簡介：破骨細(xì)胞來源于骨髓單核巨噬細(xì)胞系，多種細(xì)胞因子、激素和轉(zhuǎn)錄因子等通過調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分泌的破骨細(xì)胞分化因子RANKL、護(hù)骨素OPG和巨噬細(xì)胞集落刺激因子MCSF的水平間接調(diào)控破骨細(xì)胞的分化和骨吸收活性。此外，降鈣素、雌激素和成纖維細(xì)胞生長因子FGFS等還直接作用于破骨細(xì)胞，通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路分子的活性來直接調(diào)控破骨細(xì)胞的分化成熟和骨吸收活性。FGFS是體內(nèi)重要的信號調(diào)節(jié)分子，己發(fā)現(xiàn)多種FGFSFGF2、FGF9、FGF18和FGF23可調(diào)控破骨細(xì)胞的分化和骨吸收功能。FGFS屬于分泌型蛋白分子，生物學(xué)效應(yīng)需通過細(xì)胞膜上的成纖維生長因子受體FGFRS來實現(xiàn)，提示FGFRS參與了破骨細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。FGFR1是破骨細(xì)胞表達(dá)的主要FGFRS，成熟破骨細(xì)胞受FGF2刺激后，出現(xiàn)FGFR1的磷酸化水平上調(diào)，提示FGFR1在破骨細(xì)胞功能的直接調(diào)控中發(fā)揮重要作用，但缺乏直接證據(jù)。同時，F(xiàn)GFR1在成骨細(xì)胞中亦大量表達(dá)，已發(fā)現(xiàn)在早期成骨細(xì)胞條件性敲除FGFRL用COLLGENICRE后會影響破骨細(xì)胞的分化和活性，提示FGFR1在破骨細(xì)胞功能的間接調(diào)控中也發(fā)揮重要作用，但其分子機(jī)制目前尚不清楚。此外，成骨細(xì)胞調(diào)控破骨細(xì)胞的能力受其分化程度影響，成年期間骨骼的成骨細(xì)胞以成熟的成骨細(xì)胞、特別是骨細(xì)胞為主，目前不清楚在成熟成骨細(xì)胞表達(dá)的FGFR1是否對破骨細(xì)胞的功能產(chǎn)生影響。本課題利用在破骨譜系細(xì)胞和成熟成骨細(xì)胞條件性敲除FGFRL的小鼠模型并結(jié)合體內(nèi)外實驗，探討FGFR1對破骨細(xì)胞的直接、間接調(diào)節(jié)作用及分子機(jī)制。主要內(nèi)容包括兩部分1通過體內(nèi)、外實驗探討FGFR1對破骨細(xì)胞的直接調(diào)控作用及機(jī)制；2通過體外實驗探討FGFR1對破骨細(xì)胞的間接調(diào)控作用及機(jī)制。主要實驗內(nèi)容及方法如下第一部分FGFR1對破骨細(xì)胞的直接調(diào)控作用及機(jī)制研究動物分組破骨譜系細(xì)胞條件性FGFRL敲除小鼠LYZSCRE；FGFRLFF；對照小鼠FGFRLFF。1體內(nèi)實驗1通過X線攝像、藏紅固綠SOFG染色，分別在整體水平和組織水平觀察4月齡敲除小鼠和對照小鼠脛骨骨重建差異；通過抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色檢測骨重建過程中破骨細(xì)胞功能的變化。2利用4月齡敲除小鼠和對照小鼠建立脛骨不穩(wěn)定骨折模型，通過骨痂組織X線攝像、SOFG染色，分別在整體水平和組織水平觀察敲除小鼠和對照小鼠骨折愈合差異；通過TRAP染色觀察骨折愈合過程中破骨細(xì)胞功能的變化。2體外實驗1分離6W齡敲除小鼠和對照小鼠的骨髓單核細(xì)胞，利用RANKL和MCSF進(jìn)行破骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化和骨吸收實驗。通過破骨細(xì)胞TRAP染色計數(shù)和骨吸收陷窩面積統(tǒng)計來觀察破骨細(xì)胞的分化和骨吸收活性。2提取誘導(dǎo)培養(yǎng)8D的破骨細(xì)胞總RNA和總蛋白，采用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT技術(shù)，檢測破骨細(xì)胞功能分子TRAP、CTSK和MMP9的表達(dá)水平及MAPK信號通路分子P38、ERK和JNK活化水平。第二部分FGFR1對破骨細(xì)胞的間接調(diào)控作用及機(jī)制研究動物分組成熟成骨細(xì)胞條件性敲除小鼠OCCRE；FGFRLFF；對照小鼠FGFRLFF。1成骨細(xì)胞增生凋亡檢測利用新生敲除小鼠和對照小鼠的頭蓋骨分離成骨細(xì)胞，采用計數(shù)法繪制成骨細(xì)胞生長曲線，利用TUNEL法檢測成骨細(xì)胞凋亡。2成骨細(xì)胞中與破骨細(xì)胞功能相關(guān)分子檢測提取培養(yǎng)第3代成骨細(xì)胞總RNA和總蛋白，利用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT檢測成骨細(xì)胞中RANKL、OPG和MCSF的表達(dá)及MAPK信號通路的活化水平。3共培養(yǎng)實驗培養(yǎng)第3代敲除FGFRL的成骨細(xì)胞和對照成骨細(xì)胞分別與野生小鼠骨髓單核細(xì)胞接種于同一培養(yǎng)皿中建立共培養(yǎng)模型。通過對共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞TRAP染色計數(shù)和骨吸收陷窩面積統(tǒng)計來觀察共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞的分化和骨吸收活性。主要實驗結(jié)果一、FGFR1通過上調(diào)破骨細(xì)胞中ERK激酶的活性來促進(jìn)破骨細(xì)胞的的分化及骨吸收活性14月齡敲除小鼠和對照小鼠脛骨骨組織形態(tài)無明顯差異，骨小梁破骨細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)無明顯變化。骨折修復(fù)觀察則顯示骨折10D，敲除小鼠和對照小鼠骨折愈合未見明顯差異。骨折愈合中后期14D、21D和28D，敲除小鼠的骨痂X線密度偏低，軟骨痂降解速度慢，骨折線消失遲緩，破骨細(xì)胞數(shù)量與鋪展面積亦明顯低于對照小鼠P＜005。提示，F(xiàn)GFR1不影響4月齡小鼠骨重建過程中破骨細(xì)胞的功能；但破骨譜系細(xì)胞條件性敲除FGFRL小鼠的骨折愈合延遲，愈合中后期破骨細(xì)胞的分化和活性均受抑制。2敲除小鼠骨髓單核細(xì)胞體外RANKLMCSF直接誘導(dǎo)形成的破骨細(xì)胞數(shù)量顯著減少P＜005，骨片上破骨細(xì)胞鋪展不佳，吸收陷窩面積明顯減小P＜005。分子檢測發(fā)現(xiàn)，敲除FGFRL的破骨細(xì)胞中TRAP和MMP9的表達(dá)顯著下調(diào)P＜005，MAPK信號通路成員ERK激酶的活化水平明顯下降P＜005。提示，F(xiàn)GFR1可能通過上調(diào)破骨細(xì)胞中ERK激酶的活性及破骨細(xì)胞功能分子TRAP和MMP9的表達(dá)來促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化及骨吸收活性。二、FGFR1通過上調(diào)成骨細(xì)胞中MCSF、下調(diào)OPG的表達(dá)來促進(jìn)共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞的分化和骨吸收功能敲除FGFRL的成骨細(xì)胞增生和凋亡明顯加快P＜005，成骨細(xì)胞中ERK和P38激酶的活性及MCSF的表達(dá)化顯著下降P＜005，OPG表達(dá)則明顯上調(diào)P＜005。在敲除FGFRL的成骨細(xì)胞與野生小鼠骨髓單核細(xì)胞建立的共培養(yǎng)體系中，破骨細(xì)胞的數(shù)量及骨吸收陷窩面積均明顯小于對照P＜005。上述結(jié)果提示FGFR1抑制成骨細(xì)胞的增生凋亡，上調(diào)成骨細(xì)胞中P38與ERK的活性及MCSF的表達(dá)，抑制成骨細(xì)胞中OPG的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞的分化與骨吸收活性。主要結(jié)論14月齡破骨譜系細(xì)胞條件性敲除FGFRL小鼠骨重建過程中破骨細(xì)胞功能無明顯變化；但FGFR1促進(jìn)小鼠骨修復(fù)過程中破骨細(xì)胞的分化與骨吸收活性。2FGFR1通過上調(diào)破骨細(xì)胞中ERK激酶的活性及破骨細(xì)胞功能分子TRAP和MMP9的表達(dá)來促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化及骨吸收活性。3FGFR1抑制成骨細(xì)胞的增生凋亡，上調(diào)成骨細(xì)胞中P38與ERK激酶的活性及MCSF的表達(dá)，抑制成骨細(xì)胞OPG的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞的分化與骨吸收活性。

簡介：目的通過對26例腰椎峽部不連患者的手術(shù)及系統(tǒng)隨訪，探討椎弓根釘、椎板鉤加峽部植骨內(nèi)固定術(shù)（PEDICLESCREWLAMINAHOOKPSLH）。治療腰椎峽部不連的手術(shù)方式及療效，作為腰椎峽部不連手術(shù)方法選擇的參考。方法回顧2009年12月2011年12月手術(shù)治療的腰椎峽部不連26例，并進(jìn)行了2～24個月平均102個月的隨訪。26例均行椎弓根釘、椎板鉤加峽部植骨手術(shù)治療，對其臨床特征、術(shù)前術(shù)后的療效進(jìn)行評定總結(jié)。按照日本整形外科學(xué)會（JOA）的下腰痛評分標(biāo)準(zhǔn)評分、VAS評分以及影像學(xué)檢查，進(jìn)行手術(shù)前后的比較，所有資料均應(yīng)用SPSS170軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果26例隨訪2個月至2年，平均102個月，在手術(shù)過程中均未出現(xiàn)明顯并發(fā)癥。術(shù)前及術(shù)后隨訪VAS評分分別為630±124和191±083，JOA評分術(shù)后較術(shù)前明顯改善，經(jīng)T檢驗差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義P結(jié)論椎弓根釘、椎板鉤加峽部植骨術(shù)是符合脊柱生物力學(xué)要求的脊柱單節(jié)段內(nèi)固定術(shù)式，強(qiáng)度可靠，在不破壞椎體正常的解剖關(guān)系情況下，維持了脊柱的生物力學(xué)的穩(wěn)定性，保留了脊柱良好的活動性，且避免了相鄰節(jié)段的繼發(fā)性退行性變的可能。手術(shù)操作相對簡單且創(chuàng)傷較小，是一種操作簡單、有效的手術(shù)方式，尤其對于青少年患者來說是一種十分科學(xué)和合理的手術(shù)方式。

