簡(jiǎn)介：研究背景肌源性干細(xì)胞MUSCLEDERIVEDSTEMCELLS，MDSCS是一類(lèi)新近發(fā)現(xiàn)的成體干細(xì)胞，可以從動(dòng)物的骨骼肌中分離獲得，具有干細(xì)胞的自我更新和多向分化的潛能。MDSCS在體內(nèi)外分化成肌肉細(xì)胞時(shí)不需要特定的刺激，但讓MDSCS分化成骨骼肌細(xì)胞以外的其它譜系細(xì)胞時(shí)，可能需要特殊的生長(zhǎng)因子刺激或?qū)⑵渲糜谶m宜的環(huán)境中。越來(lái)越多的研究表明，MDSCS在特定組織的發(fā)育、組織再生及修復(fù)和基因治療方面的巨大潛能。有證據(jù)顯示，MDSCS能夠促進(jìn)肌纖維的再生，增強(qiáng)再生肌組織的功能，并具有分化為神經(jīng)外膜組織細(xì)胞和具有雪旺細(xì)胞SCHWANNCELLS，SCS表型細(xì)胞的潛能，為神經(jīng)組織工程研究中尋找雪旺細(xì)胞替代物帶來(lái)了希望。NEU基因調(diào)節(jié)素1NEUREGULIN1，NRG1是一種由膜攜帶或分泌的多肽，屬于表皮生長(zhǎng)因子EPIDERMALGROWTHFACT，EGF家族，主要是由神經(jīng)元產(chǎn)生，能與ERBB酪氨酸激酶受體相結(jié)合，引起廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。根據(jù)其N(xiāo)端結(jié)構(gòu)域的不同可將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3種亞型。最近的研究表明軸突中NRG1Ⅲ型SENSYMOTNEURONDERIVEDFACT，SMDF的水平是髓鞘形成的一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)。它不僅能促進(jìn)雪旺細(xì)胞的增殖、分化，而且還調(diào)節(jié)軸突的髓鞘化及髓鞘的厚度。SMDF的分泌在胚胎期和新生期達(dá)到高峰，而成年后的表達(dá)明顯減少。在周?chē)窠?jīng)損傷后，雪旺細(xì)胞及神經(jīng)支配的靶器官肌組織中均可見(jiàn)其表達(dá)，然而其表達(dá)量不足以支持成年軸突完成再髓鞘化過(guò)程，僅能形成包繞軸突的薄髓鞘和變短的節(jié)間長(zhǎng)度。也有研究顯示，雪旺細(xì)胞自身可以產(chǎn)生NRG1Ⅲ型Α2同源體，以自分泌或旁分泌的形式促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖，并參與到清除病變軸突和髓鞘的過(guò)程中。周?chē)窠?jīng)損傷后，雪旺細(xì)胞分化和增殖是軸突再生的必備條件，而SMDF是髓鞘厚度的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。因此，提高周?chē)窠?jīng)損傷處SMDF蛋白水平為雪旺細(xì)胞的髓鞘化過(guò)程提供了一個(gè)潛在的治療策略。研究目的1采用新生小鼠坐骨神經(jīng)培養(yǎng)純化后的雪旺細(xì)胞條件培液，誘導(dǎo)小鼠MDSCS向雪旺細(xì)胞方向分化，為組織工程研究尋找新的雪旺細(xì)胞替代物；2克隆SMDF基因和構(gòu)建SMDF真核表達(dá)載體，為進(jìn)一步的功能研究提供有力的工具；3鑒定轉(zhuǎn)染PEGFPN2SMDF的MDSCS，研究SMDF基因在MRNA和蛋白水平的表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)構(gòu)建的載體能有效的轉(zhuǎn)導(dǎo)目的基因；4證實(shí)SMDF基因可促進(jìn)類(lèi)雪旺細(xì)胞的增殖、分化的，進(jìn)一步驗(yàn)證SMDF蛋白的功能，為研究周?chē)窠?jīng)損傷后SCS髓鞘化過(guò)程及分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法1應(yīng)用改良的PREPLATE技術(shù)，從新生小鼠骨骼肌中分離MDSCS，利用抗體DESMIN和SCA1對(duì)分離得到的MDSCS進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定；2從新生小鼠坐骨神經(jīng)分離純化雪旺細(xì)胞，利用抗體P75NTR、S100Β進(jìn)行鑒定并收集雪旺細(xì)胞的條件培液用以誘導(dǎo)MDSCS分化為類(lèi)雪旺細(xì)胞；3利用WESTERNBLOT對(duì)不同組織中SMDF蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行分析，利用免疫組織化學(xué)的方法鑒定SMDF在DRG中的表達(dá)；4針對(duì)小鼠SMDF基因MRNA全序列設(shè)計(jì)引物，TRIZOL法提取新生小鼠DRG總RNA，通過(guò)RTPCR得到SMDF基因編碼區(qū)全序列，利用DNA重組技術(shù)將該基因片段重組到PEGFPN2真核表達(dá)質(zhì)粒上，構(gòu)建重組真核表達(dá)載體PEGFPN2SMDF，并通過(guò)PCR、酶切及測(cè)序的方法進(jìn)行鑒定；5應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將真核表達(dá)載體PEGFPN2SMDF和空質(zhì)粒PEGFPN2轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的MDSCS，通過(guò)PCR、WESTERNBLOT方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后SMDF基因和蛋白的表達(dá)情況。6采用雪旺細(xì)胞條件培液誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染SMDF基因的MDSCS分化為類(lèi)雪旺細(xì)胞，并采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法進(jìn)行鑒定。結(jié)果1應(yīng)用改良的PREPLATE技術(shù)，從小鼠骨骼肌中分離得到MDSCS，能在體外穩(wěn)定增殖傳代，DESMIN和SCA1免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽(yáng)性；2從新生小鼠坐骨神經(jīng)中分離純化得到雪旺細(xì)胞，將收集的雪旺細(xì)胞條件培液加入MDSCS中，成功誘導(dǎo)出能表達(dá)雪旺細(xì)胞特異性標(biāo)記物P75NTR、S100Β的細(xì)胞；3將小鼠DRG中的SMDF基因克隆至真核表達(dá)載體PEGFPN2上，雙酶切、PCR和DNA測(cè)序鑒定結(jié)果表明，插入的序列與GENBANK上小鼠SMDF基因CDS序列完全符合；4PEGFPN2SMDF真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染MDSCS后，熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光蛋白的表達(dá)；PCR和WESTERNBLOT結(jié)果顯示，重組載體PEGFPN2SMDF轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中SMDFMRNA水平和蛋白水平的表達(dá)明顯高于空質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞，而后兩者間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；轉(zhuǎn)染SMDF基因的MDSCS，經(jīng)雪旺條件培液誘導(dǎo)后可分化為類(lèi)雪旺細(xì)胞，且S100Β的陽(yáng)性率明顯高于直接誘導(dǎo)的類(lèi)雪旺細(xì)胞。