60

簡介：單位代碼10475學號104753101236分類號R733碩士學位論文碩士學位論文CD133肺癌細胞的放射生物學特性研究學科、專業(yè)醫(yī)學院腫瘤學研究方向腫瘤放療申請學位類別醫(yī)學碩士申請人蔡迎春指導教師宋永平袁翎教授二〇一三年五月RADIOBIOLOGYACTERISTICSOFCD133POSITIVECELLSINHUMANLUNGCANCERADISSERTATIONSUBMITTEDTOTHEGRADUATESCHOOLOFHENANUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYCAIYINGCHUNSUPERVISPROFSONGYONGPINGYUANLINGDATEMAY2013

簡介：卵泡作為卵巢的功能單位，由卵母細胞及包裹于其周圍的顆粒細胞GRANULOSACELLS，GCS和外圍的膜細胞組成。卵泡生長發(fā)育是一個復雜而又精細調控的過程，期間卵母細胞逐步獲得發(fā)育潛能，為后續(xù)受精及胚胎發(fā)育做準備。卵泡發(fā)育過程中，隨著卵泡腔形成，顆粒細胞分化為兩種不同表型①壁顆粒細胞MURALGRANULOSECELLS，MGCS，位于卵泡腔周圍，主要功能為類固醇激素合成及促進卵泡壁破裂②卵丘細胞CUMULUSCELLS，CCS，與卵母細胞緊密聯系，兩者構成卵母細胞卵丘細胞復合體COC。卵母細胞和CCS之間通過縫隙鏈接和旁分泌信號通路相互交流，形成卵母細胞生長發(fā)育的微環(huán)境，并貫穿于整個卵泡發(fā)育過程。在竇前卵泡階段，卵泡生長不依賴于FSH的作用，主要通過GCS上表達KIT配體KITL，作用于卵母細胞上的受體KIT促進卵子生長反過來，卵子通過旁分泌因子OOCYTESECRETEFACTS，OSFS，主要為生長分化因子9GDF9和骨形態(tài)形成蛋白15BMP15，作用于CCS促進CCS增殖、抗凋亡。在竇卵泡階段，CCS通過縫隙連接向卵子傳遞CAMP和CGMP等小分子物質以維持卵母細胞減數分裂阻滯，同時其自身也受到OSFS的調節(jié)以拮抗FSH引起的黃素化作用在卵母細胞成熟階段，卵母細胞和CCS相互協(xié)調完成卵丘擴張及卵母細胞減數分裂恢復。此外，CCS為卵母細胞提供必須的代謝小分子如丙酮酸、丙氨酸和膽固醇以供卵母細胞生長發(fā)育，同時卵母細胞促進了CCS三大代謝相關酶的表達。卵母細胞卵丘細胞這些緊密的相互作用，提示卵母細胞成熟過程中在CCS上存在諸多印記，即CCS上的相關基因表達、分子和信號可以間接反應卵母細胞發(fā)育成熟的狀態(tài)。卵母細胞體外成熟技術IVM指將未成熟卵丘卵母細胞復合體GVCOCS從竇卵泡中取出，在特定的體外培養(yǎng)體系中培養(yǎng)成熟MⅡCOCS。IVM作為一項輔助生殖前沿技術，尤其適用于卵巢過度刺激綜合征OHSS患者及多囊卵巢綜合征PCOS患者。此外，近年來也有學者提出，在一些激素敏感性腫瘤患者治療前可應用IVM對其行生育力保存。但是大量的臨床數據表明，和體內成熟卵子相比，IVM后的卵子發(fā)育潛能低，因此，IVM尚未廣泛應用于臨床。探索IVM過程中卵丘細胞的狀態(tài)及相關基因表達有助于深入理解卵母細胞成熟機制并有望改進IVM培養(yǎng)體系。小鼠COC體外培養(yǎng)和IVM，是此類研究的最常用模型。近年來，隨著高通量技術的發(fā)展，檢測GCS或CCS上基因表達譜成為可能。已見研究應用基因芯片技術及QPCR技術嘗試分析CCS與卵母細胞質量相關的生物標記物也有研究應用基因芯片技術確定了不同培養(yǎng)條件下CCS上的基因表達譜差異。然而，鮮有關于IVM過程中CCS上基因表達譜變化的研究。