簡介：線粒體作為細(xì)胞能量代謝的核心，其結(jié)構(gòu)和功能的改變與胰島素抵抗的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。然而，線粒體缺陷是胰島素抵抗的原因，結(jié)果，還是其中的一個伴隨過程，目前仍有爭議。事實上，最早的關(guān)于線粒體功能與糖尿病之間相關(guān)性的研究是VANDENOUWELJM等于1992年發(fā)現(xiàn)的線粒體DNA突變可導(dǎo)致母系遺傳性糖尿病。目前，關(guān)于二者相關(guān)性的眾多研究更傾向于線粒體功能的缺陷是繼發(fā)于胰島素抵抗而發(fā)生的，而非其始動因素。但是隨著線粒體氧化及磷酸化能力的下降，胰島素抵抗的程度也隨之增加，因此可以推斷線粒體功能的缺陷是加劇胰島素抵抗的原因之一。線粒體融合蛋白2（MITOFUSIN2，MFN2）是位于線粒體外膜上的一種跨膜蛋白，它促進(jìn)了線粒體的融合，并且參與了線粒體代謝的調(diào)節(jié)。其表達(dá)具有組織特異性，在骨骼肌、心肌及大腦等高能量代謝組織中高表達(dá)。近期的研究提示MFN2在葡萄糖穩(wěn)態(tài)的維持中起到了重要的作用，此外，MFN2表達(dá)的缺陷可能是胰島素抵抗發(fā)生的潛在病理生理機(jī)制之一。研究發(fā)現(xiàn)，在MFN2SHRNABALBC小鼠中，早期即出現(xiàn)胰島素抵抗，同時伴有肝葡萄糖生成增加。SEBASTIAND等發(fā)現(xiàn)MFN2缺失可引起線粒體功能障礙，活性氧簇REACTIVEOXYGENSPECIES，ROS生成增加，CJUN氨基末端激酶CJUNNTERMINALKINASE，JNK活性增強(qiáng)，而胰島素信號通路的關(guān)鍵分子胰島素受體底物1（INSULINRECEPTSUBSTRATE1，IRS1）失活。骨骼肌細(xì)胞中MFN2功能的獲取增加了葡萄糖氧化率及線粒體膜電位，而線粒體膜電位的增加說明線粒體丙酮酸氧化作用的增強(qiáng)及三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化的增強(qiáng)。最近，有學(xué)者提出在非糖尿病及糖尿病個體中MFN2表達(dá)與胰島素敏感性之間存在著正相關(guān)關(guān)系。無論是在健康個體還是在2型糖尿病患者中，骨骼肌對葡萄糖的攝取和利用在全身葡萄糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)中都發(fā)揮了重要的作用。葡萄糖的攝取是葡萄糖代謝過程中的主要限速步驟，在骨骼肌中這一過程主要由葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4GLUCOSETRANSPTER4，GLUT4完成。GLUT4是葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白家族GLUTS中的一員，主要存在于骨骼肌和脂肪組織中。GLUT4表達(dá)減少或轉(zhuǎn)位障礙直接導(dǎo)致骨骼肌對葡萄糖的攝取障礙，最終導(dǎo)致高血糖。GLUT4的轉(zhuǎn)運主要是通過兩個獨立的信號途徑完成，一為胰島素依賴的信號途徑（PI3KAKT途徑），另一條為非胰島素依賴的信號途徑AMPK途徑。研究發(fā)現(xiàn)全身葡萄糖的攝取與骨骼肌中GLUT4的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。GLUT4的表達(dá)可通過調(diào)節(jié)GLUT4啟動子區(qū)的肌細(xì)胞增強(qiáng)子2（MYOCYTEENHANCERFACT2，MEF2）來實現(xiàn)，其中組蛋白去乙?；窰ISTONEDEACETYLASES，HDACS、過氧化物酶體增生物激活受體Γ共激活因子1ΑPEROXISOMEPROLIFERATACTIVATEDRECEPTΓCOACTIVAT1ΑPGC1Α及P38均可通過MEF2來調(diào)節(jié)GLUT4的表達(dá)。SRIWIJITKAMOLA等報道在肥胖的胰島素抵抗大鼠中存在不同程度的AMPKPGC1Α信號通路的異常，并且認(rèn)為AMPK可能是通過PGC1Α誘導(dǎo)GLUT4蛋白表達(dá)。隨后LEICKL等證實了這一觀點，研究發(fā)現(xiàn)AICAR干預(yù)AMPK激動劑可誘導(dǎo)野生型小鼠GLUT4蛋白表達(dá)增加，而在PGC1Α敲除小鼠中無此改變，進(jìn)一步肯定了AMPKPGC1Α途徑在調(diào)節(jié)GLUT4表達(dá)中的重要作用。最近在一項關(guān)于糖尿病減肥手術(shù)的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，6名病態(tài)肥胖女性患者通過手術(shù)成功減重之后MFN2MRNA表達(dá)水平升高，同時伴有GLUT4MRNA表達(dá)上調(diào)及全身葡萄糖的攝取增加，并且MFN2MRNA與GLUT4MRNA表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系。然而MFN2在葡萄糖攝取方面的更深入的研究目前尚未見報道。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食喂養(yǎng)所致胰島素抵抗的大鼠模型中骨骼肌MFN2及GLUT4表達(dá)減低。國外亦有報道，在肥胖和2型糖尿病患者骨骼肌中同樣存在MFN2及GLUT4的表達(dá)減低，且兩者之間存在正相關(guān)關(guān)系。那么在整體動物模型中，MFN2過表達(dá)能否抗衡病理條件，改善大鼠胰島素抵抗呢本研究通過高脂飲食構(gòu)建大鼠胰島素抵抗模型，觀察MFN2腺病毒干預(yù)后對大鼠胰島素敏感性的變化及對骨骼肌GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運的影響通過腺病毒轉(zhuǎn)染L6肌細(xì)胞，在細(xì)胞實驗中進(jìn)一步驗證MFN2對GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運的影響，進(jìn)一步探討MFN2影響GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運的具體機(jī)制。本實驗內(nèi)容主要包括以下三部分第一部分MFN2對高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠骨骼肌GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運的影響目的MFN2過表達(dá)對高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性及骨骼肌GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運的影響方法40只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，正常對照組NC，N10、高脂飲食組HF，N10、高脂空病毒組HFADO，N10、高脂MFN2腺病毒組HFADMFN2，N10，NC組給予普通飼料喂養(yǎng)，HF組、HFADO組及HF組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周，實驗第8周末應(yīng)用清醒狀態(tài)下高胰島素正葡萄糖鉗夾實驗評價各組大鼠胰島素抵抗程度。實驗第9周開始，NC組、HF組、HFADO組及HFADMFN2組分別接受01ML生理鹽水、生理鹽水、ADO、ADMFN2經(jīng)尾靜脈注射，每周1次，共3周。病毒濃度為11010PFUML。實驗第11周末再次行高胰島素正葡萄糖鉗夾實驗評價各組大鼠胰島素抵抗程度。實驗結(jié)束前取血用于生化指標(biāo)的測定，之后處死各組大鼠，留取骨骼肌組織標(biāo)本于80℃低溫冰箱保存。實時熒光定量PCRREALTIMEPCR方法檢測骨骼肌MFN2及GLUT4MRNA的表達(dá)。WESTERNBLOT方法檢測骨骼肌MFN2、胰島素受體ΒIRΒ、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶BAKT、PAKT、腺苷酸活化蛋白激酶?。ˋMPKΑ）、PAMPKΑ及GLUT4蛋白的表達(dá)。結(jié)果1、大鼠空腹血糖、血清胰島素及游離脂肪酸的比較高脂飲食干預(yù)11周后，大鼠空腹血葡萄糖、胰島素及游離脂肪酸水平HF組、HFADO組明顯高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005HFADMFN2組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。HFADO組與HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005），HFADMFN2組明顯低于HF組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。