結(jié)論1采用雪旺細(xì)胞條件培液，能夠?qū)⑿律∈蠊趋兰≈蟹蛛x得到的MDSCS誘導(dǎo)分化為類(lèi)雪旺細(xì)胞，為組織工程神經(jīng)研究找到了新的種子細(xì)胞替代物；2成功將重組的真核表達(dá)載體PEGFPN2SMDF轉(zhuǎn)染至MDSCS中，轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中SMDF的MRNA水平和蛋白水平都顯著增高，同時(shí)證實(shí)SMDF基因可促進(jìn)類(lèi)雪旺細(xì)胞的增殖、分化，為進(jìn)一步研究周?chē)窠?jīng)損傷后雪旺細(xì)胞髓鞘化過(guò)程及分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的研究壯筋續(xù)骨湯促進(jìn)大鼠股骨骨折骨痂中骨形態(tài)發(fā)生蛋白7BONEMPHOGENEFICPROTEINBMP7與神經(jīng)肽YNEUROPEPTIDEYNPY的表達(dá)探討其對(duì)骨折愈合的作用。方法成年健康雄性WISTAR大鼠50只用線(xiàn)鋸在股骨中段切斷股骨制備骨折模型應(yīng)用壯筋續(xù)骨湯水煎液灌胃治療。X線(xiàn)觀(guān)察骨折愈合情況蘇木精伊紅染色HEMATOXYLINEOSINSTAININGHE觀(guān)察骨折愈合的病理變化。免疫組織化學(xué)IMMUNOHISTOCHEMISTRY染色檢測(cè)骨痂中BMP7和NPY的表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測(cè)血清中BMP7及NPY水平。結(jié)果大鼠股骨骨折后局部腫脹治療后7天腫脹消失。骨折后7天骨折斷端主要為纖維肉芽組織14天為纖維性骨痂組織治療后7天骨折斷端有纖維性骨痂形成14天已有軟骨性骨痂和骨性骨痂形成。大鼠血清BMP7和NPY水平在骨折術(shù)后14天均顯著高于骨折術(shù)后7天P＜005。模型組大鼠血清BMP7和NPY水平均顯著高于假手術(shù)組P＜005治療組大鼠血清BMP7和NPY水平均顯著高于模型組P＜005。結(jié)論壯筋續(xù)骨湯可能通過(guò)增強(qiáng)骨折骨痂組織中BMP7和NPY的表達(dá)加速骨折愈合過(guò)程。

簡(jiǎn)介：目的探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞成骨化協(xié)同作用，以及采用人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和干骺端骨膜干細(xì)胞共培養(yǎng)策略作為骨組織工程種子細(xì)胞的可行性。材料與方法分離、培養(yǎng)人來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀及三向誘導(dǎo)進(jìn)行間充質(zhì)來(lái)源干細(xì)胞鑒定。以三種不同比例進(jìn)行人來(lái)源骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞的共培養(yǎng)和成骨誘導(dǎo)，并以同一個(gè)體來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和干骺端骨膜干細(xì)胞作為平行對(duì)照。在體外單層培養(yǎng)水平，通過(guò)堿性磷酸酶染色，茜素紅染色，測(cè)定堿性磷酸酶活性、細(xì)胞鈣離子水平，應(yīng)用REALTIMEPCR檢測(cè)成骨相關(guān)COL1ΑL、BMP2、OSTEOPONTIN、OSTEOCALCIN的基因表達(dá)，探討人來(lái)源骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞的成骨化協(xié)同作用。將共培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞接種ΒTCP三維多孔支架，進(jìn)一步探討在三維培養(yǎng)條件下，共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞對(duì)成骨相關(guān)基因COL1Α1、BMP2、OSTEOPONTIN和OSTEOCALCINMRNA轉(zhuǎn)錄的影響。建立裸鼠異位成骨及兔股骨髁松質(zhì)骨極量骨缺損動(dòng)物模型，將植入的組織工程骨于不同的時(shí)相點(diǎn)取出，通過(guò)HE染色、VANOIESON染色等形態(tài)學(xué)方法探討共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞對(duì)在體新骨再生及成熟骨形成的影響，應(yīng)用VWF免疫組織化學(xué)染色，觀(guān)察共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞對(duì)組織工程化骨新生血管化的影響。結(jié)果分離培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和干骺端骨膜干細(xì)胞均具有間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征，具有向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等細(xì)胞系分化的潛能。在體外單層培養(yǎng)水平，與同一個(gè)體來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞相比，三組共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞顯著增加細(xì)胞堿性磷酸酶活性，促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的體外成骨礦化，提高細(xì)胞鈣離子水平。成骨相關(guān)基因COL1ΑL、OSTEOPONTIN的MRNA轉(zhuǎn)錄開(kāi)始于成骨誘導(dǎo)早期，而B(niǎo)MP2和OSTEOCALCIN基因表達(dá)峰值出現(xiàn)在成骨誘導(dǎo)后期。