十二指腸輸注利拉魯肽對肝糖代謝的影響與“腸-腦-肝軸”機制.pdf

1、第一部分.經(jīng)十二指腸持續(xù)輸注利拉魯肽通過激活GLP-1受體降低肝糖生成
　　目的:探討十二指腸持續(xù)輸注利拉魯肽對普食喂養(yǎng)大鼠肝臟葡萄糖生成的影響。
　　方法:300-350g雄性SD大鼠普食喂養(yǎng)，構(gòu)建大鼠十二指腸灌注系統(tǒng)，根據(jù)輸注液不同將大鼠分為生理鹽水組（saline組），利拉魯肽組(GLP-1組)，GLP-1受體拮抗劑—Exendin Fragment9-39組(Ex-9組)，利拉魯肽+Exendin Fragment9

2、-39組（GLP-1+Ex-9）組，利用3-3H葡萄糖為示蹤劑的胰腺（基礎(chǔ)胰島素）鉗夾技術(shù)評價各組大鼠糖代謝的變化。
　　結(jié)果:基礎(chǔ)胰島素鉗夾穩(wěn)態(tài)，GLP-1組葡萄糖輸注率（GIR）明顯高于saline組(7.4±0.3mg·kg-1·min-1 vs2.2±0.3mg·kg-1·min-1，P＜0.01）;GLP-1組肝糖輸出率（HGP）明顯低于saline組(10.2±0.5mg·kg-1·min-1 vs17.2±1.1mg

3、·kg-1·min-1, P＜0.01)；GLP-1和saline組肝糖輸出抑制率分別為48.7％和18.8%，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01)；共灌注GLP-1及Ex-9，十二指腸輸注GLP-1增加GIR，減少HGP的效應(yīng)減弱。各組間葡萄糖攝取率（GU）無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論:經(jīng)十二指腸輸注利拉魯肽通過激活腸GLP-1受體增加胰島素敏感性，減少肝糖輸出。
　　第二部分.十二指腸持續(xù)輸注利拉魯肽通過“腸-腦-

4、肝軸”調(diào)節(jié)糖代謝
　　目的:探討十二指腸利拉魯肽調(diào)節(jié)糖代謝的神經(jīng)通路機制。
　　方法：300-350g雄性SD大鼠普食喂養(yǎng)，構(gòu)建大鼠十二指腸灌注系統(tǒng)、第四腦室孤束核微量灌注系統(tǒng)、肝迷走神經(jīng)離斷等動物模型。實驗分為十二指腸輸注生理鹽水組（saline組），十二指腸輸注利拉魯肽組（GLP-1組），十二指腸輸注丁卡因組（tetracaine組），十二指腸輸注利拉魯肽+丁卡因（GLP-1+tetracaine組），十二指腸輸注生理鹽

5、水+第四腦室孤束核輸注MK-801組(NTS MK-801組)，十二指腸輸注利拉魯肽+第四腦室孤束核輸注MK-801組（GLP-1+ NTS MK-801組）,十二指腸輸注生理鹽水+肝迷走神經(jīng)離斷組（HVAG組），十二指腸輸注利拉魯肽+肝迷走神經(jīng)離斷組（GLP-1+HVAG組）。利用3-3H葡萄糖為示蹤劑的基礎(chǔ)胰島素鉗夾技術(shù)評價各組大鼠糖代謝的變化。Western blot法檢測各組大鼠肝臟PEPCK,G6Pase,IR/P-IR、IR

6、S/P-IRS、AKT/P-AKT等蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：十二指腸單獨給予丁卡因?qū)C體糖動力學(xué)無影響，聯(lián)合輸注丁卡因及利拉魯肽可阻斷十二指腸利拉魯肽增加葡萄糖輸注率及減低肝糖生成率的效應(yīng)，且該作用不依賴于血漿葡萄糖和胰島素的改變。同樣，鉗夾穩(wěn)態(tài)期間，單獨NTS輸注MK-801對機體糖動力學(xué)無影響，但其可阻斷十二指腸利拉魯肽增加葡萄糖輸注率及減低肝糖生成率的效應(yīng)，該作用不依賴于血漿葡萄糖和胰島素的改變。再者，接受肝臟迷走神經(jīng)離斷術(shù)后