2、大鼠葡萄糖輸注率GIR的比較高脂飲食喂養(yǎng)11周后，葡萄糖輸注率GIRHF組明顯低于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADMFN2干預(yù)后GIR明顯增加，HFADMFN2組較HF組增加了67％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，而HFADO組較HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。3、MFN2MRNA和蛋白表達(dá)變化的比較高脂飲食喂養(yǎng)11周后，HF組MFN2MRNA和蛋白水平表達(dá)明顯下降，分別為NC組的51％和44％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADMFN2干預(yù)后，HFADMFN2組MFN2MRNA和蛋白水平分別為HF組的34和33倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，而HFADO組較HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。4、GLUT4MRNA和蛋白表達(dá)變化的比較高脂飲食喂養(yǎng)11周后，HF組GLUT4MRNA和蛋白水平表達(dá)明顯下降，分別為NC組的56％和66％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADMFN2干預(yù)后，HFADMFN2組GLUT4MRNA和蛋白水平分別為HF組的149和131倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，而HFADO組較HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。5、ADMFN2干預(yù)對GLUT4轉(zhuǎn)位的影響與NC組相比，HF組骨骼肌組織中膜蛋白與總蛋白比值PMT明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005與HF組相比，ADMFN2干預(yù)后HFADMFN2組PMT比值為HF組的187倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）而這一比值在HFADO組和HF組中無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。6、ADMFN2誘導(dǎo)GLUT4轉(zhuǎn)位過程中AKT及AMPK信號通路蛋白表達(dá)的變化與NC組相比，HF組IRΒ、PI3K、PAKT和AKT蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005而在HF組、HFADO組和HFADMFN2組中上述指標(biāo)無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。與NC組相比，HF組PAMPKΑ蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005HFADO組與HF組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。ADMFN2顯著增加了AMPKΑ的磷酸化水平，HFADMFN2組PAMPKΑ蛋白表達(dá)水平為HF組的276倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，但總的AMPKΑ蛋白表達(dá)水平各組間無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。結(jié)論1、高脂飲食使大鼠空腹血糖、胰島素及游離脂肪酸水平升高，葡萄糖輸注率下降，導(dǎo)致胰島素抵抗，MFN2過表達(dá)可改善高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠胰島素抵抗。2、高脂飲食可使大鼠骨骼肌MFN2表達(dá)下降，MFN2過表達(dá)可使骨骼肌MFN2表達(dá)上調(diào)。3、高脂飲食可使大鼠骨骼肌GLUT4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位減少，MFN2過表達(dá)可使骨骼肌GLUT4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位上調(diào)。4、MFN2過表達(dá)在增加GLUT4轉(zhuǎn)位的同時，伴有AMPK磷酸化水平增加，而AKT磷酸化水平無明顯變化。MFN2過表達(dá)可能通過AMPK磷酸化增加的方式增加了GLUT4的轉(zhuǎn)位，從而改善了胰島素敏感性。第二部分MFN2對L6肌細(xì)胞GLUT4表達(dá)的影響目的通過腺病毒轉(zhuǎn)染SIMFN2及ADMFN2干預(yù)L6肌細(xì)胞，觀察L6肌細(xì)胞GLUT4蛋白的表達(dá)情況，明確MFN2表達(dá)對GLUT4蛋白表達(dá)的影響。方法將L6細(xì)胞接種于含10％FBS、100UML青霉素、100UGML鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37℃、5％CO2飽和培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，每23天傳代一次，待細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后將含10％FBS的培養(yǎng)基換成含2％FBS的培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞分化，共7天。分后成功后，實驗分為四組①正常對照組NCGROUP；②正常空病毒組ADOGROUP；③正常小干擾RNA病毒組SIMFN2GROUP；④正常MFN2腺病毒組ADMFN2GROUP。L6肌細(xì)胞分化成功后，換用含05％FBS的DMEM培養(yǎng)基，以100PFUCELL100MOI的濃度分別加入ADO、SIMFN2或ADMFN2轉(zhuǎn)染孵育24H，實驗結(jié)束前加入胰島素（終濃度為100NM）孵育10MIN，收集細(xì)胞用于實驗。應(yīng)用WESTERNBLOT方法檢測L6肌細(xì)胞MFN2、AMPKΑ、PAMPKΑ、PGC1Α及GLUT4蛋白的表達(dá)。結(jié)果1、SIMFN2及ADMFN2干預(yù)對MFN2蛋白表達(dá)影響的比較SIMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞MFN2蛋白水平明顯下降，SIMFN2組約為NC組的139％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。ADMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞MFN2蛋白表達(dá)水平明顯增加，ADMFN2組約為NC組的261倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。為排除病毒轉(zhuǎn)染對細(xì)胞的影響，以空病毒作為對照，ADO組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。ADMFN2組MFN2蛋白表達(dá)水平較SIMFN2組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。2、SIMFN2及ADMFN2干預(yù)對PAMPKΑ及AMPK蛋白表達(dá)影響的比較SIMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞PAMPKΑ蛋白水平明顯下降，SIMFN2組約為NC組的611％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞PAMPKΑ蛋白表達(dá)水平明顯增加，ADMFN2組約為NC組的149倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADO組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。ADMFN2組PAMPKΑ蛋白水平較SIMFN2組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。各組間AMPKΑ蛋白表達(dá)無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。3、SIMFN2及ADMFN2干預(yù)對PGC1Α蛋白表達(dá)影響的比較SIMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞PGC1Α蛋白水平明顯下降，SIMFN2組約為NC組的324％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞PGC1Α蛋白表達(dá)水平明顯增加，ADMFN2組約為NC組的195倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADO組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。ADMFN2組PGC1Α蛋白水平較SIMFN2組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。4、SIMFN2及ADMFN2干預(yù)對GLUT4蛋白表達(dá)影響的比較SIMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞GLUT4蛋白水平明顯下降，SIMFN2組約為NC組的545％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞GLUT4蛋白表達(dá)水平明顯增加，ADMFN2組約為NC組的162倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。