2,3-吲哚醌通過(guò)誘導(dǎo)自噬影響神經(jīng)母瘤細(xì)胞SH-SY5Y侵襲和遷移的研究.pdf

1、背景：起源于神經(jīng)嵴神經(jīng)外胚層的神經(jīng)母細(xì)胞瘤是兒童中常見的顱外實(shí)體瘤。腫瘤的轉(zhuǎn)移是大多數(shù)癌癥患者死亡的主要原因，是治療癌癥的重要挑戰(zhàn)。近年來(lái)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤治療的新方法逐漸集中在轉(zhuǎn)移的機(jī)制上。2,3-吲哚醌（Isatin）不僅作為一種海洋活性藥物發(fā)揮抗癌作用，而且是人體內(nèi)源性物質(zhì)，具有多種藥理學(xué)活性，如神經(jīng)保護(hù)，抗菌和抗病毒的活性。我們課題組以前的研究表明，Isatin可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，也可抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的侵襲和遷移，且

2、Isatin抑制細(xì)胞侵襲和遷移的機(jī)制可能與MMP2和MMP9的下調(diào)相關(guān)。然而，未見有關(guān)Isatin對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤自噬的影響及其與侵襲遷移關(guān)系之間的相關(guān)報(bào)道。本文在前人研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞系，研究Isatin對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞自噬的影響及其與侵襲和遷移的關(guān)系，并探討了可能的機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)神經(jīng)母瘤SH-SY5Y細(xì)胞，用不同濃度(100μmol/L，200μmol/L,300μmol/L)的Isati

3、n處理SH-SY5Y細(xì)胞，對(duì)照組的細(xì)胞不做藥物處理。采用transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲能力；Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組SH-SY5Y細(xì)胞的遷移能力；吖啶橙染色法檢測(cè)SH-SY5Y細(xì)胞的自噬溶酶體；Real-time PCR檢測(cè)SH-SY5Y細(xì)胞中mTOR信號(hào)通路中相關(guān)分子Rheb和mTOR的mRNA表達(dá)；Western blotting檢測(cè)自噬標(biāo)志性蛋白LC3和P62表達(dá)水平的變化及自噬相關(guān)信號(hào)通路蛋

4、白mTOR磷酸化水平。
　　結(jié)果：Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，Isatin可顯著抑制SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲和遷移能力。Isatin處理細(xì)胞后，SH-SY5Y細(xì)胞穿過(guò) Transwell小室的數(shù)量明顯減少，Isatin對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞侵襲抑制率分別為40.13%，53.16%和75.74%（P＜0.01）。Isatin對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞遷移的抑制率分別為48.1%，67.24%和83.87%（P＜0.0

5、1）。吖啶橙染色結(jié)果顯示，Isatin處理組具有橙紅色自噬囊泡的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比例隨著藥物濃度的提高而呈現(xiàn)出遞增的趨勢(shì)（P＜0.0001）。Real-time PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，隨Isatin濃度的增加，Rheb和mTOR mRNA表達(dá)顯著下降（P＜0.01）；Western blotting結(jié)果顯示，隨著Isatin濃度的增加，自噬標(biāo)志性蛋白LC3-II表達(dá)量顯著增加（P＜0.05），P62表達(dá)量顯著降低（P＜0.

6、01）；mTOR磷酸化水平顯著下降（P＜0.01），且呈濃度依賴關(guān)系。
　　結(jié)論：Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Isatin可顯著抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲和遷移。吖啶橙染色法檢測(cè)了SH-SY5Y細(xì)胞的自噬囊泡；Western blotting檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3-II和P62表達(dá)水平變化；結(jié)果提示，Isatin促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生自噬。Real-time PCR檢測(cè)Rheb、mTOR mRNA相對(duì)表達(dá)量