腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF和TrkB在朊病毒中的作用研究.pdf

1、目的：
　　朊病毒病（又稱可傳播性海綿狀腦病，TSEs）是一種能夠感染人和其他多種哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)性疾病，它典型的神經(jīng)病理學(xué)特征主要有腦組織中出現(xiàn)海綿狀空泡樣變性、淀粉樣斑塊沉積、神經(jīng)元丟失和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生。BDNF是具有防止神經(jīng)元死亡功能的特殊蛋白質(zhì)，BDNF及其受體TrkB在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布廣泛，對(duì)神經(jīng)元的成長(zhǎng)、發(fā)育、分化和機(jī)體損傷修復(fù)都具有重要的作用。為了探討B(tài)DNF和TrkB在朊病毒病中可能的變化，我們以朊病毒株—

2、羊瘙癢因子263K顱內(nèi)感染的倉(cāng)鼠腦組織以及朊病毒穩(wěn)定感染的細(xì)胞系作為研究對(duì)象，以觀察BDNF和TrkB在朊病毒感染期間的表達(dá)變化，并深入探討其可能發(fā)揮的作用。
　　方法：
　?。?）顱內(nèi)接種羊瘙癢因子263K感染的倉(cāng)鼠終末期（80天）腦組織、接種后感染期第0天、20天、40天、60天和80天的倉(cāng)鼠腦組織以及朊病毒感染的細(xì)胞系SMB-S15細(xì)胞中，采用Western Blot方法和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)BDNF和TrkB蛋白的表

3、達(dá)水平變化。
　　（2）進(jìn)一步研究BDNF和TrkB與神經(jīng)元及PrPSc在感染朊病毒的腦組織和細(xì)胞中是否存在作用關(guān)系，利用免疫熒光化學(xué)雙重染色法檢測(cè)BDNF和TrkB在倉(cāng)鼠腦組織中的表達(dá)分布變化。
　?。?）應(yīng)用Western Blot和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)顱內(nèi)接種羊瘙癢因子263K感染的倉(cāng)鼠終末期（80天）腦組織、接種后感染期第0天、20天、40天、60天和80天的倉(cāng)鼠腦組織、朊病毒感染的細(xì)胞系SMB-S15細(xì)胞中BDNF

4、下游作用分子p-TrkB、GRB2和p75NTR的表達(dá)水平變化，探討B(tài)DNF在朊病毒病中的相關(guān)作用機(jī)制，探索BDNF-TrkB信號(hào)通路的改變?cè)陔貌《静≈械淖饔谩?br>　　結(jié)果：
　　經(jīng)Western Blot方法檢測(cè)顯示結(jié)果，首次提出了在可傳播性海綿狀腦病終末期BDNF和TrkB以及下游的作用分子的表達(dá)量均顯著降低，提示BDNF可能參與TSEs的發(fā)病。免疫熒光結(jié)果顯示BDNF主要與神經(jīng)元細(xì)胞共定位表達(dá)，與星形膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)。倉(cāng)鼠

5、接種感染期不同時(shí)間點(diǎn)腦組織樣本中BDNF表達(dá)量隨感染時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸下降，而相互作用的受體TrkB，尤其是磷酸化的TrkB（p-TrkB）隨著時(shí)間的依賴性也均有遞減的下降趨勢(shì)，這樣的下降趨勢(shì)與神經(jīng)元的丟失類似。相反，與在體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果不同的是，BDNF和TrkB及其下游的作用分子在朊病毒感染的細(xì)胞系SMB-S15細(xì)胞及其治愈型正常表達(dá)細(xì)胞系SMB-PS細(xì)胞中的表達(dá)量相比并無顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，我們通過West