ADO組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。ADMFN2組GLUT4蛋白水平較SIMFN2組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。結(jié)論在L6肌細(xì)胞中，上調(diào)MFN2表達(dá)可使AMPK磷酸化水平增加，PGC1Α蛋白表達(dá)增加，GLUT4蛋白表達(dá)增加下調(diào)MFN2表達(dá)后，隨著MFN2表達(dá)的下降，PAMPK、PGC1Α及GLUT4的表達(dá)均隨之出現(xiàn)下調(diào)。第三部分AMPK在MFN2誘導(dǎo)的GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)位中的作用目的通過ADMFN2腺病毒轉(zhuǎn)染干預(yù)L6肌細(xì)胞，并加入COMPOUNDC（AMPK抑制劑），觀察L6肌細(xì)胞中GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)位的變化，明確AMPK對GLUT4蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)位的影響。方法將L6細(xì)胞接種子含10％FBS、100UML青霉素、100UGML鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37℃、5％CO2飽和培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，每23天傳代一次，待細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后將含10％FBS的培養(yǎng)基換成含2％FBS的培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞分化，共7天。實驗分為四組①正常對照組NCGROUP；②正常MFN2腺病毒組ADMFN2GROUP；③正常COMPOUNDC組CCGROUP；④MFN2腺病毒COMPOUNDC組ADMFN2CCGROUP。L6肌細(xì)胞分化成功后，加入COMPOUNDC10UM孵育30MIN，然后以100PFUCELL100MOI的濃度加入ADMFN2轉(zhuǎn)染孵育24H，實驗結(jié)束前加入胰島素（終濃度為100NM）孵育10MIN，收集細(xì)胞用于實驗。應(yīng)用WESTERNBLOT方法檢測L6肌細(xì)胞MFN2、AMPKΑ、PAMPKΑ、AKT、PAKT、PGC1Α及GLUT4蛋白的表達(dá)。結(jié)果1、ADMFN2及COMPOUNDC干預(yù)對MFN2蛋白表達(dá)影響的比較ADMFN2干預(yù)24小時后，L6肌細(xì)胞MFN2蛋白表達(dá)水平明顯增加，ADMFN2組約為NC組的30倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。CC組較NC組略有降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。COMPOUNDC和ADMFN2共同干預(yù)后，ADMFN2CC組較NC組相比MFN2蛋白表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）但較ADMFN2組相比降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。2、ADMFN2及COMPOUNDC干預(yù)對PAMPKΑ及AMPK蛋白表達(dá)影響的比較ADMFN2干預(yù)24小時后，ADMFN2組較NC組相比PAMPKΑ蛋白表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。COMPOUNDC單獨干預(yù)及COMPOUNDC加ADMFN2共同干預(yù)后，CC組和ADMFN2CC組PAMPKΑ蛋白表達(dá)水平較NC組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）同樣低于ADMFN2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。而ADMFN2CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。各組間AMPKΑ蛋白表達(dá)無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。3、ADMFN2及COMPOUNDC干預(yù)對PAKT及AKT蛋白表達(dá)影響的比較各組間PAKT及AKT蛋白表達(dá)均無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。4、ADMFN2及COMPOUNDC干預(yù)對GLUT4轉(zhuǎn)位影響的比較ADMFN2干預(yù)24小時后，ADMFN2組較NC組相比GLUT4膜蛋白的表達(dá)水平明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。COMPOUNDC單獨干預(yù)及COMPOUNDC加ADMFN2共同干預(yù)后，CC組和ADMFN2CC組GLUT4膜蛋白表達(dá)水平較NC組降低，并且也低于ADMFN2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。而ADMFN2CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。ADMFN2干預(yù)24小時后，ADMFN2組較NC組相比GLUT4總蛋白的表達(dá)水平明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。COMPOUNDC單獨干預(yù)及COMPOUNDC加ADMFN2共同干預(yù)后，CC組和ADMFN2CC組GLUT4總蛋白表達(dá)較NC組降低，并且也低于ADMFN2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。而ADMFN2CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。GLUT4膜蛋白與總蛋白的比值各組間無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。5、ADMFN2及COMPOUNDC干預(yù)對PGC1Α蛋白表達(dá)影響的比較ADMFN2干預(yù)24小時后，ADMFN2組較NC組相比PGC1Α蛋白表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。COMPOUNDC單獨干預(yù)及COMPOUNDC加ADMFN2共同干預(yù)后，CC組和ADMFN2CC組PGC1Α蛋白表達(dá)水平較NC組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005同樣低于ADMFN2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。而ADMFN2CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。結(jié)論1ADMFN2腺病毒轉(zhuǎn)染L6肌細(xì)胞可上調(diào)細(xì)胞MFN2表達(dá)，加入AMPK抑制劑COMPOUNDC干預(yù)后，MFN2表達(dá)略有下降。2MFN2可增加AMPK磷酸化水平，應(yīng)用AMPK抑制劑COMPOUNDC干預(yù)后，此作用消失。3MFN2及COMPOUNDC均不影響AKT的磷酸化水平。4MFN2可上調(diào)GLUT4蛋白的表達(dá)，并且是通過AMPKPGC1Α途徑實現(xiàn)的。5MFN2對GLUT4的轉(zhuǎn)位不依賴于AMPK。

簡介：第一部分橫紋肌溶解癥的臨床病理研究目的探討橫紋肌溶解癥RM的病因、臨床病理特點及發(fā)病機(jī)制。方法對2003～2008年在該院等5家醫(yī)院住院治療的15例RM患者的臨床及病理資料進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果15例RM患者中多因素致病者10例單因素致病者5例。其中運動負(fù)荷8例飲酒2例CO中毒2例糖尿病2例中暑熱射病4例感染3例肢體受壓致局部缺血3例。出現(xiàn)肌肉疼痛者7例肌肉無力5例肌肉腫脹6例肌肉觸痛5例；發(fā)熱者9例血紅蛋白尿6例惡心、嘔吐6例出現(xiàn)精神癥狀明顯躁動不安1例意識障礙7例4例病人在1～6日內(nèi)出現(xiàn)少尿或無尿。所有病人均出現(xiàn)肌酸磷酸激酶CPK及肌紅蛋白MB升高除1例病人外均出現(xiàn)肌紅蛋白尿。6例肌肉活檢證實存在橫紋肌溶解。15例病人中有4例并發(fā)急性腎功能衰竭ARF2例出現(xiàn)多臟器功能衰竭M(jìn)SOF給予補液、利尿、堿化尿液并發(fā)ARF的病人行血液透析治療10例治愈4例好轉(zhuǎn)1例死亡。結(jié)論RM中以男性患者較多許多病因可引起RM和平時期以非創(chuàng)傷性RM為主常是多種因素共同作用的結(jié)果。臨床表現(xiàn)主要為肌肉疼痛、肌無力、肌肉腫脹、肌肉觸痛、肌紅蛋白尿部分病人可迅速出現(xiàn)意識障礙或精神癥狀?；颊逤PK明顯增高多伴有血肌紅蛋白升高及肌紅蛋白尿。肌肉病理可觀察到早期橫紋肌細(xì)胞壞死、溶解后期出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤。RM如果能及時診斷和正確治療大部分病人可獲康復(fù)但嚴(yán)重者可危及生命。第二部分酒精性橫紋肌溶解癥的實驗性研究目的建立酒精性橫紋肌溶解癥動物模型并探討其發(fā)病機(jī)制。方法采用WISTAR大鼠30只雄性體重200G左右其中實驗組酒精暴露短期食物剝奪10只酒精對照組酒精暴露但不進(jìn)行食物剝奪10只禁食對照組僅給予短期食物剝奪5只完全對照組不給予酒精暴露和食物剝奪5只。四組大鼠均給予普通飼料喂養(yǎng)每日投喂一次水自由飲用酒精組大鼠給予56％酒精灌胃第1周5MLKGD第24周10MLKGD并給予310％酒精自由飲用。實驗組于第四周給予食物剝奪3天禁食對照組大鼠第四周與實驗組同期給予食物剝奪。酒精對照組大鼠第四周未行食物剝奪。四組大鼠于第四周末取血查肌酸激酶CPK行前后肢肌肉病理檢查。對各組大鼠的肌酸激酶及肌肉病理進(jìn)行對照分析。結(jié)果實驗組大鼠肌酸激酶CPK在禁食期間迅速升高與酒精暴露而未禁食的大鼠酒精對照組及未酒精暴露而僅禁食的大鼠禁食對照組有顯著差異酒精對照組、禁食對照組及完全對照組大鼠的肌酸激酶無顯著差異。實驗組大鼠肌肉病理檢查顯示I型纖維受損。結(jié)論用酒精灌胃的方法在長期酒精暴露短期食物剝奪的條件下可以獲得酒精性橫紋肌溶解癥模型。乙醇可以通過多種途徑誘導(dǎo)肌纖維損傷。酒精誘導(dǎo)的急性橫紋肌溶解主要損害I型肌纖維。