因此，我們認為，基于卵母細胞和卵丘細胞之間的相互交流理論，IVM過程中CCS上的基因表達譜發(fā)生一系列的變化，通過高通量技術可以獲得表達譜的變化，可望從中篩選出某些因子作為生物標記物間接評價卵母細胞發(fā)育潛能。為了驗證以上科研假說，深入理解卵母細胞與CCS之間的相互交流及卵母細胞成熟的分子機制，本研究以小鼠IVM及IVF為模型，應用高通量技術研究CCS上基因表達譜特征，確定CCS上卵母細胞胞核及胞質發(fā)育潛能相關生物標記物，以期無創(chuàng)性評價卵母細胞質量。作為該研究的一部分，本文應用小鼠IVM模型通過基因芯片技術建立IVM前后CCS上基因表達譜的變化，進一步通過細胞內亞定位及定量分析的技術探討從差異表達譜篩選的某些與卵母細胞體外成熟相關生物標記物。材料與方法1小鼠IVM模型建立3周齡雌性ICR小鼠，予腹腔注射孕馬血清PMSG5U只常規(guī)促排卵，獲取未成熟卵丘卵母細胞復合體GVCOCS，參照國內外文獻建立小鼠IVM平臺。2CCS差異表達譜分別從GVCOCS和MⅡCOCS中剝取CCS，對應于GVCCS組和MⅡCCS組，每組包含3個混合CCS樣品（每個混合樣品含100枚COC）。分別提取總RNA，運用基因芯片技術獲得差異表達譜。3生物信息學分析確定差異表達基因、差異細胞功能和事件，并選擇某些候選研究基因。4基因芯片結果驗證根據芯片結果中的生物信息學分析結果，結合現有文獻報道，挑選出感興趣的目的基因，運用與芯片上樣時同樣的樣品行QPCR水平驗證。5差異基因的生物學意義在芯片結果驗證的基礎上，確定一些功能基因。擴大樣本量，每組8個樣品（每個樣品含30枚COCS），重新收集樣品，行QPCR驗證。6目的基因的蛋白水平表達差異分別從GVCOCS和MⅡCOCS中剝取CCS，通過WESTERNBLOT對以上確定的功能基因行蛋白水平的定量研究，免疫熒光方法進行細胞內定位的研究。7統(tǒng)計方法采用SPSS200統(tǒng)計軟件對數據進行分析。計數資料（MⅡ率）統(tǒng)計采用卡方檢驗計量資料（目的基因的蛋白表達和MRNA表達水平）以均數±標準差（MEANS±SD）表示，采用獨立樣本T檢驗進行分析。P＜005為差異有統(tǒng)計學意義。結果1在本中心成功復制小鼠IVM模型，獲得GVCOCS和IVM后的MⅡCOCS，其平均成熟率MⅡ％穩(wěn)定在926％。2通過基因芯片，獲得了IVM前后CCS上基因表達譜變化。按照FC≥30FOLDCHANGE，同時P≤005篩選標準進行差異表達基因分析。①MⅡ對GV上調基因有2615個，主要涉及基質金屬蛋白酶調節(jié)及表皮生長因子受體結合等功能②MⅡ對GV下調基因有2810個，主要涉及細胞核內相關生物學事件。3QPCR驗證芯片結果，發(fā)現IVM以后CCS上ECM和EFG相關基因（PTGS2EREGTNFAIP6，EFEMP1）以及線粒體代謝相關基因（FDX1，AIFM2）表達上調了縫隙鏈接及細胞周期相關基因GJA1，GJA4CCND2CCNA2CCNB2表達下調了。與芯片結果一致。4從以上目的基因中進一步篩選出功能基因（EFEMP1，FDX1，GJA1，CCND2），重新收集樣品進行生物學意義的驗證，與芯片結果一致。5篩選出4個因子（EFEMP1，FDX1，GJA1，CCND2）進行蛋白定量研究，發(fā)現與MRNA水平的變化一致。細胞內定位研究發(fā)現①EFEMP1主要定位CCS的胞質中，在GVCOC中僅表達在表層CCS上，內層CCS不表達，且在GV期卵子中不表達經過IVM后，EFEMP1表達在全層CCS上，且MⅡ其卵母細胞中高表達②FDX1也主要定位于CCS胞質中，在GVCOC中內外層CCS均有FDX1的表達，且GV期卵母細胞中也有表達IVM后表達陽性的CCS數目明顯增多③GJA1只表達在CCS胞質中，不表達與胞核中，在GVCOC中，GJA1在各層CCS中均有表達IVM后陽性細胞數目明顯減少。