7、的大鼠，十二指腸輸注利拉魯肽不能使葡萄糖輸注率增加，肝糖生成率降低，該作用不依賴于血漿葡萄糖和胰島素的改變。單獨肝臟迷走神經(jīng)離斷對糖代謝無影響。GLP-1組肝臟PEPCK和G6Pase蛋白水平明顯低于其他各組(均 P<0.05)，而P-IR、P-IRS-1及P-AKT水平則明顯高于其他各組（均P<0.05）。
　　結(jié)論：十二指腸輸注利拉魯肽通過“腸-腦-肝軸”調(diào)節(jié)肝臟葡萄糖輸出。
　　第三部分.GLP-1受體參與十二指腸輸注

8、脂質(zhì)影響糖代謝的過程
　　目的：探討十二指腸輸注脂質(zhì)影響糖代謝是否需要激活GLP-1受體。
　　方法：300-350g雄性SD大鼠普食喂養(yǎng)，構(gòu)建大鼠十二指腸灌注系統(tǒng),根據(jù)輸注液不同實驗分為：十二指腸輸注Ex-9組，十二指腸輸注脂質(zhì)（lipid組），十二指腸輸注脂質(zhì)+Ex-9組（lipid+Ex-9）組。利用3-3H葡萄糖為示蹤劑的基礎(chǔ)胰島素鉗夾技術(shù)評價各組大鼠胰島素敏感性和糖代謝的變化。
　　結(jié)果：基礎(chǔ)胰島素鉗夾穩(wěn)態(tài)，

9、lipid組GIR明顯高于Ex-9組(6.1±0.3mg·kg-1·min-1 vs2.8±0.3mg·kg-1·min-1，P＜0.001)，lipid組HGP明顯低于Ex-9組(11.2±0.9mg·kg-1·min-1 vs15.9±0.6mg·kg-1·min-1, P＜0.01)；lipid和saline組肝糖輸出抑制率分別為43.5%和26.4%，具有明顯差異（P＜0.05)；共灌注lipid及Ex-9，十二指腸輸注lipi

10、d增加GIR，減少HGP的效應(yīng)減弱。各組GU無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：十二指腸輸注lipid增加胰島素敏感性，降低肝臟葡萄糖輸出的效應(yīng)需要激活腸GLP-1受體。
　　第四部分.十二指腸持續(xù)輸注利拉魯肽激活腸粘膜PKC-δ分子調(diào)節(jié)肝臟葡萄糖輸出
　　目的：探討十二指腸輸注利拉魯肽影響糖代謝的腸內(nèi)分子機制。
　　方法：300-350g雄性SD大鼠普食喂養(yǎng)，構(gòu)建大鼠十二指腸灌注系統(tǒng),根據(jù)輸注液不同實驗分為

11、：十二指腸輸注saline組，十二指腸輸注GLP-1組，十二指腸輸注saline+PKC-δ特異性抑制劑Rottlerin(ROT)組，十二指腸輸注利拉魯肽+Rottlerin（GLP-1+ROT）組。利用3-3H葡萄糖為示蹤劑的基礎(chǔ)胰島素鉗夾技術(shù)評價各組大鼠糖代謝的變化。
　　結(jié)果：基礎(chǔ)胰島素鉗夾穩(wěn)態(tài)，GLP-1+ROT組GIR明顯低于GLP-1組(3.2±0.5mg·kg-1·min-1 vs7.4±0.3mg·kg-1·mi

12、n-1，P＜0.001)，而HGP則明顯高于saline組(16.8±1.0mg·kg-1·min-1 vs10.2±0.5mg·kg-1·min-1, P＜0.01)；GLP-1+ROT和GLP-1組肝糖輸出抑制率分別為22.9%和48.7%，具有明顯差異（P＜0.01)。各組GU無明顯差異（P>0.05）。共灌注利拉魯肽及Rottlerin，十二指腸輸注GLP-1增加GIR，減少HGP的效應(yīng)消失。
　　結(jié)論：十二指腸輸注利拉魯