2,3-吲哚醌通過誘導自噬影響神經母瘤細胞SH-SY5Y侵襲和遷移的研究.pdf

1、背景：起源于神經嵴神經外胚層的神經母細胞瘤是兒童中常見的顱外實體瘤。腫瘤的轉移是大多數(shù)癌癥患者死亡的主要原因，是治療癌癥的重要挑戰(zhàn)。近年來對神經母細胞瘤治療的新方法逐漸集中在轉移的機制上。2,3-吲哚醌（Isatin）不僅作為一種海洋活性藥物發(fā)揮抗癌作用，而且是人體內源性物質，具有多種藥理學活性，如神經保護，抗菌和抗病毒的活性。我們課題組以前的研究表明，Isatin可以促進細胞凋亡，抑制細胞增殖，也可抑制神經母細胞瘤細胞的侵襲和遷移，且

2、Isatin抑制細胞侵襲和遷移的機制可能與MMP2和MMP9的下調相關。然而，未見有關Isatin對神經母細胞瘤自噬的影響及其與侵襲遷移關系之間的相關報道。本文在前人研究的基礎上，應用神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞系，研究Isatin對神經母細胞瘤細胞自噬的影響及其與侵襲和遷移的關系，并探討了可能的機制。
　　方法：培養(yǎng)神經母瘤SH-SY5Y細胞，用不同濃度(100μmol/L，200μmol/L,300μmol/L)的Isati

3、n處理SH-SY5Y細胞，對照組的細胞不做藥物處理。采用transwell侵襲實驗檢測各組SH-SY5Y細胞的侵襲能力；Transwell遷移實驗檢測各組SH-SY5Y細胞的遷移能力；吖啶橙染色法檢測SH-SY5Y細胞的自噬溶酶體；Real-time PCR檢測SH-SY5Y細胞中mTOR信號通路中相關分子Rheb和mTOR的mRNA表達；Western blotting檢測自噬標志性蛋白LC3和P62表達水平的變化及自噬相關信號通路蛋

4、白mTOR磷酸化水平。
　　結果：Transwell小室實驗結果顯示，與對照組相比，Isatin可顯著抑制SH-SY5Y細胞的侵襲和遷移能力。Isatin處理細胞后，SH-SY5Y細胞穿過 Transwell小室的數(shù)量明顯減少，Isatin對SH-SY5Y細胞侵襲抑制率分別為40.13%，53.16%和75.74%（P＜0.01）。Isatin對SH-SY5Y細胞遷移的抑制率分別為48.1%，67.24%和83.87%（P＜0.0

5、1）。吖啶橙染色結果顯示，Isatin處理組具有橙紅色自噬囊泡的陽性細胞數(shù)占總細胞數(shù)的比例隨著藥物濃度的提高而呈現(xiàn)出遞增的趨勢（P＜0.0001）。Real-time PCR結果顯示，與對照組相比，隨Isatin濃度的增加，Rheb和mTOR mRNA表達顯著下降（P＜0.01）；Western blotting結果顯示，隨著Isatin濃度的增加，自噬標志性蛋白LC3-II表達量顯著增加（P＜0.05），P62表達量顯著降低（P＜0.

6、01）；mTOR磷酸化水平顯著下降（P＜0.01），且呈濃度依賴關系。
　　結論：Transwell實驗結果顯示，Isatin可顯著抑制人神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞的侵襲和遷移。吖啶橙染色法檢測了SH-SY5Y細胞的自噬囊泡；Western blotting檢測自噬相關蛋白LC3-II和P62表達水平變化；結果提示，Isatin促進SH-SY5Y細胞發(fā)生自噬。Real-time PCR檢測Rheb、mTOR mRNA相對表達量