且在GV期和MⅡ期卵母細胞內，GJA1均不表達④CCND2主要表達在CCS的胞核中，胞質中少量表達，在GVCOC中，其主要表達在內層CCS中IVM以后這種表達極性消失，且熒光強度明顯減弱。結論1研究生期間掌握了小鼠卵母細胞顯微鏡下操作技術，在本中心成功復制IVM模型并應用于課題研究中。2IVM過程中，隨著卵母細胞成熟，CCS上的基因表達譜發(fā)生一系列變化。IVM以后CCS上金屬蛋白酶調節(jié)及表皮生長因子受體結合相關的基因表達上調了，細胞核相關的基因表達下調了?；蛐酒Y果利用QPCR技術進行了驗證。3通過擴大樣本量驗證，表明功能基因（EFEMP1，FDX1，GJA1，CCND2）在IVM過程中差異表達，具有重要的生物學意義。4IVM過程中，隨之卵母細胞成熟的進程CCS一些上調的因子EFEMP1和FDX1和下調因子（GJA1和CCND2）可望作為卵母細胞成熟及質量相關的生物標記物，也可能發(fā)展成為改進IVM培養(yǎng)液的靶因子。

簡介：碩士學位論文MIR155抑制物對骨肉瘤細胞系抑制物對骨肉瘤細胞系SOSP9607細胞生物學特性的影響細胞生物學特性的影響張開亮培養(yǎng)類別全日制學位類型學術學位一級學科專業(yè)類臨床醫(yī)學二級學科專業(yè)外科學（骨外）研究方向骨腫瘤基礎研究指導教師馬保安教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位唐都醫(yī)院骨科二O一四年五月第四軍醫(yī)大學THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY分類號R7337UDC616006密級公開第四軍醫(yī)大學碩士學位論文目錄縮略語表1中文摘要2英文摘要5前言8文獻回顧101MIRNA102骨肉瘤133MIRNA15518正文25實驗一MIR155抑制物對SOSP9607細胞增殖能力的影響251材料252方法263結果284討論30實驗二MIR155抑制物對SOSP9607細胞侵襲和遷移能力的影響341材料342方法353結果374討論38實驗三MIR155抑制物對SOSP9607細胞周期的影響421材料422方法433結果44

簡介：第三軍醫(yī)大學博士學位論文ANNEXINⅡ基因在肺癌組織中的表達分析及其反義表達載體對肺癌細胞生物學效應的研究姓名賈晉偉申請學位級別博士專業(yè)內科學（呼吸系?。┲笇Ы處熷X桂生20030501第三軍醫(yī)大學|尊士學位論文SDSSEC強SSODIUMDODECYLSULFATESECONDTRISHYDROXYMETHYLAMINOMETNANE2十二烷基磺酸鈉秒三羥甲基氨基甲烷

簡介：東南大學碩士學位論文低劑量脈沖超聲波對培養(yǎng)細胞的生物學效應研究姓名孔璐申請學位級別碩士專業(yè)勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生指導教師趙進順20030610二、低劑最脈沖超聲波刺激體外培養(yǎng)細胞凋亡情況的研究1最裁|雖球掙愁聲渡翊激對久瘦款裁紓維綴麓鞲亡麓誘導锃鞠※JHANNEXINV法測定低卉U量脈沖超聲波刺激對人皮膚成纖維細胞凋亡的漪導作川。研究結果顯示，低劑餐脈沖超聲波劃激人皮膚成纖維細胞超過～定時間厲，少量細腿開始啦現凋亡，且隨著裁激時滴的逶～步延長，蠲亡細髓激逐漸增多，萁髑亡；擎度也逐灝蕊重。