在單層培養(yǎng)水平及三維培養(yǎng)水平，共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞均在不同時(shí)相點(diǎn)上調(diào)COL1Α1、BMP2、OSTEOPONTIN和OSTEOCALCIN的基因表達(dá)。異位成骨的研究顯示，共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞作為骨組織工程種子細(xì)胞，可明顯促進(jìn)組織工程化骨的異位新骨形成及向成熟骨的轉(zhuǎn)化，并促進(jìn)組織工程化骨的新生血管化。在兔股骨髁松質(zhì)骨極量骨缺損修復(fù)過(guò)程中，共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞可顯著促進(jìn)在體的新骨再生，提高成熟骨形成百分比。與同一個(gè)體來(lái)源的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞相比，共培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及干骺端骨膜干細(xì)胞并不能提高組織工程化骨在骨缺損區(qū)的新生血管總數(shù)，但可明顯提高ΒTCP孔徑中心區(qū)域的中心血管化程度。結(jié)論人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和干骺端骨膜干細(xì)胞在體外、體內(nèi)均顯示成骨化協(xié)同作用。將共培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和干骺端骨膜干細(xì)胞作為骨組織工程種子細(xì)胞資源可提高組織工程化骨的成骨性能。

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簡(jiǎn)介：目的探討顯微鏡輔助下頸椎前路減壓椎間CAGE植骨鈦板固定治療脊髓型頸椎病的臨床效果。方法選取2010年5月至2012年5月大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院骨三科27例實(shí)施顯微鏡輔助下頸椎前路減壓椎間CAGE植骨鈦板固定術(shù)治療的脊髓型頸椎病患者并且隨訪(fǎng)資料完整的病例進(jìn)行回顧性分析。其中男性14例，女性13例，年齡為2665歲，平均499±12歲，其中單間隙19例，雙間隙8例。術(shù)前常規(guī)行頸椎椎正側(cè)位、過(guò)伸過(guò)屈側(cè)位X線(xiàn)片，頸椎CT及頸椎MRI檢查。所有患者在術(shù)后第1日，1月，3月，6月，12月時(shí)復(fù)查頸椎正側(cè)位片。根據(jù)患者術(shù)前、術(shù)后3月、6月、12個(gè)月的隨訪(fǎng)資料、日本骨科協(xié)會(huì)JOA評(píng)分系統(tǒng)、影像學(xué)結(jié)果（融合節(jié)段椎間隙高度及骨融合情況）、臨床好轉(zhuǎn)率RIS來(lái)評(píng)定臨床療效。所有數(shù)據(jù)采用SPSS130軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)，P＜005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果所有患者平均隨訪(fǎng)618月，神經(jīng)功能明顯改善，J0A評(píng)分術(shù)前平均844±228分，術(shù)后平均1370±198分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）椎間植骨全部融合，無(wú)內(nèi)固定器材松動(dòng)和斷裂，無(wú)CAGE移位，椎間高度無(wú)丟失。結(jié)論顯微鏡輔助下頸椎前路減壓椎間CAGE植骨鈦板固定治療脊髓型頸椎病安全性高，減壓效果好。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)200502117延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文下頜角肥大的相關(guān)測(cè)量與截骨面積關(guān)系的研究研究生姓名宮克宇培養(yǎng)單位延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部指導(dǎo)教師姓名、職稱(chēng)李禹楠副教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)外科學(xué)研究方向整形外科學(xué)論文提交日期2008年04月30日學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文系本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立完成的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)記和致謝的部分外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含本人為獲得任何教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或?qū)W歷而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同事對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人如違反上述聲明，愿意承擔(dān)由此引發(fā)的一切責(zé)任和后果。研究生簽名日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文，學(xué)校有權(quán)保存其電子和紙制文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以向有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交并授權(quán)其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。對(duì)于保密論文，按保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。本學(xué)位論文屬于1保密，在年解密后適用于本聲明；2不保密。研究生簽名導(dǎo)師簽名日期年月日