簡介：點擊查看更多椎板切除減壓植骨融合內(nèi)固定術(shù)治療脊髓型頸椎病.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：隨著我國人口平均壽命的延長及中心城市的人口老齡化趨勢嚴(yán)重膝關(guān)節(jié)疾病的發(fā)病率在老齡人群中呈明顯的增加趨勢。人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)TKA已成功地為許多罹患嚴(yán)重的、晚期的膝關(guān)節(jié)傷病患者解除了病痛使他們恢復(fù)了正常生活提高了病人的生活質(zhì)量。人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)TKA已有100多年的歷史出現(xiàn)的時間最早、技術(shù)最為成熟、目前應(yīng)用得最為普遍其他如單髁置換術(shù)、人工髕股關(guān)節(jié)置換術(shù)尚未被人們廣泛接受手術(shù)適應(yīng)癥也比較狹窄。目前國內(nèi)外將人工全膝關(guān)節(jié)置換手術(shù)作為研究的重點繼續(xù)對膝關(guān)節(jié)的解剖學(xué)、生物力學(xué)、運動學(xué)展開深入而廣泛地研究以期進(jìn)一步完善假體、手術(shù)工具的設(shè)計及改進(jìn)手術(shù)操作技術(shù)獲得更為可靠和優(yōu)良的手術(shù)結(jié)果。目前臨床上廣泛應(yīng)用的人工膝關(guān)節(jié)假體系統(tǒng)均以歐美人的解剖特點研發(fā)設(shè)計。由于人種差異的原因有相當(dāng)數(shù)量的中國人在使用國外關(guān)節(jié)系統(tǒng)置換時發(fā)現(xiàn)存在假體不匹配的問題。在人工膝關(guān)節(jié)手術(shù)中經(jīng)常會遇到這樣的情況股骨假體型號大于脛骨假體；中國人股骨前髁低平后髁高大；術(shù)中前方過度填塞使前力距增加膝關(guān)節(jié)屈曲受限；術(shù)中后髁切骨過多使后力距減少伸屈間隙不等；膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后股骨髁前皮質(zhì)切除使假體周圍骨折、髁上骨折。在股骨側(cè)前后徑假體大小合適但切骨面匹配不理想的情況時常發(fā)生可能原因是中國人股骨遠(yuǎn)端的內(nèi)外徑個體差異大。這除了手術(shù)技術(shù)因素以外更主要的原因可能是根據(jù)西方人群解剖學(xué)特征設(shè)計的股骨假體與國人股骨遠(yuǎn)端截骨面在形態(tài)學(xué)上存在差異。對國人進(jìn)行TKA手術(shù)時采用根據(jù)西方人解剖特點設(shè)計的膝關(guān)節(jié)假體系統(tǒng)就有可能存在假體與截骨面不匹配等問題。為了了解中國人膝關(guān)節(jié)解剖特點減少術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生提高手術(shù)效果進(jìn)行了一定數(shù)量的尸體膝關(guān)節(jié)股骨截骨面的形態(tài)測量學(xué)研究和較大樣本量的人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)中股骨截骨面的形態(tài)測量學(xué)研究并且對術(shù)中測量結(jié)果和尸體測量結(jié)果進(jìn)行了分析為國人人工膝關(guān)節(jié)假體的設(shè)計提供了一定的數(shù)據(jù)參考。目的研究中國人膝關(guān)節(jié)股骨截骨面形態(tài)特點獲得股骨截骨面相關(guān)參數(shù)的數(shù)據(jù)分析中國人股骨截骨面的股骨前后徑、股骨內(nèi)外徑及股骨面率的內(nèi)在變化關(guān)系為建立國人膝關(guān)節(jié)數(shù)據(jù)庫提供參考。方法1選擇60例正常中國人新鮮尸體的膝關(guān)節(jié)及隨機(jī)選取90例長征骨科就診需進(jìn)行全膝關(guān)節(jié)置換的病人為研究對象；2將尸體測量和術(shù)中測量依照不同的身高各自分為三組151160CM161170CM171180CM尸體測量研究組各身高組別男女各10例共60例平均年齡為6225±1222歲平均身高為16442±839CM術(shù)中測量研究組各身高組別男女各15例共90例平均年齡為6577±979歲平均身高為16520±837CM；3尸體測量和術(shù)中測量均遵照全膝關(guān)節(jié)置換手術(shù)的方式和方法切骨獲取膝關(guān)節(jié)股骨遠(yuǎn)端的精確截骨面；使用游標(biāo)卡尺等精密量具對股骨截骨面的股骨前后徑和股骨內(nèi)外徑進(jìn)行精準(zhǔn)測量并準(zhǔn)確記錄數(shù)據(jù)；計算股骨面率；4數(shù)據(jù)結(jié)果均采用X±S表示采用SPSS130及SAS80軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析、方差分析以及T檢驗以P005為有顯著性差異；結(jié)果1尸體測量研究中股骨前后徑5821±754MM股骨內(nèi)外徑7127±712MM股骨面率12339±1213％；術(shù)中測量研究中股骨前后徑5796±683MM股骨內(nèi)外徑7048±672MM股骨面率12222±956％；2身高、性別和年齡對股骨前后徑、股骨內(nèi)外徑及股骨面率的影響多元回歸分析中顯示性別和年齡對上述參數(shù)均無影響而身高的變化對上述參數(shù)有影響有統(tǒng)計學(xué)意義；3對股骨左右徑、股骨前后徑和股骨面率進(jìn)行相關(guān)性檢驗中發(fā)現(xiàn)隨著股骨前后徑的增加股骨左右徑也相應(yīng)的增加而股骨面率則相應(yīng)的減??；4對尸體測量和術(shù)中測量結(jié)果的比較采用完全隨機(jī)方差分析檢驗發(fā)現(xiàn)尸體測量結(jié)果與術(shù)中測量結(jié)果相同相互印證。結(jié)論在中國人群中隨著身高的增加股骨前后徑、股骨內(nèi)外徑也隨之增加而股骨面率隨著身高的增加而減??；中國人的股骨面率從測量結(jié)果看比西方人的數(shù)據(jù)偏大國人全膝關(guān)節(jié)置換股骨截骨面具有自身特點目前臨床上使用的人工膝關(guān)節(jié)假體并不能很好的匹配設(shè)計符合國人膝關(guān)節(jié)解剖特點的假體時應(yīng)考慮這些特殊之處。

簡介：目的對比觀察WAGNERSL股骨柄與骨水泥加長柄人工股骨頭置換治療老年不穩(wěn)定型轉(zhuǎn)子間骨折的臨床療效。資料與方法自2012年3月～2013年3月，大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院收治的老年不穩(wěn)定型轉(zhuǎn)子間骨折患者28例（28髖）其中男性9例，女性19例，年齡為76～98歲，平均831歲骨折按EVANSJENSEN分型（1975年）均為不穩(wěn)定型，其中Ⅲ型為9例，Ⅳ型為12例，Ⅴ型為7例骨質(zhì)疏松評定采用SINGH指數(shù)其中Ⅲ級11例，Ⅱ級13例，Ⅰ級4例。受傷原因車禍傷7例，不慎摔傷21例，均為新鮮骨折。16例患者行WAGNERSL股骨柄人工股骨頭置換，其中男性5例，女性11例，平均年齡819±612歲，自行摔傷12例，車禍傷4例，平均身高166±7CM，平均體重54±10KG，13例合并不同的內(nèi)科基礎(chǔ)疾病，平均隨訪13±1個月。EVANSJENSENⅢ型為5例，Ⅳ型為7例，Ⅴ型為4例。SINGH指數(shù)Ⅲ級6例，Ⅱ級8例，Ⅰ級2例。12例患者行骨水泥加長柄人工股骨頭置換，其中男性4例，女性8例，平均年齡825±701歲，自行摔傷9例，車禍傷3例，平均身高167±8CM，平均體重56±8KG，9例不同的內(nèi)科基礎(chǔ)疾病，平均隨訪12±2個月。EVANSJENSENⅢ型4例，Ⅳ型5例，Ⅴ型3例。SINGH指數(shù)Ⅲ級5例，Ⅱ級5例，Ⅰ級2例。通過對兩組患者資料進(jìn)行回顧性分析以比較臨床療效。結(jié)果WAGNERSL股骨柄組較骨水泥加長柄組手術(shù)時間短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005WAGNERSL股骨柄組較骨水泥加長柄組術(shù)中出血量少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005兩組的術(shù)后下地時間、術(shù)后早期并發(fā)癥無統(tǒng)計學(xué)差異P＞005）WAGNERSL柄組較骨水泥加長柄組術(shù)后HARRIS評分高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005），兩組患者術(shù)后隨訪均未發(fā)現(xiàn)假體移位、下沉、松動。結(jié)論WAGNERSL股骨柄人工股骨頭置換手術(shù)時間短、術(shù)中出血少，術(shù)后髖關(guān)節(jié)功能恢復(fù)好，近期療效優(yōu)于骨水泥加長柄人工股骨頭置換，是治療老年不穩(wěn)定型轉(zhuǎn)子間骨折伴骨質(zhì)疏松的較理想的手術(shù)方法，遠(yuǎn)期療效需進(jìn)一步臨床隨訪觀察。