其中麓聲波稍激時間為60MIN、80MIN和100MIN劑齬婀的細胞凋亡數與對JC組比較萍昴有統(tǒng)計學意義O001。2低劑量脈沖超聲波荊激對A胰腺癌細胞凋I的誘導作用采H1ANNEXINV法測定低劑量脈沖超聲波刺激列人胰腺癌細胞凋亡的誘導作用。實驗綹糶顯示，繇粼鼙辣猙超聲波蟋激瓣癬繅貔超遮一定瓣閏螽，糖癌繃魅開始瀣璦凝亡，量蓬羲刺激對問的繼續(xù)延長，細胞凋亡數逐漸增多。其中超聲波刺激時間為60MIN、80MIN和100MIN制鼙組的細胞塌亡數與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義DO01?；壑?，在較短時間靜捌激F，該種超毒液能；J怒綱瑰滔魏、綱齄數蘩及緇穩(wěn)所分泌瀚活性奔質等鼴蔣性增加，以及細胞內蛋向磷酸化水平顯著性升高，避而促進細胞或細胞外基質的增殖。薅另～方囂，一里超聲波刺激超過60MIN辱，則又％逐漸G越凋亡纓黧數量的域拍，麗慰此凋亡效應在正常細胞與腫瘤細胞之間的差異不具顯著性。進而提示我們設想，能否通過超聲波的局部定位來刺激腫瘤細胞，化其不利的生物學效應為有利網素，從而達到腫瘤治療的效果。敞此，只要控裁妻亍捌滋祭紛，低潮量弦瀋趣聲波戇瓣令不羈躲綢癱生勃學鼓應罄霹為天炎薪蠲。關鍵詞低荊餐脈沖超聲波；生物學效應；細胞增髓；細胞捅亡STUDYOFTHEBIOLOGICALEFFECTSOFLOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDOILTHECULTUREDCELLABSTRACTKONGLUTUTORZHAOJINSHUNPROFESSORTHESCHOOLOFPUBLICHEALTH，SOUTHEASTUNIVERSITYO秘EET嬸EULTRASOUNDISAPHYSICALFACTORITISUSED濂MANYFIELDS，FOREXAMPLEINDASTF韓MEDICALSCIENCEANDDAILYLIFEETCTHEAIMOFTHISSTUDYISTOSTUDYTHEBIOLOGICALERIECTSOFLOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDFREQUENCY15MHZPULSEDBY1KHZ，SIGNALBUMTWIDTH200MICROSECONDS，INTENSITY30MW／CM‘ONTHECULTUREDCELLINVITROMETHODSFIBROBLASTSFROMHUMANSKINAREPRIMARILYCULTUREDANDSABEULTUREDMIAPACA一2CELLSTHEHUMANPANCREATICADENOCARCINOMACELLAREKINDLYPROVIDEDBVPD盼ROLANDSCHMID，DEPARTMENTOFLMEMALMEDIEINEL，UNIVERSITYOFULMCELLSAREHARVESTEDFROMTHEFLASKSANDSUSPENDEDWITHAFINALCONCENTRATIONOF擴CELLS訊L1INMEDIUMCONTAININGLO％HEATINACTIVATEDFETALCALFSEMMFCSPENICILLIN100U／MLLANDSTREPTOMYCIN≤50G婦￡，THELLSEEDEDIN6一WELLCELJCULTUREPLATE≤2ML／WELLAT18SL，THEYARECULTUREDAT37℃INAHUMIDIFIEDATMOSPHEREWITH5％C02ATIER48HOURSINCUBATION，LOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDISAPPLIEDTOSTIMULATETHECELLSWHICHARECULTUREDINDM囂MWITHDIFIERENCECONCENTRATIONFCSFORTHECOMMITTEDTIME。CELTSASCONTRASTGROUPARESHAMTREATEDTHELLTHEBIOLOGICALEFFECTSOFLOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDONTHE11