簡(jiǎn)介：目的觀(guān)察透明質(zhì)酸鈉對(duì)兔骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液一氧化氮含量的影響，探討其治療骨性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制，為臨床治療骨性關(guān)節(jié)炎提供依據(jù)。方法將30只新西蘭兔用關(guān)節(jié)腔內(nèi)定期注射01ML體積分?jǐn)?shù)為04％木瓜蛋白酶水溶液，并任其自由活動(dòng)制成骨性關(guān)節(jié)炎模型，造模成功后，隨機(jī)分模型組，對(duì)照組，治療組三個(gè)組，每組10只，模型組不做處理，對(duì)照組每3天向其膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射01ML生理鹽水，治療組每3天向其膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉01ML，連續(xù)2個(gè)月后，抽取關(guān)節(jié)液用ELISA法測(cè)其一氧化氮含量，觀(guān)察膝關(guān)節(jié)腔大體標(biāo)本，并取其軟骨，觀(guān)察軟骨病理形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果治療組與模型組和對(duì)照組相比，膝關(guān)節(jié)液一氧化氮含量明顯降低P＜005，模型組和對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異P＞005，治療組膝關(guān)節(jié)大體標(biāo)本和軟骨病理切片示軟骨損害較輕。結(jié)論透明質(zhì)酸鈉關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射能減少骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中一氧化氮的含量，減輕對(duì)軟骨的損害，保護(hù)軟骨細(xì)胞。

簡(jiǎn)介：第一章血管緊張素Ⅱ受體活性對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下大鼠骨骼肌微循環(huán)灌注的調(diào)節(jié)作用研究背景骨骼肌微循環(huán)是血漿和組織間液之間物質(zhì)交換的場(chǎng)所，骨骼肌微循環(huán)灌注量的改變對(duì)物質(zhì)交換起直接調(diào)節(jié)作用。腎素血管緊張素RENINANGIOTENSINSYSTEM，RAS系統(tǒng)在調(diào)節(jié)血管張力及血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用，血管緊張素ⅡANGⅡ是RAS系統(tǒng)的主要生物活性物質(zhì)，主要通過(guò)與其1型受體AT1R和2型受體AT2R結(jié)合發(fā)揮作用，ANGⅡ?qū)T1R和AT2R具有相似的親和力。在大容量血管及阻力小動(dòng)脈，AT1R激活介導(dǎo)血管收縮，而AT2R激活可介導(dǎo)血管舒張。AT1R和AT2R在骨骼肌微循環(huán)中分布廣泛，AT1R活性及AT2R活性是否對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下骨骼肌微循環(huán)灌注起調(diào)節(jié)作用，并進(jìn)而影響骨骼肌葡萄糖利用及胰島素轉(zhuǎn)運(yùn)，目前并不完全清楚。目的給予AT1R拮抗劑氯沙坦和或AT2R拮抗劑PD123319，觀(guān)察基礎(chǔ)狀態(tài)下骨骼肌循環(huán)灌注情況的變化，以明確AT1R活性及AT2R活性對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下骨骼肌微循環(huán)灌注的調(diào)節(jié)作用，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步觀(guān)察AT1R活性及AT2R活性對(duì)骨骼肌攝取胰島素和利用葡萄糖的影響。方法1骨骼肌微循檢測(cè)實(shí)驗(yàn)SD大鼠（20只）隨機(jī)分為氯沙坦給藥組、PD123319給藥組、氯沙坦PD123319給藥組、氯沙坦LNAME給藥組，運(yùn)用造影增強(qiáng)超聲技術(shù)CONTRASTENHANCEDULTRASOUND，CEU檢測(cè)各組大鼠骨骼肌微循環(huán)灌注量MICROVULARBLOODVOLUME，MBV的變化2股動(dòng)脈血流檢測(cè)實(shí)驗(yàn)SD大鼠（10只），隨機(jī)分為氯沙坦給藥組和PD123319給藥組，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中股動(dòng)脈血流變化3骨骼肌葡萄糖利用測(cè)定實(shí)驗(yàn)SD大鼠（20只）隨機(jī)分為氯沙坦給藥組、PD123319給藥組、氯沙坦PD123319給藥組、氯沙坦LNAME給藥組，測(cè)定大鼠下肢動(dòng)靜脈葡萄糖差值以明確骨骼肌葡萄糖利用情況4骨骼肌胰島素?cái)z取實(shí)驗(yàn)SD大鼠（15只），隨機(jī)分為對(duì)照組、氯沙坦給藥組、氯沙坦LNAME給藥組，測(cè)定125Ⅰ胰島素的清除率以明確骨骼肌胰島素?cái)z取情況。結(jié)果1AT1R拮抗劑氯沙坦給藥后，與基礎(chǔ)值相比，大鼠骨骼肌微循環(huán)灌注量顯著增加約3倍P＜0001，伴隨骨骼肌葡萄糖利用和胰島素?cái)z取的明顯增加P＜005。氯沙坦給藥不影響股動(dòng)脈血流及動(dòng)脈血壓。2AT2R拮抗劑PD123319給藥后，與基礎(chǔ)值相比，大鼠骨骼肌微循環(huán)灌注量降低約80％P＜0001，伴隨骨骼肌葡萄糖利用明顯下降P＜001。PD123319給藥不影響股動(dòng)脈血流及動(dòng)脈血壓。3在同時(shí)給予AT2R拮抗劑PD123319的情況下，氯沙坦增加骨骼肌微循環(huán)灌注量及葡萄糖攝取的作用被抑制（與基礎(chǔ)值相比，P＞005。4一氧化氮合成酶抑制劑LNAME抑制一氧化氮產(chǎn)生后，氯沙坦增加骨骼肌微循環(huán)灌注量、葡萄糖利用及胰島素?cái)z取的作用均被抑制（與基礎(chǔ)值相比，P＞005）。結(jié)論1基礎(chǔ)AT1R活性限制骨骼肌微循環(huán)灌注量，并進(jìn)而影響骨骼肌葡萄糖利用和胰島素?cái)z取基礎(chǔ)AT2R活性可增加骨骼肌微循環(huán)灌注量，從而增加骨骼肌葡萄糖利用和胰島素轉(zhuǎn)運(yùn)。2AT1R阻滯后增加骨骼肌微循環(huán)灌注、葡萄糖利用和胰島素?cái)z取的作用，由AT2R介導(dǎo)，并依賴(lài)于一氧化氮的作用。第二章血管緊張素Ⅱ受體活性對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下大鼠骨骼肌微循環(huán)胰島素敏感性的調(diào)節(jié)作用研究背景骨骼肌是胰島素調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的主要場(chǎng)所，在作用于骨骼肌細(xì)胞之前，胰島素必須首先從循環(huán)血液中轉(zhuǎn)運(yùn)至骨骼肌組織間隙，胰島素的轉(zhuǎn)運(yùn)是決定其在骨骼肌中發(fā)揮調(diào)節(jié)葡萄糖代謝作用的限速步驟。在正常狀態(tài)下，胰島素可擴(kuò)張毛細(xì)血管前終末小動(dòng)脈，增加骨骼肌微循環(huán)灌注，擴(kuò)大物質(zhì)交換面積，促進(jìn)其自身轉(zhuǎn)運(yùn)作用。骨骼肌微循環(huán)胰島素敏感性正常，是保證胰島素調(diào)節(jié)糖代謝作用正常發(fā)揮的基礎(chǔ)。