轉(zhuǎn)染TDP-25對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬蛋白表達(dá)及細(xì)胞活力、凋亡的影響.pdf

1、背景：
　　肌萎縮性側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）是一種最常見(jiàn)且致命的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性肌無(wú)力、肌萎縮等，目前仍無(wú)有效的治療方案，最終常因呼吸衰竭或肺部感染而死亡，從發(fā)現(xiàn)臨床癥狀起，平均生存期一般為2-4年，10年的生存期的患者只占5-10％。額顳葉變性(frontotemporal lobar degeneration，F(xiàn)TLD）是一種較為常見(jiàn)的癡呆性疾病，主要以行

2、為異常、運(yùn)動(dòng)障礙和言語(yǔ)障礙等臨床癥狀為主，絕大數(shù)患者發(fā)病年齡在45-65歲之間，病程2-20年之間不等，平均8年左右，目前本病仍無(wú)法治愈。兩者的臨床癥狀和病理特點(diǎn)具有一定的重疊性，說(shuō)明它們可能是同一種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，只是選擇性地影響不同的易感神經(jīng)元。Neumann等人研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)ALS和FTLD-TDP患者腦組織中存在TDP-43陽(yáng)性包涵體，主要成分為泛素化、磷酸化的TDP-43及其截?cái)嘈推危═DP-25和TDP-35），然而關(guān)于

3、TDP-25的報(bào)道很少，它如何參與ALS和FTLD的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。
　　目的：
　　探討TDP-43截?cái)嘈推蜹DP-25對(duì)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)及細(xì)胞活力、凋亡的影響。
　　方法：
　　分別轉(zhuǎn)染GFP-N1、GFP-TDP-43和GFP-TDP-25三種質(zhì)粒的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y分為三組，24h后應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)包涵體的存在及其分布；應(yīng)用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白LC3、Beclin-1

4、的表達(dá)情況；將SH-SY5Y細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒GFP-TDP-25后分為兩組，一組加入3-MA自噬抑制劑，另一組不做處理，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力；Annexin-V-FITC/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.GFP-N1組細(xì)胞核、胞質(zhì)中均可見(jiàn)綠色熒光信號(hào)；GFP-TDP-43組綠色熒光信號(hào)主要分布于細(xì)胞核，未見(jiàn)明顯的TDP-43向胞質(zhì)中異位，且未見(jiàn)明顯的包涵體形成；GFP-TDP-25組較強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)呈顆粒狀分布

5、于細(xì)胞質(zhì)，形成了包涵體；
　　2.與GFP-N1組和GFP-TDP-43組相比，GFP-TDP-25組細(xì)胞中蛋白Beclin-1表達(dá)上調(diào)，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　3.與未加入3-MA組相比，加入3-MA后，過(guò)表達(dá)TDP-25細(xì)胞的細(xì)胞活力降低、細(xì)胞凋亡率增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　截短型片段TDP-25能夠在細(xì)胞中形成包涵體，過(guò)表