簡介：中山大學碩士學位論文人免疫缺陷病毒調升基因AEG1促腫瘤細胞增殖的生物學作用與分子機制研究姓名楊樂申請學位級別碩士專業(yè)微生物學指導教師黎孟楓20090525中I山大學碩士論文人免疫缺陷病毒調升基因AEG1促腫瘤細胞增羅II的生物學作用與分子機制研究腺癌的關鍵。目前的研究表明乳腺癌的發(fā)生受基因與環(huán)境兩大因素的影響，但對其發(fā)病的具體的分子機制卻知之甚少，乳腺癌的預后的判斷仍然依賴于一些常規(guī)的臨床與影像學指標，例如，腫瘤的大小，病理分級，有無淋巴結轉移等。至今為止，已有許多基因被認為足與乳腺癌轉移和或預后有關的標記物，但仍缺乏獨立、有效的乳腺癌診斷指標和與預后相關的分子標記物。因此，闡述乳腺癌發(fā)牛、發(fā)展的分子機制，尋找特異性診斷和治療靶標是目前乳腺癌基礎研究的重點。本文旨在研究AEGL基因對乳腺癌細胞增殖的影響，并探討其在入乳腺癌細胞中的作用機理。首先，本文做免疫組化檢測乳腺癌組織中AEG一1與KI67的臨床相關性。隨后建立了兩株穩(wěn)定外源性高表達AEGL和兩株下調細胞內源性AEG一1表達的乳腺癌細胞系，用于檢測AEG1與乳腺癌細胞增殖的相關性。本文的數據顯示，上調AEG1的表達能夠明顯促進乳腺癌細胞的增殖和其非錨定依賴性牛長的能力，反之下調內源性AEG1的表達則可明顯抑制乳腺癌細胞的生長。因此，AEG1可能足促進乳腺癌細胞異常增生的重要分子。通過對AEG1促增殖機制的研究，本文發(fā)現乳腺癌細胞增殖加快與細胞周期抑制物P27KIPL5陽P21CI01P有關，進而證明了AEG1是通過P13K／AKT信號轉導通路下調FOXOL的表達促進乳腺癌細胞增殖的。本文的發(fā)現首次闡述了AEGL促進乳腺癌細胞增殖的分子機制，提示AEGL基因在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)腱過程中起重要作用，可能成為有價值的腫瘤分子治療的潛在靶點。關鍵詞AEG1乳腺癌增殖

簡介：中山大學博士后學位論文肝細胞生長因子在牙髓中的表達及生物學作用姓名葉玲申請學位級別博士后專業(yè)臨床醫(yī)學口腔醫(yī)學指導教師凌均棨20051101中山大學博士后研究工作報告中文摘要肝細胞生長因子HEPATOCYTEGROWTHFACTORHGF是一種間充質來源的多效性細胞因子，通過與其跨膜受體CMET結合對多種組織器官的生長發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織修復再生具有重要的生理調節(jié)功能。HGF已被發(fā)現對肝細胞、上皮細胞、平滑肌細胞等具有顯著的促細胞分裂、運動作用，此外還在血管生成、上皮間充質細胞相互間作用中有重要的地位。牙髓組織作為一種外胚間充質來源的組織，其損傷的修復源于牙髓組織中的間充質細胞的分化能力和組織的修復能力，本課題首次對肝細胞生長因子在牙髓修復中的作用進行研究，初步闡明了HGF在牙髓修復中的作用機制。