簡介：目的食管下端肌間神經(jīng)發(fā)育異?；驌p傷可導(dǎo)致食管下端運動性疾患，如胃食管返流、賁門失弛緩癥等，臨床上需要有合適的動物模型來研究這些疾病。本研究通過正常SD大鼠食管下端肌間神經(jīng)發(fā)育解剖學(xué)觀察，及應(yīng)用不同濃度BAC毀損大鼠食管下端肌間神經(jīng)研究，試圖為今后提供不同的食管肌間神經(jīng)毀損模型，并為進(jìn)一步開展與小兒LES肌間神經(jīng)異常性疾病有關(guān)的的實驗研究奠定基礎(chǔ)。方法1取出生后14天P14組和成年大鼠ADULT組SD大鼠的LES及EB標(biāo)本，固定后石蠟包埋。2蛋白基因產(chǎn)物95P6P95免疫組化結(jié)合圖像分析評價LES肌間神經(jīng)發(fā)育情況。3NNOS和ACHE免疫組化結(jié)合圖像分析評價LES氮能及膽堿能肌間神經(jīng)發(fā)育情況。4建立五種不同濃度BAC溶液食管下端肌間神經(jīng)毀損動物模型清潔級SD大鼠200250G，按BAC濃度隨機(jī)分組為0025％組、005％組、01％組、02％組、04％組及生理鹽水組對照組，每組40只。5食管下端肌間神經(jīng)鋪片研究，并進(jìn)行NADPHD酶的組織化學(xué)染色，三維觀察肌間神經(jīng)的毀損與恢復(fù)情況。6PGP95、NNOS和ACHE免疫組化定性和定量分析各組BAC處理段神經(jīng)元毀損情況。結(jié)果1成年鼠與P14幼年鼠118±58個橫切面相比，LES的神經(jīng)元密度66±41個橫切面逐漸下降P＜001，神經(jīng)元胞體增大11047±6996ΜM2、胞漿著色加深。但食管體部神經(jīng)元的密度兩者之間無明顯分別。2成年鼠LES神經(jīng)元的胞體最長徑DMAX2041±756GM、胞核最長徑NMAX736±127ΜM與陽性神經(jīng)元胞體面AREA11047±6996ΜM2較幼年鼠增大；成年鼠的積分光密度IOD3680±1947及平均光密度OD0348±0060較幼年鼠增加。3鋪片研究顯示BAC處理后第2周，部分細(xì)胞失去自然的形態(tài)，邊緣變得參差不齊，胞漿染色變淡，其他濃度組亦出現(xiàn)相似情況；第4周神經(jīng)叢內(nèi)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，神經(jīng)纖維網(wǎng)絡(luò)稀疏，部分神經(jīng)纖維交叉處神經(jīng)元消失，僅剩神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。第8周神經(jīng)元大部分消失，神經(jīng)叢分布稀疏，神經(jīng)叢內(nèi)神經(jīng)元減少，剩余神經(jīng)元胞漿染色均勻，外型自然，胞核清晰。4PGP95、NNOS、ACHE免疫組化顯示，BAC處理后部分神經(jīng)元胞漿出現(xiàn)空泡化；部分神經(jīng)元胞核出現(xiàn)固縮，胞漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊樣結(jié)構(gòu)，胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)變得疏松，胞核、胞漿分辨不清；BAC處理4周后，食管下端縱、環(huán)肌之間神經(jīng)元消失，僅剩部分神經(jīng)元碎片。5所有濃度BAC處理8周，實驗大鼠肌間神經(jīng)元個數(shù)與BAC濃度之間的關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，毀損后大鼠肌間神經(jīng)元密度與BAC濃度呈負(fù)相關(guān)，其直線回歸方程Y4551187X，回歸系數(shù)為1187，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。即BAC濃度越高肌間神經(jīng)元毀損程度越重。602％、04％組術(shù)后第2周密度150±106個橫切面、125±071個橫切面較同期對照組538±233個橫切面開始減少。第4、8周所有濃度組均開始減少。結(jié)論1PGP95、RINOS、ACHE特異性及敏感性高，能夠標(biāo)記大鼠不同生長時期的食管肌間神經(jīng)元和BAC處理前后的神經(jīng)元。2生后SD大鼠食管下端肌間神經(jīng)元有一個自我成熟的過程，隨著日齡增長SD大鼠食管下端肌間神經(jīng)元呈逐漸減少的趨勢，神經(jīng)元的胞體、胞核增大，胞漿染色加深；3BAC溶液能夠毀損大鼠食管下端肌間神經(jīng)元，毀損后肌間神經(jīng)元個數(shù)與BAC濃度呈負(fù)相關(guān)。4BAC溶液對大鼠食管下端肌間神經(jīng)元的毀損是非選擇性的，膽堿能神經(jīng)元、氮能神經(jīng)元均出現(xiàn)毀損。

簡介：背景與目的胰島素抵抗IR與代謝綜合疾病有著密切的關(guān)系，IR不僅是2型糖尿病的病理生理基礎(chǔ)，也被公認(rèn)為代謝綜合疾病的“共同土壤”。并有大量文獻(xiàn)報道IR與葡萄糖利用損傷的重要環(huán)節(jié)有關(guān)，在IR狀態(tài)下，外周組織對葡萄糖的攝取和利用是顯著降低的。因此，改善外周組織對葡萄糖的攝取和利用對改善IR有著重要的意義，同時也可能成為防治2型糖尿病的重要手段之一檳榔堿是從天然植物檳榔中提取的生物堿，它的生物學(xué)功能廣泛，具有驅(qū)蟲，殺菌，抗血栓形成，抗動脈粥樣硬化等功能。我室前期研究表明，低劑量的檳榔堿能夠改善2型糖尿病大鼠肝臟中的糖脂代謝紊亂并發(fā)現(xiàn)它能保護(hù)胰腺Β細(xì)胞，抑制翼螺旋轉(zhuǎn)錄因子O1FOXO1的表達(dá)，而高劑量的檳榔堿具有肝毒性。由此可見檳榔堿改善胰島素抵抗大鼠可能與增加胰島素的敏感性有關(guān)。胰島素抵抗IR是糖代謝紊亂所致外周組織對胰島敏感性降低以及對葡萄糖的利用受損。骨骼肌是利用葡萄糖和維持血糖平衡的重要組織，約80％的胰島素刺激所致葡萄糖攝取是由骨骼肌完成的，因此骨骼肌組織在胰島素抵抗中占有重要的地位。因此，本研究主要是觀察5MGKG檳榔堿對高果糖誘導(dǎo)的IR大鼠模型骨骼肌的影響，并探討其改善骨骼肌胰島素抵抗的分子機(jī)制。方法1建立高果糖飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)的IR大鼠模型。2采用HITACH717全自動生化分析儀測定空腹血糖；放射免疫法測定空腹血清胰島素。3逆轉(zhuǎn)錄多聚核苷酸酶鏈反應(yīng)RTPCR檢測檳榔堿對大鼠骨骼肌組織GLUT4MRNA和IRS1MRNA的表達(dá)。4WESTERNBLOT檢測檳榔堿對大鼠骨骼肌組織GLUT4，PPI3KPAKTIRS1蛋白的表達(dá)結(jié)果1檳榔堿對胰島素抵抗大鼠空FBG﹑FSI和ISI的影響與正常組相比，IR大鼠FBG和FSI顯著升高，而ISI則呈顯著下降；與IR組相比，檳榔堿處理IR大鼠后，能顯著降低IR大鼠FBG和FSI，升高ISI的水平。2檳榔堿對胰島素抵抗大鼠骨骼肌中IRS1蛋白和基因表達(dá)的影響與正常組相比IR大鼠骨骼肌中IRS1蛋白和基因表達(dá)明顯降低；與模型組相比，檳榔堿處理IR大鼠能顯著上調(diào)IR大鼠骨骼肌中IRS1蛋白和基因表達(dá)。3檳榔堿對胰島素抵抗大鼠骨骼肌中PPI3K和PAKT蛋白表達(dá)的影響與正常組相比，IR大鼠骨骼肌中PPI3K和PAKT蛋白表達(dá)明顯降低；與模型組相比，檳榔堿處理IR大鼠能顯著上調(diào)IR大鼠骨骼肌中PPI3K和PAKT蛋白表達(dá)。4檳榔堿對胰島素抵抗大鼠骨骼肌中GLUT4蛋白和基因表達(dá)的影響與正常組相比，IR大鼠骨骼肌中GLUT4蛋白和基因表達(dá)明顯降低；與模型組相比，檳榔堿處理IR大鼠能顯著上調(diào)IR大鼠骨骼肌中GLUT4蛋白和基因表達(dá)。結(jié)論檳榔堿改善大鼠骨骼肌的胰島素抵抗與激活骨骼肌中IRS1PI3KAKT信號通路和上調(diào)骨骼肌GLUT4表達(dá)有關(guān)。

簡介：泰山醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文GALECTIN3MMP9在子宮腺肌病中的表達(dá)及意義姓名裴曉慧申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師劉光海201202統(tǒng)計學(xué)意義P005。4實驗組在位內(nèi)膜中，姍一9的表達(dá)與痛經(jīng)無相關(guān)性RO188，PO319；在異位內(nèi)膜中，腳9的表達(dá)與痛經(jīng)具有相關(guān)性R0388，PO034，但在不同痛經(jīng)組之間AN嗄P9的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義P005。5在實驗組GAL。3與M啪P一9的表達(dá)正相關(guān)且中度相關(guān)FO326，PO011。結(jié)論1GAL一3在子宮腺肌病內(nèi)膜組織中高表達(dá)，尤以增生期差距明顯，提示GAL一3可能參與了子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展。2MⅧ9在子宮腺肌病子宮內(nèi)膜中高表達(dá)，尤以分泌期表達(dá)差異顯著，可能促進(jìn)了內(nèi)膜細(xì)胞向肌層的浸潤生長，從而參與了子宮腺肌病的發(fā)病機(jī)制。3GAL3與MMP9在子宮腺肌病生物學(xué)特性存在一致性，兩者協(xié)同作用參與了子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展過程，并在痛經(jīng)方面發(fā)揮一定的作用。關(guān)鍵詞半乳糖凝集素一3；基質(zhì)金屬蛋白酶9；痛經(jīng)；子宮腺肌病2