血管緊張素系統(tǒng)RAS的過(guò)度激活影響胰島素在骨骼肌中發(fā)揮調(diào)節(jié)糖代謝的能力，RAS系統(tǒng)對(duì)于骨骼肌微循環(huán)胰島素敏感性是否有影響，目前尚無(wú)直接證據(jù)。我們?cè)诘谝徽聦?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)狀態(tài)下，AT1R和AT2R活性對(duì)骨骼肌微循環(huán)灌注、葡萄糖利用及胰島素轉(zhuǎn)運(yùn)具有調(diào)節(jié)作用。由于骨骼肌微循環(huán)灌注、胰島素轉(zhuǎn)運(yùn)與微循環(huán)胰島素敏感性及胰島素調(diào)節(jié)糖代謝的能力密切相關(guān)，我們推測(cè)AT1R和AT2R活性可能對(duì)微循環(huán)胰島素敏感性發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，并進(jìn)而影響胰島素調(diào)節(jié)糖代謝的能力。目的觀(guān)察基礎(chǔ)狀態(tài)下AT1R和AT2R活性對(duì)胰島素微循環(huán)作用和調(diào)節(jié)糖代謝能力的影響。方法1胰島素微循環(huán)作用和調(diào)節(jié)糖代謝能力實(shí)驗(yàn)SD大鼠（15只）隨機(jī)分為對(duì)照組，氯沙坦給藥組和PD123319給藥組。對(duì)照組大鼠接受2小時(shí)胰島素鉗夾實(shí)驗(yàn)3MUKGMIN，氯沙坦組大鼠在接受胰島素鉗夾試驗(yàn)同時(shí)給予氯沙坦靜脈注射以阻滯AT1R活性，PD123319組鼠在接受胰島素鉗夾試驗(yàn)同時(shí)給予PD123319持續(xù)輸注以阻滯AT2R活性。計(jì)算胰島素刺激的葡萄糖處置率GLUCOSEINFUSIONRATE，GIR，用于評(píng)價(jià)胰島素調(diào)節(jié)糖代謝的能力運(yùn)用造影增強(qiáng)超聲技術(shù)（CONTRASTENHANCEDULTRASOUND，CEU）檢測(cè)各組大鼠骨骼肌微循環(huán)灌注量MBV的變化，用于評(píng)價(jià)微循環(huán)胰島素敏感性整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓2股動(dòng)脈血流檢測(cè)實(shí)驗(yàn)SD大鼠（15只），分組及處理同上，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中股動(dòng)脈血流變化。結(jié)果1對(duì)照組大鼠中，隨著胰島素的輸注，GIR逐漸升高，同時(shí)可觀(guān)察到MBV的增加，與基礎(chǔ)值相比MBV增加約152倍P＜005。2在胰島素輸注的情況下，給予氯沙坦后可觀(guān)察到MBV進(jìn)一步升高，與基礎(chǔ)值相比升高約3倍P＜005與對(duì)照組大鼠相比，氯沙坦給藥對(duì)GIR沒(méi)有進(jìn)一步影響P＞005。3在胰島素輸注的情況下同時(shí)給予PD123319輸注，可觀(guān)察到胰島素增加MBV的作用消失P＞005，與基礎(chǔ)值相比伴隨GIR顯著降低，與對(duì)照組大鼠相比，PD123319給藥后GIR下降約30％P＜005。結(jié)論1基礎(chǔ)AT1R和AT2R活性影響胰島素調(diào)節(jié)糖代謝的能力，AT1R活性限制胰島素刺激的骨骼肌處理葡萄糖的能力，AT2R活性對(duì)于胰島素正常調(diào)節(jié)糖代謝是必需的2基礎(chǔ)AT1R和AT2R活性影響骨骼肌微循環(huán)胰島素敏感性，AT1R活性限制胰島素增加骨骼肌微循環(huán)灌注的能力，AT2R活性對(duì)于保持骨骼肌微循環(huán)胰島素敏感性正常是必需的。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目論文題目骨巨細(xì)胞瘤生物學(xué)行為相關(guān)因素骨巨細(xì)胞瘤生物學(xué)行為相關(guān)因素的研究研究學(xué)科專(zhuān)業(yè)學(xué)科專(zhuān)業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)作者姓名作者姓名冉祥英冉祥英作者學(xué)號(hào)作者學(xué)號(hào)1107259518指導(dǎo)老師指導(dǎo)老師張惠箴張惠箴教授教授答辯日期答辯日期2013年05月上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期2013年5月10日

簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文葛根素對(duì)人牙周膜干細(xì)胞成骨分化作用的影響EFFECTSOFPUERARINONDIFFERENTIATIONOFHUMANPERIODONTALLIGAMENTSTEMCELLSINTOOSTEOBLASTSINVITRO課題來(lái)源廣東省中醫(yī)藥局20111263廣州市中醫(yī)藥局20122A011035學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)培養(yǎng)類(lèi)型培養(yǎng)層次所在學(xué)院吳琳琳蘭澤棟教授口腔臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)型碩士第一臨床學(xué)院2013年4月L、日廣州摘要激素替代療法已在臨床廣泛應(yīng)用，但是長(zhǎng)期使用雌激素會(huì)極大地提高乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等的發(fā)病率。而植物類(lèi)雌激素葛根素有效地彌補(bǔ)了這一缺陷，它能夠發(fā)揮雌激素樣作用如促進(jìn)骨密度增加和骨礦沉積。葛根素的英文名為PUERARIN，化學(xué)名為813D一葡萄吡喃糖4，7二羥基異黃酮，在4位和7位各有一個(gè)羥基，這兩個(gè)羥基與雌激素活性密切相關(guān)，其中4位羥基是與雌激素受體ESTROGENRECEPTOR，ER相結(jié)合的部位。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)越來(lái)越多的學(xué)者開(kāi)始探索葛根素在骨代謝方面的作用蔡花等研究表明葛根素對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS增殖及成骨分化有促進(jìn)作用；李斌斌等將葛根素分別作用于成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞發(fā)現(xiàn)葛根素通過(guò)抑制骨吸收刺激骨形成來(lái)調(diào)控骨代謝，其中抑制骨吸收的效果較強(qiáng)；金為旭將葛根素注射于拔牙窩周?chē)l(fā)現(xiàn)其能夠抑制剩余牙槽嵴的吸收并保存牙槽嵴的高度；鄭高利等研究了葛根異黃酮對(duì)去卵巢大鼠骨礦密度和骨強(qiáng)度的影響，發(fā)現(xiàn)去卵巢大鼠口服葛根異黃酮后，全身骨礦含量、骨礦密度和骨生物力學(xué)強(qiáng)度均有不同程度的改善，認(rèn)為葛根異黃酮對(duì)去卵巢引起的大鼠骨質(zhì)疏松癥具有明顯的防治作用，雌激素樣作用是其主要作用機(jī)理。