本研究采用了免疫組織化學方法和分子生物學方法，利用體外細胞培養(yǎng)技術，對肝細胞生長因子及其受體在正常牙髓組織和細胞中的表達情況進行了研究采用動物模型研究HGF在修復性牙本質形成過程中的表達情況；此外還對HGF對體外培養(yǎng)的人牙髓細胞的生物學作用進行了系統(tǒng)研究，探討其對牙髓細胞生長、分化的影響，并對ERK／MAPK信號通路在其中的作用進行了初步研究。本實驗擬通過系統(tǒng)的實驗研究，對肝細胞生長因子在牙髓修復中的作用機制進行研究，也為牙髓病變的早期修復尋找新的生物學途徑。本實驗共分為四個部分第一部分肝細胞生長因子在牙髓中的表達。采用免疫組化、細胞培養(yǎng)和分子生物學方法研究肝細胞生長因子及其受體在正常牙髓組織、牙髓細胞中的表達情況發(fā)現體外培養(yǎng)的牙髓細胞可檢測出HGFMRNA及CMETMRNA的表達，HGF在體外培養(yǎng)的牙髓細胞中胞漿呈陽性表達，胞核陰性表達；在健康離體牙的牙髓組織中成牙本質細胞層和血管內皮細胞胞漿均呈弱陽性表達。第二部分肝細胞生長因子在大鼠修復性牙本質中的表達。采用動物模型和免疫組化，研究肝細胞生長因子在大鼠牙髓修復過程中的表達。實驗結果表明修復性牙本質形初期3D，肝細胞生長因子在大鼠牙髓細胞及成牙本質細胞胞漿中呈強陽性表達，積分光密度值為8995士0943；損傷后15D表達呈陽性5624土0951，但逐漸減弱，30D4073士0127和正常對照組大鼠牙髓細胞及成牙本質細胞胞漿中呈弱陽性表達427910348。說明HGF參與了牙髓損傷早期修復及修復性牙本質形成的過程。2

簡介：南方醫(yī)科大學2012級碩士學位論文低氧對人牙髓干細胞生物學特性的影響THEEFFECTOFHYPOXIAONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANDENTALPULPSTEMCELLS課題來源國家自然科學基金81371137學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院劉慶娜吳補領教授口腔臨床醫(yī)學學術型碩士研究生第一臨床醫(yī)學院答辯委員會主席凌均柴教授答辯委員會委員黃世光教授林正梅教授韋曦教授段建民教授2015年5月14日廣州摘要復中的作用及牙組織再生的研究提供重要理論參考。目前有關低氧環(huán)境下人牙髓干細胞生物學特性的研究較少，且現有研究結果存在較多差異。本實驗旨在研究探討低氧對人牙髓干細胞的增殖、遷移、成牙本質向分化及促血管生成特性的影響，為進一步闡明人牙髓干細胞在牙髓損傷修復及再生機制中的作用提供重要依據。本論文主要包括以下四章內容第一章人牙髓干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定本章實驗利用組織塊酶消化法分離培養(yǎng)人牙髓干細胞；流式細胞術檢測細胞表面分子標記物；克隆形成實驗檢測細胞克隆形成能力；多向誘導實驗檢測細胞多向分化潛能。第二章低氧對人牙髓干細胞增殖、遷移的影響實驗分別采用低氧3％02和常氧21％02培養(yǎng)人牙髓干細胞；流式細胞術檢測低氧培養(yǎng)對人牙髓干細胞表面分子標記物、細胞周期分布及凋亡的影響；MTT法檢測低氧對人牙髓干細胞增殖能力的影響；TRANSWELL實驗檢測低氧對人牙髓干細胞遷移能力的影響。第三章低氧對人牙髓干細胞成牙本質向分化的影響QRZPCR檢測低氧組和常氧組人牙髓干細胞礦化誘導7D、14D、21D后，成牙本質向分化相關基因ALP、DMP1、DSPPMRNA的表達情況。第四章低氧對人牙髓干細胞表達成血管相關因子的影響QRTPCR檢測對比低氧組和常氧組人牙髓干細胞成血管相關因子VEGF、SDF1MRNA的表達情況，并分別收集低氧組和常氧組人牙髓干細胞24H、48H、72H的培養(yǎng)上清作ELISA檢測，比較VEGF在蛋白水平分泌量的變化。Ⅱ