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。，∥≮霉蠢’7滔J‘、，∥‘II÷T，。7．JI研究生簽名膨’礦導(dǎo)師簽章王籮釬二級學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章1參、箋．”}I，、J一，’儼年彳月權(quán)曰河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名份，礦L中文摘要MTSSL及E．CADHERIN與非肌層浸潤性膀胱癌預(yù)后的關(guān)系摘要目的膀胱癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤，其中非肌層浸潤性PTA、PTL膀胱癌占全部患者的80％。目前臨床判斷非肌層浸潤性膀胱癌預(yù)后的主要指標(biāo)是腫瘤的病理分級。病理分級雖可在一定程度上反映腫瘤的生物學(xué)行為，但多因素分析結(jié)果表明病理分級并不能作為判斷預(yù)后的獨立因素。本課題應(yīng)用免疫組化法檢測腫瘤組織腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白MTSSL與上皮型鈣粘附素E．CADHERIN在非肌層浸潤性膀胱癌患者中的表達(dá)情況及其對腫瘤預(yù)后的意義。方法將我院收治的100例非肌層浸潤性膀胱癌患者，設(shè)為實驗組，選取同期30例膀胱正常黏膜組織手術(shù)患者，設(shè)為對照組，兩組患者均采用SP免疫組化法，檢測MTSSL與E．CADHERIN的表達(dá)情況，并分析與臨床特征、病理分級及復(fù)發(fā)情況的關(guān)系。結(jié)果1實驗組患者的MTSSL與E．CADHERIN的陽性表達(dá)率分別為40．00％與35．00％，均顯著低于對照組患者的73．33％與70．00％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義00．05。結(jié)論非肌層浸潤性膀胱癌患者的MTSSL與ECADHERIN陽性表達(dá)率顯著低于對照組患者且與病理分級分級越高表達(dá)越低和復(fù)發(fā)情況復(fù)發(fā)患者表達(dá)更低呈負(fù)相關(guān)，通過對這兩個指標(biāo)的檢測有利于判斷腫瘤分化程度與術(shù)后復(fù)發(fā)情況，為早期發(fā)現(xiàn)腫瘤提供可參考性信息，值得臨床上

簡介：目的探討膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶ACL損傷后自體胭繩肌腱重建ACL術(shù)后肌力恢復(fù)的特點探討ACL重建術(shù)后肌力缺損的原因并為臨床康復(fù)計劃的制定奠定理論基礎(chǔ)。方法本實驗受試對象為30名ACL重建術(shù)后的患者均來自國家體育總局運動醫(yī)學(xué)研究所體育醫(yī)院和北京大學(xué)第三醫(yī)院的前交叉韌帶單束重建術(shù)后的患者。時間為術(shù)后712個月平均為85個月。其中自體胭繩肌腱重建患者為20名同種異體胭繩肌肌腱重建患者10名。納入標(biāo)準(zhǔn)測試之前至少術(shù)后7個月沒有對側(cè)肢體手術(shù)史已經(jīng)恢復(fù)運動。排除標(biāo)準(zhǔn)有其他的膝關(guān)節(jié)手術(shù)史軟骨損傷ⅢⅣ級在測試之前一個月左右內(nèi)有骨骼肌的拉傷或者損傷雙膝關(guān)節(jié)松弛度大于3毫米年齡超過40歲受傷到手術(shù)時間超過1年有半月板縫合術(shù)和微骨折術(shù)的患者。他們在60°S180°S和240°S進(jìn)行等速肌力測試對他們的肌力進(jìn)行對比研究主要測試指標(biāo)為PT、PTBW、TW。結(jié)果用BIODEX3系統(tǒng)測試對30名重建患者進(jìn)行測試結(jié)果示自體腱組和異體腱組PT、PTBW、TW三組指標(biāo)P＞005無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。采用自體胭繩肌腱重建ACL的受試者患側(cè)與健側(cè)相比肌力相差17％左右伸肌肌力的缺損比屈肌肌力的缺損更加明顯。結(jié)論與采用異體腱重建術(shù)后的受試者相比較重建術(shù)后肌力在短期內(nèi)療效接近異體腱在保證移植腱安全的基礎(chǔ)上可作為重建前交叉韌帶重建的替代肌腱。

簡介：目的通過動物實驗改良可控輸出道的手術(shù)方式，增強(qiáng)可控輸出道的長期控尿能力，減少經(jīng)腹壁可控尿流改道的遠(yuǎn)期并發(fā)癥。方法對10條實驗犬建立帶蒂腹直肌瓣包繞縮窄回腸輸出道增強(qiáng)輸出道控尿機(jī)制的動物模型。距回盲部10CM處切取末端回腸30～40CM，在切取的腸段兩端各留約6CM后，中間部分沿系膜緣對側(cè)切開去腸管化，并折疊成U形，兩側(cè)切緣以可吸收縫線兩層縫合密閉制成儲尿囊。切取段兩端以F12號導(dǎo)尿管做支架，將系膜緣對側(cè)剖開，切除多余的腸壁，并將切緣以40可吸收線連續(xù)及間斷縫合各一層，進(jìn)行縮窄，使之通過F12支架時有一定的箍管感?？s窄回腸段一端與儲尿囊直接以40可吸收線做端側(cè)吻合，另一盲端直接開口于同側(cè)腹部皮膚，以三角皮瓣與皮膚縫合形成瘺口。切開切口旁腹直肌，近心端切開約3CM后，即沿腹直肌走行切開約6CM，并保留其神經(jīng)血管束，并將腹直肌瓣沿遠(yuǎn)心端翻轉(zhuǎn)，使其穿過一條輸出道的腸系膜，并包繞于輸出道周圍，腹直肌腱膜面與輸出道漿膜面對合完整后，以絲線縫合固定，這段包繞腹直肌瓣的輸出道即作為研究管。另一條輸出道則直接由輸出道間引出，連接腹壁皮膚，作為控制管。術(shù)后一月，三月，六月分別行輸出道動力學(xué)檢查。分別測定每條實驗犬在儲尿囊空虛時和儲尿囊內(nèi)注水60ML時研究管與控制管輸出道內(nèi)的壓力MIP和功能性壓力段長度FPL，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果所有實驗犬于術(shù)后均可順利插入F10導(dǎo)管，無皮膚瘺或輸出道腸吻合處狹窄。除一條實驗犬于術(shù)后6月測壓時出現(xiàn)儲尿囊注水后液體沿對照管輸出道溢出，無法完成儲尿囊充盈時壓力測定外，其他所有實驗動物均完成術(shù)后的三次測壓。控制管術(shù)后一月MIP為7351±2401CMH2O儲尿囊空虛時，7768±2515CMH2O儲尿囊充盈時；FPL為478±078CM儲尿囊空虛時，460±075CM儲尿囊充盈時。術(shù)后三月控制管MIP為7116±1935CMH2O儲尿囊空虛時，7978±2125CMH2O儲尿囊充盈時，F(xiàn)PL為471±061CM儲尿囊空虛時，461±054CM儲尿囊充盈時。術(shù)后六月控制管MIP為7028±1830CMH2O儲尿囊空虛時，7593±1753CMH2O儲尿囊充盈時；FPL為449±065CM儲尿囊空虛時，424±097CM儲尿囊充盈時。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，控制管MIP及FPL在儲尿囊充盈前后的改變均無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。對照管術(shù)后一月MIP為2904±702CMH2O儲尿囊空虛時，4290±766CMH2O儲尿囊充盈時；FPL為504±044CM儲尿囊空虛時，459±053CM儲尿囊充盈時。術(shù)后三月對照管MIP為2810±809CMCMH2O儲尿囊空虛時，4163±898CMH2O儲尿囊充盈時；FPL為498±082CM儲尿囊空虛時，442±085CM儲尿囊充盈時。術(shù)后六月對照管MIP為2663±689CMH2O儲尿囊空虛時，4336±979CMH2O儲尿囊充盈時FPL為463±069CM儲尿囊空虛時，397±053CM儲尿囊充盈時。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，對照管MIP及FPU在儲尿囊充盈前后的改變均存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義P005。無論儲尿囊在何種狀態(tài)，控制管的MIP均高于70CMH2O，而在儲尿囊空虛時，對照管的MIP不足30CMH2O，在儲尿囊充盈狀態(tài)下，對照管的MIP略高于40CMH2O，明顯低于控制管P005。術(shù)后6月輸出道造影顯示兩輸出道均筆直地固定在腹壁下，無狹窄或瘺道形成，形態(tài)亦無明顯差別。術(shù)后6月解剖研究管輸出道，可見腹直肌肌瓣與縮窄回腸漿膜緊密貼合。鏡下回腸漿膜層外可見橫紋肌結(jié)構(gòu)，呈環(huán)狀包裹于腸管外。結(jié)論通過將帶蒂腹直肌瓣包繞的方法可極大的增強(qiáng)縮窄回腸輸出道的控尿機(jī)制，這一方法簡便，技術(shù)要求不高，而且不會造成插管困難，同時在儲尿囊內(nèi)壓力較高時也能可靠控尿。我們認(rèn)為這一技術(shù)可能對今后的泌尿外科重建技術(shù)的改進(jìn)有一定價值。