雖然已明確葛根素對(duì)多種成骨前體細(xì)胞具有骨性誘導(dǎo)作用，但關(guān)于葛根素對(duì)人牙周膜干細(xì)胞HUMANPERIODONTALLIGAMENTSTEMCELLS，HPDLSCS成骨分化的調(diào)控作用尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬探討葛根素對(duì)HPDLSCS的成骨分化的影響，為其應(yīng)用于臨床防治牙槽骨吸收以及組織再生工程奠定理論基礎(chǔ)。第一章HPDLSCS的分離培養(yǎng)和鑒定目的體外分離、培養(yǎng)HPDLSCS，并進(jìn)行鑒定。方法1分離、培養(yǎng)HPDLSCS在供者知情同意的前提下，收集12～16歲因正畸拔除的雙尖牙，所選牙齒均無(wú)齲壞、根尖周疾病及牙周炎。將新鮮拔除的牙齒在超凈工作臺(tái)內(nèi)沖洗干凈后，仔細(xì)刮取根中1／3的牙周膜組織收集于離心管中，加入1IILL濃度為6MG／ML的膠原酶和1ML濃度為8MG／ML的DISPASE

簡(jiǎn)介：氫氧化鈣抑制牙髓卟咻單胞茵脂多糖骨破壞作用研究CALCIUMHYDROXIDESUPPRESSESTHEPORPHYROMONASENDODONTALISLIPOPOLYSACCHARIDEINDUCEDBONEDESTRUCTION導(dǎo)論文課題起止時(shí)間至Q生12月二2Q蘭生2月論文完成時(shí)間至Q壘生壘旦中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧2014年5月目錄一．摘要中文論著摘要????????????????????????1英文論著摘要????????????????????????6二．英文縮略語(yǔ)?????????????????????????12三．論文前言????????????????????????????一13日U舌????????????????????????????材料與方法?????????????????????????14實(shí)驗(yàn)結(jié)果??????????????????????????22討論????????????????????????????36結(jié)論????????????????????????????39四．本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)???????????????????40五．參考文獻(xiàn)??????????????????????????41六．附錄綜述????????????????????????????45在學(xué)期間科研成績(jī)??????????????????????57致謝????????????????????????????58個(gè)人簡(jiǎn)介??????????????????????????59

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建持續(xù)性心房纖顫AF犬模型，觀(guān)察其心房肌組織MICRNA1、29A、133A的基因表達(dá)與AF及心肌纖維化的關(guān)系。方法采用慢性快速心房起搏誘發(fā)持續(xù)性心房纖顫犬模型，并設(shè)置假手術(shù)組。應(yīng)用心臟超聲測(cè)量其心臟結(jié)構(gòu)大小，通過(guò)馬松（MASSON）三色法染色計(jì)算膠原容積分?jǐn)?shù)來(lái)評(píng)估纖維化程度，左心房LA心肌MICRNA1、29A、133A的MRNA水平表達(dá)采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）檢測(cè)。結(jié)果持續(xù)性心房纖顫模型犬造模后與造模前相比，心房?jī)?nèi)徑增大，射血分?jǐn)?shù)降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005），與假手術(shù)組相比，持續(xù)性心房纖顫模型組心房肌纖維化程度明顯增高，膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）明顯增加P＜001，且MICRNA1的MRNA表達(dá)水平明顯增加P＜005，MICRNA29A、133A的MRNA表達(dá)水平明顯下降P＜001，P＜005。結(jié)論心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及心房肌纖維化是心房纖顫發(fā)生及維持的重要基質(zhì)，在持續(xù)性心房纖顫模型犬心房組織中MICRNA1表達(dá)水平升高，MICRNA29A、133A表達(dá)水平降低，MICRNA表達(dá)的調(diào)控失衡可能是影響膠原代謝、促進(jìn)或抑制心肌纖維化，造成AF時(shí)心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的分子機(jī)制之一。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多益腎護(hù)骨方對(duì)廢用性骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型相關(guān)指標(biāo)影響的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的骨性關(guān)節(jié)炎OSTEOARTHRITIS，OA是一種慢性、漸進(jìn)性、退行性的關(guān)節(jié)病變，迄今為止其發(fā)病機(jī)理尚不清楚。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，基質(zhì)金屬蛋白酶家族MMPS日益成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究OA發(fā)病機(jī)制的熱點(diǎn)。本研究擬通過(guò)觀(guān)察基質(zhì)金屬蛋白酶313在OA與非OA患者滑膜中表達(dá)量的差異及相關(guān)性，探討二者在OA發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制，以期待為臨床治療OA尋求有效的干預(yù)靶點(diǎn)提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法選擇2013年2月2013年8月在石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨一科行膝關(guān)節(jié)鏡、關(guān)節(jié)置換、單純膝關(guān)節(jié)半月板損傷或截肢手術(shù)的患者60例（OA組和非OA組各30例），所有病例均經(jīng)本院骨科醫(yī)生和影像學(xué)檢查確診根據(jù)1995年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)關(guān)于OA的診斷標(biāo)準(zhǔn)。