基于iTRAQ技術分析煙堿誘導SH-SY5Y細胞及大鼠海馬體的差異表達蛋白研究.pdf

1、煙堿是煙草中獎勵習慣性抽吸的主要成分。反復暴露于煙堿可以導致蛋白質表達水平的改變，這種改變不僅參與調節(jié)單個神經(jīng)元和相關神經(jīng)回路，還可能影響成癮相關的異常行為。因此，識別煙堿誘導和參與煙堿依賴形成相關的蛋白質是理解煙堿成癮潛在分子機制的關鍵。蛋白質組學技術可以獲得煙堿誘導過程中整體蛋白質組的動態(tài)變化，后續(xù)生物信息學分析如基因本體注釋（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路注釋，對于獲得煙堿誘導蛋白質的作用靶點、生物過程和相關通路

2、具有重要意義。本研究分別從細胞水平和動物水平研究了煙堿誘導人神經(jīng)元細胞和大鼠海馬體蛋白質的差異表達。主要研究內(nèi)容包括以下兩個部分：
　　一、在體外研究中，人神經(jīng)母瘤細胞（SH-SY5Y）作為煙堿誘導相關蛋白質表達的細胞系，在煙堿暴露濃度為1 mM下，基于同位素標記相對和絕對定量（iTRAQ）蛋白質組學技術結合納升液相色譜四極桿飛行時間串聯(lián)質譜（nano-LC-Q-TOF）初步鑒定了煙堿誘導神經(jīng)元蛋白質的差異表達，并對差異蛋白質進行

3、生物信息學分析。結果共鑒定篩選出132種差異表達的蛋白質，其中蛋白酶體、真核翻譯起始因子、氨酰-tRNA合成酶、核糖體蛋白和 ALDH18A1位于蛋白質互作網(wǎng)絡的中心，特別是參與絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）級聯(lián)生物過程和蛋白酶體信號通路的蛋白酶體蛋白，可能在煙堿誘導神經(jīng)元蛋白質的表達中發(fā)揮重要作用。
　　二、在體內(nèi)研究中，在煙堿給藥劑量為0.2 mg/kg/d的條件下建立煙堿誘導大鼠條件性位置偏愛（CPP）模型，在此模型的基礎上

4、，基于iTRAQ蛋白組學技術結合nano-LC-Q-TOF分析了煙堿誘導 CPP大鼠海馬體中蛋白質的差異表達。結果共鑒定篩選出127種差異表達的蛋白質，其中117種顯著下調，10種顯著上調。并使用反轉錄酶-聚合酶鏈鎖反應（RT-PCR）對7種差異蛋白質在基因表達水平上進行驗證。生物信息學分析的結果表明差異表達的蛋白質主要參與鈣介導的信號調節(jié)、神經(jīng)遞質傳導、γ-氨基丁酸（GABA）能突觸和長期突觸增強效應等生物過程，表明煙堿可能作用于nA