簡介：研究背景和研究目的如何在體外培養(yǎng)出具有正常生理活性和力學(xué)性能的組織工程骨，仍然是一個亟待解決的問題。最理想的方法是構(gòu)建一個高度仿生的體外培養(yǎng)環(huán)境，提供長期穩(wěn)定的生化環(huán)境和生理應(yīng)力環(huán)境，并利用此平臺充分研究影響組織工程組織生長發(fā)育的各種因素。應(yīng)力對干細(xì)胞增殖和分化的影響是組織工程的一個重要研究內(nèi)容，大量研究已證實多種信號通路參與到應(yīng)力對干細(xì)胞的作用中。EPHRIN和EPHRINRECEPTEPH是一組細(xì)胞膜表面的跨膜蛋白，它們結(jié)合后產(chǎn)生雙向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。近來的研究發(fā)現(xiàn)這一信號系統(tǒng)在骨骼發(fā)育、成骨分化上也有重要作用。同時有研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)力可影響EPHRIN、EPH的表達(dá)。因此，EPHRIN和EPH可能在壓應(yīng)力促進(jìn)BMSC成骨分化中發(fā)揮重要作用。方法1、本研究綜合血液透析儀和人工膜肺的原理，利用高分子生物半透膜制作物質(zhì)交換器，并制作了新的骨培養(yǎng)室。為檢測改進(jìn)后生物反應(yīng)器的組織培養(yǎng)效果，將組織工程骨在生物反應(yīng)器中連續(xù)培養(yǎng)21天，檢測培養(yǎng)液中PH、PO2、葡萄糖和乳酸含量，以檢測物質(zhì)交換器保持生化環(huán)境穩(wěn)定的能力。HE染色以觀察細(xì)胞存活和增殖，檢測ALP活性以觀察成骨分化活性。2、利用改進(jìn)后的生物反應(yīng)器培養(yǎng)組織工程骨，設(shè)置“單純壓應(yīng)力”、“成骨誘導(dǎo)”、“壓應(yīng)力成骨誘導(dǎo)”三個實驗組，記為A、B、C組。定量檢測了BMSC成骨分化中的EPHRINEPH的表達(dá)、堿性磷酸酶活性、RUNX2、OSTERIXMRNA表達(dá)，并做茜素紅染色。采用游離態(tài)配體EPHRINB1FC激活EPHB6并重復(fù)檢測上述指標(biāo)。3、為研究EPHB6的下游信號，將組織工程骨分為A、B、C組，依次為“單純壓應(yīng)力”組、“成骨誘導(dǎo)”組、“壓應(yīng)力成骨誘導(dǎo)”組，培養(yǎng)7天。WESTERNBLOTTING檢測RHOA的磷酸化水平，以EPHRINB1FC作用后，檢測RHOA的磷酸化水平。此后用ROCK抑制劑Y27632阻斷RHOAROCK通路，定量檢測RUNX2的MRNA水平。結(jié)果1、設(shè)計并制作了一款物質(zhì)交換器，通過PH、溶氧傳感器和數(shù)字控制器以反饋調(diào)節(jié)的方式維持組織培養(yǎng)環(huán)境的長期穩(wěn)定。2、新的骨培養(yǎng)室更加堅固耐用，體積小巧，減少了培養(yǎng)液預(yù)充量20ML。3、連續(xù)培養(yǎng)組織工程骨21天，物質(zhì)交換器可以將PH穩(wěn)定于72427397，PO2波動范圍為17461808MMHG，未超出預(yù)設(shè)范圍PH7274，PO2160200MMHG。葡萄糖緩慢下降至1611±011MMOLL，乳酸積累至024±002MMOLL。而沒有啟動物質(zhì)交換器的情況下，葡萄糖迅速下降1472±014MMOLL，乳酸積累也更多076±002MMOLL。4、改進(jìn)后的生物反應(yīng)器培養(yǎng)組織工程骨，表面和中心的細(xì)胞數(shù)量均顯著增加，ALP活性增高，提示成骨分化增強(qiáng)。5、組織工程骨培養(yǎng)14天時，C組的ALP活性最高2665±462金氏單位100ML，同時其RUNX241832±04243倍和OSTERIX34426±02585倍最高，EPHB6的MRNA表達(dá)量最低05631±00554倍，即是成骨分化活性越高，EPHB6的表達(dá)水平越低。6、5ΜGMLEPHRINB1FC作用后，鈣結(jié)節(jié)明顯減少。而相同濃度的小鼠IGG1則沒有抑制鈣結(jié)節(jié)形成。不同濃度的EPHRINB1FC作用后，EPHB6的表達(dá)水平上調(diào)，配體濃度越高，EPHB6的表達(dá)越多。這一作用來自EPHRINB1與EPHB6的結(jié)合，不受FC段的影響。7、EPHRINB1FC作用后，B組和C組RUNX2的表達(dá)較小鼠IGG1和空白對照顯著下調(diào)P8、各個實驗組的RHOA蛋白量大致相等。A組的GTPRHOA與BMSC大致相等，B、C組的GTPRHOA依次減少。EFNB1FC作用后，A、B、C組的GTPRHOA均較之前增加。9、各個實驗條件下，RUNX2在C組均比B組有更高的表達(dá)水平P結(jié)論1、研制了一款通過反饋調(diào)節(jié)保持組織培養(yǎng)環(huán)境的長期穩(wěn)定的物質(zhì)交換器。新的骨培養(yǎng)室更加堅固耐用，體積小巧，減少了培養(yǎng)液預(yù)充量。2、改進(jìn)后的生物反應(yīng)器培養(yǎng)組織工程骨，能有效地促進(jìn)細(xì)胞存活、增殖和成骨分化。3、單純壓應(yīng)力并不會誘導(dǎo)BMSC發(fā)生成骨分化，但可以增強(qiáng)化學(xué)誘導(dǎo)BMSC成骨分化的作用。4、EPHB6的MRNA表達(dá)量為“壓應(yīng)力誘導(dǎo)”組5、EPHRINB1FC使EPHB6的表達(dá)水平上調(diào)，配體濃度越高，EPHB6的表達(dá)越多。這一作用來自EPHRINB1與EPHB6的結(jié)合，不受FC段的影響。6、EPHRINB1FC作用后會抑制RUNX2和OSTERIX的表達(dá)，且這一抑制作用也受到EPHRINB1FC濃度的影響，高濃度的EPHRINB1FC表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制成骨分化作用。這一作用同樣不受FC段的影響。7、RHOA的磷酸化水平與成骨分化呈負(fù)相關(guān)。EPHB6激活后通過提高GTPRHOA水平來發(fā)揮抑制成骨分化的作用。8、RHOAROCK通路參與了EPHB6的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

簡介：目的髕骨骨軟骨骨折是髕骨骨折的一種特殊類型，臨床少見。髕骨骨軟骨骨折屬于關(guān)節(jié)內(nèi)骨折，復(fù)位固定要求較高，稍有不當(dāng)就會引起嚴(yán)重的并發(fā)癥，當(dāng)髕骨關(guān)節(jié)面不平整程度超過23MM時，可能導(dǎo)致創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。手術(shù)目的是維持關(guān)節(jié)面平整，對髕骨骨軟骨骨折的治療，應(yīng)最大限度地恢復(fù)關(guān)節(jié)面的形態(tài)，力爭使骨折解剖復(fù)位，關(guān)節(jié)面平滑，給予較牢固的內(nèi)固定，早期活動膝關(guān)節(jié)，恢復(fù)其功能，防止創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。髕骨骨軟骨骨折關(guān)節(jié)面復(fù)位不佳，不平滑，愈合后易發(fā)生髕股關(guān)節(jié)炎，如關(guān)節(jié)固定時間長，關(guān)節(jié)內(nèi)碎骨屑、血腫處理不干凈，關(guān)節(jié)內(nèi)可發(fā)生粘連，妨礙關(guān)節(jié)活動。髕骨骨軟骨骨折治療原則是，內(nèi)固定牢固可靠，關(guān)節(jié)面復(fù)位平滑，關(guān)節(jié)活動早。髕骨骨軟骨骨折多發(fā)生于青少年，由于其臨床表現(xiàn)不典型，X線片又無特異性征象，臨床上極易誤診和漏診而導(dǎo)致不可逆性髕股骨性關(guān)節(jié)炎，對青少年影響巨大。本文對髕骨骨軟骨骨折的診斷、手術(shù)方法及療效進(jìn)行探討。對髕骨骨軟骨骨折的中西醫(yī)文獻(xiàn)進(jìn)行了回顧性研究，并提出診斷和治療髕骨骨軟骨骨折的方法方法對2005年2月2007年12月手術(shù)治療的18例髕骨骨軟骨骨折的臨床資料進(jìn)行總結(jié)分析。男10例，女8例，左側(cè)7例，右側(cè)11例。跑跳致傷7例，摔傷5例，扭傷5例，車禍傷1例。新鮮骨折者15例，陳舊性骨折者3例，關(guān)節(jié)鏡手術(shù)8例，切開復(fù)位手術(shù)10例。術(shù)后鼓勵患者主動伸屈關(guān)節(jié)，進(jìn)行股四頭肌，膕繩肌等長收縮鍛煉及髕骨推移鍛煉。關(guān)節(jié)鏡手術(shù)患者根據(jù)或參照LYSHOLM膝關(guān)節(jié)功能評分標(biāo)準(zhǔn)評價其療效，切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)患者采用髕骨骨折治療效果衡量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價。結(jié)果所有患者獲321個月平均132個月隨訪。關(guān)節(jié)鏡手術(shù)患者平均康復(fù)時間為5周，術(shù)后3個月LYSHOLM膝關(guān)節(jié)功能評分平均為917±23分，術(shù)后6個月評分平均為944±28分，所有患膝恢復(fù)健側(cè)活動度。切開復(fù)位內(nèi)固定手術(shù)患者平均骨愈合時間為8周，采用髕骨骨折治療效果衡量標(biāo)準(zhǔn)，無疼痛、腫脹、關(guān)節(jié)活動受限等。結(jié)論根據(jù)髕骨骨軟骨骨折塊的大小及損傷的時間，采用關(guān)節(jié)鏡檢查、鏡下手術(shù)或切開復(fù)位、應(yīng)用AO微型螺釘處理髕骨骨軟骨骨折，療效滿意。關(guān)節(jié)鏡下治療髕骨骨軟骨骨折具有手術(shù)創(chuàng)傷小、操作簡便、固定可靠、術(shù)后康復(fù)快、并發(fā)癥少等優(yōu)點，同時可以發(fā)現(xiàn)并治療關(guān)節(jié)內(nèi)合并傷。采用AO微型鈦釘固定骨折塊，直視下準(zhǔn)確復(fù)位，關(guān)節(jié)面平整，固定可靠，抗剪切應(yīng)力，有利于骨折愈合，避免或減少創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎發(fā)生。