術(shù)中收集的滑膜組織在術(shù)后1小時(shí)內(nèi)用生理鹽水反復(fù)沖洗3次后取一半滑膜組織迅速置入液氮罐中，另一半置于10％中性多聚甲醛固定，待標(biāo)本集齊后應(yīng)用免疫組化和WESTERNBLOT方法檢測(cè)60例患者滑膜組織中MMP313的表達(dá)情況。將所得的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS170軟件處理，所有計(jì)數(shù)資料采用Χ2檢驗(yàn)及X士S表示，組間比較采用T檢驗(yàn)，同時(shí)將MMP3、MMP13蛋白進(jìn)行PEARSON相關(guān)性分析，以P結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示MMP313在OA與非OA患者滑膜中的表達(dá)有顯著性差異（Χ229702199，P＜001），且棕黃色的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)多定位胞漿，對(duì)OA組的MMP313蛋白表達(dá)行PEARSON相關(guān)性分析（R0845，P＜001），表明二者在OA滑膜中的表達(dá)呈正相關(guān)；WESTERNBLOT結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)MMP313蛋白在OA患者滑膜（1147士02191051士0248P結(jié)論MMP3、MMP13蛋白在OA組滑膜中表達(dá)量明顯高于非OA組，且兩者的表達(dá)具有正相關(guān)性，與骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可能作為診斷及判斷骨性關(guān)節(jié)炎的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

簡(jiǎn)介：骨骼肌成肌細(xì)胞移植治療心肌梗死是最有潛力的治療措施，目前多項(xiàng)研究顯示移植進(jìn)入心梗區(qū)域的同種異體骨骼肌成肌細(xì)胞的存活率非常低，一般24小時(shí)后的存活率低于20％，這已經(jīng)是不爭(zhēng)的事實(shí)，嚴(yán)重的影響了骨骼肌成肌細(xì)胞的治療效果。可能與同種異體骨骼肌成肌細(xì)胞移植進(jìn)入心肌梗死區(qū)誘發(fā)的炎癥和免疫反應(yīng)相關(guān)。TH17TREG細(xì)胞之間的免疫調(diào)節(jié)平衡可能在炎癥和免疫反應(yīng)過(guò)程中起到重要作用，因此，我們的研究明確了在骨骼肌成肌細(xì)胞移植過(guò)程中誘發(fā)了TH17TREG細(xì)胞之間的不平衡。VEGF不僅是血管形成的主要調(diào)節(jié)因子，而且在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中起到中要的作用。新型的納米顆粒高分支聚乙二胺HPAMAM作為一種非病毒的、低毒性的、高效的載體，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)的作用很小，可以保護(hù)攜帶的基因免于蛋白酶的消化分解。因此，我們選擇利用HPAMAM作為載體攜帶VEGF165基因轉(zhuǎn)染骨骼肌成肌細(xì)胞，然后移植進(jìn)入心梗區(qū)域，VEGF165可以在心梗區(qū)域緩慢的釋放，達(dá)到長(zhǎng)效的作用，有利于微血管的生成和生長(zhǎng)，有利于炎癥的緩解，從而緩解了TH17TREG細(xì)胞之間免疫調(diào)節(jié)的不平衡。第一部分骨骼肌成肌細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定，以及VEGF165基因的轉(zhuǎn)染目的分離C57BL6小鼠的骨骼肌成肌細(xì)胞，并在體外進(jìn)行培養(yǎng)、純化和鑒定。將CDNAVEGF165與表達(dá)載體納米顆粒超支化聚乙二胺HPAMAM結(jié)合后，轉(zhuǎn)染骨骼肌成肌細(xì)胞，檢測(cè)最佳轉(zhuǎn)染效率。方法注射01ML布比卡因預(yù)處理激34周小鼠體內(nèi)骨骼肌成肌細(xì)胞，48H后采用混合酶（Ⅱ型膠原酶DISPEASE）一步消化法和PERCOLL非連續(xù)密度梯度法提取骨骼肌成肌細(xì)胞，然后采用反復(fù)差速貼壁法純化骨骼肌成肌細(xì)胞。使用特異抗原DESMIN和ΑSARCOMERICACTIN鑒定骨骼肌成肌細(xì)胞。分別將04UG、06UG、08UG的CDNAVEGF165按照1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12的比例與HPAMAM結(jié)合，然后分別與2104的骨骼肌成肌細(xì)胞共培養(yǎng)4H，使用活細(xì)胞實(shí)時(shí)監(jiān)視儀CELLIQ細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)觀(guān)察轉(zhuǎn)染HPAMAMVEGF165表達(dá)載體的骨骼肌成肌細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和細(xì)胞數(shù)量變化，使用自由分布圖像軟件分析監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)。結(jié)果骨骼肌成肌細(xì)胞呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)，分離后3天左右貼壁，79天左右可見(jiàn)逐漸融合生長(zhǎng)，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、紡錘形，可呈線(xiàn)狀生長(zhǎng)，融合后可以形成肌管樣結(jié)構(gòu)。骨骼肌成肌細(xì)胞特異抗原DESMIN和ΑSARCOMERICACTIN呈陽(yáng)性表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示DESMIN陽(yáng)性的細(xì)胞占8234296％，ΑSARCOMERICACTIN陽(yáng)性的細(xì)胞占801339％，DESMIN和ΑSARCOMERICACTIN雙陽(yáng)性的骨骼肌成肌細(xì)胞占8122±323％。HPAMAMVEGF表達(dá)載體轉(zhuǎn)染骨骼肌成肌細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染條件是VEGF165質(zhì)粒的數(shù)量為04UG，V∶N為1∶8時(shí)，骨骼肌成肌細(xì)胞的增殖最接近正常細(xì)胞的生長(zhǎng)，而且分泌的VEGF達(dá)到最大值。結(jié)論采用混合酶一步消化法、PERCOLL非連續(xù)密度梯度法和反復(fù)差速貼壁法可以得到數(shù)量較多和純度較高的骨骼肌成肌細(xì)胞。HPAMAM表達(dá)載體可以攜帶VEGF165轉(zhuǎn)染骨骼肌成肌細(xì)胞，可以作為一種新型的低毒性的非病毒載體。第二部分急性心肌梗塞動(dòng)物模型的建立和移植骨骼肌成肌細(xì)胞治療急性心肌梗塞目的正確建立急性心肌梗塞模型，觀(guān)察骨骼肌成肌細(xì)胞移植治療急性心肌梗塞的可行性和有效性。方法使用氣體麻醉，左側(cè)開(kāi)胸的方式，直視下結(jié)扎前降支近端，形成急性前壁心肌梗塞，然后使用微量注射器分不同位點(diǎn)將骨骼肌成肌細(xì)胞注射進(jìn)入心肌梗塞周?chē)鷧^(qū)域，分為急性心梗組（AMI組）、單純骨骼肌成肌細(xì)胞移植組（AMIS組）和轉(zhuǎn)染HPAMAMVEGF165的骨骼肌成肌細(xì)胞移植組（AMIV組）。分別在術(shù)前、術(shù)后1D、術(shù)后1W和術(shù)后4W觀(guān)察小鼠體重的變化。分別在術(shù)前、術(shù)后即刻、術(shù)后1W、術(shù)后4W使用心超測(cè)量小鼠心功能，觀(guān)察EF的變化。然后在活體經(jīng)腎靜脈直接注射伊文氏藍(lán)觀(guān)察心肌梗塞的面積大小，取出心臟，使用TTC法觀(guān)察心肌梗塞的深度和范圍。心臟組織免疫組化染色觀(guān)察心梗周?chē)鶦D4T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的情況。結(jié)果制作小鼠心肌梗塞模型的成功率約為86％。在術(shù)前，AMI組、AMIS組和AMIV組三組小鼠體重之間無(wú)明顯差異。在術(shù)后1D，三組小鼠體重之間也未見(jiàn)明顯差異。然而，在術(shù)后1W，與AMI組小鼠體重（1658±035克）相比，AMIS組小鼠體重（1766±030克）和AMIV組小鼠的體重（1834±028克）均明顯增加P＜005，而且，與AMIS組小鼠體重（1766±030克）相比，AMIV組小鼠的體重（1834±028克）顯著增加P＜005。在術(shù)后4W，與AMI組小鼠體重（1650±035克）相比，AMIS組小鼠體重（1823±034克）和AMIV組小鼠的體重（1897±018克）均明顯增加P＜001，而且，與AMIS組相比，AMIV組小鼠的體重顯著增加P＜005。直視下可以清楚的看到心肌梗塞的位置和范圍，梗死范圍為左室前壁和心尖部，TTC實(shí)驗(yàn)顯示心肌梗死貫穿全層。在術(shù)前，三組正常小鼠的左室EF未見(jiàn)明顯差異P＞005。在術(shù)后即刻，三組小鼠的左室EF也未見(jiàn)明顯差異P＞005。然而，在術(shù)后1W，與AMI組（3154±323％）相比，AMIS組3794±229％和AMIV組（4628±244％）左室EF明顯升高P＜005，而且，與AMIS組相比，AMIV組左室EF明顯升高P＜005。在術(shù)后4W，與AMI組（3367±318％）相比，AMIS組（5628±283％）和AMIV組6373±333％左室EF明顯升高P＜005，而且，與AMIS組相比，AMIV組左室EF明顯升高P＜005。免疫組化染色可見(jiàn)心梗周?chē)鶦D4淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，在A(yíng)MIS組較為明顯。結(jié)論直視下冠脈結(jié)扎法可以有效地控制心肌梗塞的范圍，小鼠的心肌梗塞位置和范圍合適，符合實(shí)驗(yàn)的要求。移植骨骼肌成肌細(xì)胞和轉(zhuǎn)染HPAMAMVEGF的骨骼肌成肌細(xì)胞治療急性心肌梗塞能有效地恢復(fù)心功能。第三部分TH17TREG細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)平衡的變化目的探討移植骨骼肌成肌細(xì)胞治療心肌梗塞引起的TH17TREG不平衡，探討移植轉(zhuǎn)染HPAMAMVEGF165的骨骼肌成肌細(xì)胞治療急性心肌梗塞時(shí)，TH17TREG不平衡是否被緩解。方法術(shù)后1D、2D、4D、7D，分別使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟內(nèi)TREG細(xì)胞和TH17細(xì)胞的百分率，使用REALTIMEPCR分析脾臟和心臟組織中TREG細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子FOXP3和TH17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子RΓT的MRNA水平，使用BIOPLEX懸浮芯片分析血清中TREG細(xì)胞相關(guān)的調(diào)節(jié)細(xì)胞因子TGFΒ1、IL2、IL10和TH17細(xì)胞相關(guān)促炎癥細(xì)胞因子ILIΒ、IL6、IL17A，以及血清中VEGF的濃度。結(jié)果在A(yíng)MI組、AMIS組、AMIV組中，CD4CD25FOXP3TREG的百分率、轉(zhuǎn)錄因子FOXP3MRNA水平、相關(guān)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子TGFΒ1、IL2、IL10的濃度從手術(shù)后第一天開(kāi)始呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，到第7天的時(shí)候達(dá)到最小值。與AMI組相比，AMIS組TREG的百分率、轉(zhuǎn)錄因子FOXP3MRNA水平、相關(guān)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子TGFΒ1、IL2、IL10的濃度更低P＜005或者P＜001，而AMIV組TREG的百分率、轉(zhuǎn)錄因子FOXP3MRNA水平、相關(guān)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子TGFΒ1、IL2、IL10的濃度更高（P＜005或者P＜001）。然而，CD4IL17TH17細(xì)胞的百分率、轉(zhuǎn)錄因子RΓT的MRNA水平、相關(guān)促炎癥細(xì)胞因子IL1Β、IL6和IL17A的濃度呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，與AMI組相比，AMIS組TH17的百分率、轉(zhuǎn)錄因子RΓTMRNA水平、相關(guān)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子TGFΒ1、IL2、IL10的濃度明顯升高P＜005或者P＜001，而AMIV組TH17的百分率、轉(zhuǎn)錄因子RΓTMRNA水平、相關(guān)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL1Β、IL6、IL17A的濃度顯著降低（P＜005或者P＜001。結(jié)論骨骼肌成肌細(xì)胞移植治療急性心肌梗死，可以引起TH17TREG不平衡，可能導(dǎo)致移植的骨骼肌成肌細(xì)胞存活率下降，移植VEGF165基因可能緩解骨骼肌成肌細(xì)胞移植引起的TH17TREG不平衡。